葉　淦， 方大琳， 王聯(lián)德*

(1.贛州市果業(yè)局， 江西 贛州 341000；

2.福建農(nóng)林大學植物保護學院， 福建 福州 350002)

蠟蚧輪枝菌代謝粗提物對煙草上煙粉虱和煙蚜的殺蟲活性

葉淦1， 方大琳2， 王聯(lián)德2*

(1.贛州市果業(yè)局， 江西 贛州 341000；

2.福建農(nóng)林大學植物保護學院， 福建 福州 350002)

摘要:測定了3株蠟蚧輪枝菌Lecanicillium lecanii的代謝粗提物(toxinV3450、toxinVp28、toxinVl6063)對煙草兩種害蟲煙粉虱Bemisia tabaci和煙蚜Myzus persicae的殺蟲活性。結(jié)果表明，3株菌株的代謝粗提物對煙粉虱3齡若蟲和煙蚜無翅母蚜均具有較強殺蟲活性， 3株菌株的代謝粗提物對煙粉虱3齡若蟲的LC50分別為0.11%、0.23%和0.18% ；對煙蚜的LC50分別為0.14%、0.35%和0.29%。表明V3450菌株的代謝粗提物對煙粉虱3齡若蟲和煙蚜的殺蟲活性最強，Vp28菌株的代謝粗提物toxinVp28的殺蟲活性次之，Vl6063菌株的代謝粗提物toxinVl6063殺蟲活性最弱。

關鍵詞:煙草害蟲; 煙粉虱; 煙蚜; 蠟蚧輪枝菌； 代謝粗提物; 殺蟲活性

真菌毒素在昆蟲疾病和致死過程中起重要作用(王聯(lián)德等，2007)。蠟蚧輪枝菌Lecanicilliumlecanii在侵染昆蟲過程中，毒素同樣起重要作用。1978年日本學者首次報道了對蠟蚧輪枝菌毒素的研究，證實了從蠟蚧輪枝菌和白僵菌中提取對家蠶有毒殺作用的活性物質(zhì)，并對活性物質(zhì)的化學結(jié)構(gòu)和生物活性作了研究(Kanaokaetal.,1978)；1982年英國學者也對此菌具有殺蟲活性的物質(zhì)作了研究(Claydon and Grove，1982) ；1994年以色列Gindin等研究了該菌粗提物對煙粉虱Bemisiatabaci、棉蚜Aphisgossypi、菊蚜Acythosiphonpisum有毒殺作用(Gindinetal.,1994)；李國霞等(1995)、王克勤等(2000)分別研究了蠟蚧輪枝菌Vl10095R,Tri-Ba81菌株的代謝粗提物對溫室白粉虱Trialeurodesvaporariorum和麥長管蚜Sitobionavenae、棉蚜Aphisgossypi等害蟲的殺蟲活性。我們在提取了蠟蚧輪枝菌代謝粗提物, 并分析了代謝粗提物對煙粉虱的忌避作用和拒食作用的基礎上(王聯(lián)德和黃建，2006;Wangetal.,2007)，進一步測試了蠟蚧輪枝菌代謝粗提物對煙草兩種害蟲煙粉虱和煙蚜Myzuspersicae的殺蟲活性。

1 材料與方法

1.1供試蠟蚧輪枝菌代謝粗提物

生物測定所用蠟蚧輪枝菌代謝粗提物為蠟蚧輪枝菌V3450、Vp28、Vl6063菌株的代謝粗提物粗提物(濃縮至代謝粗提物干物質(zhì)含量為10 gDW/100 mL，即濃度為10%(w/v))，提取方法按王聯(lián)德和黃建(2006)和 Wangetal.(2007)。試驗時按所需濃度用含0.03%吐溫80的蒸餾水溶液稀釋配成組分活性測定用V3450菌株代謝粗提物的2個活性組分(Toxin-X和Toxin-VII)(王聯(lián)德和黃建，2006；Wangetal.，2007)，其供試濃度用含0.01%丙酮的0.03%吐溫80的水溶液稀釋成0.5%(5 mg/mL)、0.1%、0.05%、0.02%。

1.2供試昆蟲

試驗所用煙粉虱為福建農(nóng)林大學植物保護學院玻璃溫室多年飼養(yǎng)的煙粉虱；殺蟲活性測定所用無翅母蚜為福建農(nóng)林大學植物保護學院玻璃溫室煙草上采集。飼養(yǎng)溫度為28 ℃左右，相對濕度70%-90%。

1.3供試昆蟲寄主植物

生物測定所用煙粉虱和煙蚜寄主植物均為煙草Nicotianatabacum。

1.4蠟蚧輪枝菌代謝粗提物的殺蟲測定

所用V3450、Vp28、Vl6063菌株的代謝粗提物(toxinV3450、toxinVp28、toxinVl6063)用5 mL丙酮(濃度為0.01%(w/v))溶解，然后用含0.03%吐溫80的蒸餾水溶液配成5個濃度的處理液(即1%、0.4%、0.2%、0.1%、0.05%)。測試環(huán)境為空調(diào)養(yǎng)蟲室(25±3 ℃、70±5% RH、L：D=14：10)。

1.5對煙粉虱3齡若蟲的殺蟲活性測定

將載蟲(3齡若蟲)的煙葉片浸于上述濃度的代謝粗提物藥液中，30 s后取出，待藥水晾干后，將葉片的葉柄插入植物營養(yǎng)液浸泡過的花泥上，用高9 cm、φ 4 cm的玻璃罩罩住，罩口蓋以保鮮膜(保鮮膜用昆蟲針扎孔)，置于空調(diào)養(yǎng)蟲室。每處理設5個濃度，每濃度設3次重復，每重復接入20頭煙粉虱3齡若蟲，每重復噴1 mL藥液。48 h后在40倍解剖鏡下觀察煙粉虱3齡若蟲存活情況，計算48 h后的校正死亡率和若蟲存活情況，干癟若蟲或停留在3齡的若蟲視為死亡。

1.6對煙蚜無翅成蟲的殺蟲活性測定

參照李國霞等(1995)方法并作改進，用手持噴霧器對帶煙蚜無翅母蚜的煙葉(每葉煙蚜20頭)噴霧。待水珠滴干，將葉片置于浸水的海綿上，葉片與海綿之間墊一吸水濾紙，置于9 cm培養(yǎng)皿，上罩一玻璃罩(高9 cm、φ 4 cm)，罩口蓋扎孔的保鮮膜，置于空調(diào)養(yǎng)蟲室。每處理設5個濃度，每濃度設3次重復，每個重復接入20頭煙粉虱3齡若蟲，每重復噴1 mL藥液。48 h后在40倍解剖鏡下觀察無翅成存活情況，計算48 h后的校正死亡率和無翅成蚜存活情況。

2結(jié)果與分析

2.1蠟蚧輪枝菌毒素的殺蟲活性

以煙粉虱3齡若蟲、煙蚜無翅成蟲為試蟲，測定了蠟蚧輪枝菌3株菌株(V3450、Vp28和Vl6063)的代謝粗提物的殺蟲活性，結(jié)果見表1。

表1　蠟蚧輪枝菌代謝粗提物對煙粉虱和煙蚜的殺蟲活性

注： 表中為平均值±標準誤，采用Duncan多重比較，同一列不同字母表示在0.05水平上差異顯著。

菌株V3450代謝粗提物處理48 h后，煙粉虱3齡若蟲的死亡率為24.30 %-92.40%，煙蚜無翅成蟲的死亡率為22.37 %-90.53%；菌株Vp28代謝粗提物處理48 h后，煙粉虱3齡若蟲的死亡率為11.66 %-82.55%，煙蚜無翅成蟲的死亡率為13.51 %-79.31%；菌株Vl6063代謝粗提物處理48 h后，煙粉虱3齡若蟲的死亡率為17.43 %-84.21%，煙蚜無翅成蟲的死亡率為14.28 %-79.93%。

3株菌株的代謝粗提物均對煙粉虱和煙蚜具有較強殺蟲活性，5個濃度作用下的死亡率均與對照差異顯著。3株菌株的代謝粗提物對煙粉虱3齡若蟲的LC50分別為0.11%、0.23%和0.18% ；對煙蚜的LC50分別為0.14%、0.35%和0.29%(表2)。表明V3450對煙粉虱3齡若蟲和煙蚜的代謝粗提物最強，Vp28次之，Vl6063最弱?？蛇M一步研究3株菌株的代謝粗提物對煙粉虱的生物活性。

表2　蠟蚧輪枝菌代謝粗提物對煙粉虱和煙蚜的LC50

注： 表中**為F檢驗差異極顯著。

3討論

蠟蚧輪枝菌代謝粗提物對煙草主要刺吸式害蟲煙粉虱、煙蚜的殺蟲活性測定表明，蠟蚧輪枝菌毒素對煙粉虱和煙蚜具有較高的殺蟲活性，蠟蚧輪枝菌代謝粗提物對煙粉虱的敏感性最強，因此可作為煙草主要害蟲煙粉虱、煙蚜的殺蟲物質(zhì)而進一步研究。蠟蚧輪枝菌代謝粗提物對煙粉虱等刺吸式害蟲除了具觸殺作用外，還具有忌避和拒食作用(王聯(lián)德和黃建，2006；Wangetal.,2007)，低劑量的毒素雖不能殺死昆蟲，但是能抑制昆蟲取食，使昆蟲饑餓致死，還能抑制成蟲產(chǎn)卵(Wangetal.,2007)。有望開發(fā)成為用于防治害蟲的殺蟲劑。

參考文獻

李國霞,高希武,劉青春,嚴毓驊.1995.蠟蚧輪枝菌的發(fā)酵培養(yǎng)及其代謝產(chǎn)物對害蟲毒殺作用的初步研究.北京農(nóng)業(yè)大學學報,21(4)：409-415.

王克勤,李新民,劉春來,許國慶.2000.蠟蚧輪枝菌毒素防治溫室白粉虱的初步研究.植物保護,26(4)：44-45.

王聯(lián)德,黃建,王宗華.2007.昆蟲病原真菌的毒素種類及其結(jié)構(gòu)與作用方式.見：李典謨等主編,昆蟲學研究動態(tài),北京：中國農(nóng)業(yè)科技出版社,270-275.

王聯(lián)德,黃建.2006.蠟蚧輪枝菌Lecanicilliumlecanii次生代謝產(chǎn)物對煙粉虱Bemisiatabaci的忌避作用模型,江西農(nóng)業(yè)大學學報, 28(2)：195-199.

Claydon N,Grove JF.1982.Insecticidal secondary metabolic products from the entomopathogenous fungusVerticilliumlecanii.Journal of Invertebrate Pathology,40:413-418.

Gindin G,Barash I,Harari N,Raccah B.1994.Effect of endotoxic compounds isolated fromVerticilliumlecaniion the sweetpotato whitefly,Bemisiatabaci.Phytoparasitica,22(3):189-196.

Kanaoka M,Isogal A,Murakoshi S,Ichine M,Suzuki A,Tamura S.1978.Bassianolide,a new insecticidal cyclodepsipeptide fromBeauveriabassianaandVerticilliumlecanii.Agricultural Biological Chemistry,42(3):629-635.

Wang LD,Huang J,You MS,Guan X,Liu B.2007.Toxicity and feeding deterrence of crude toxin extracts ofLecanicillium(Verticillium)lecanii(Fungi:Hyphomycetes)against sweet potato whitefly(Bemisiatabaci;Hom.,Aleyrodidae).Pest Management Science,63(4): 381-387.

(責任編輯：陳曉雯)

葉淦，方大琳，王聯(lián)德.2015.蠟蚧輪枝菌代謝粗提物對煙草上煙粉虱和煙蚜的殺蟲活性.武夷科學，31：109-112.

Insecticidal activity of crude metabolite extracts fromLecanicilliumlecanii

againstBemisiatabaciandMyzuspersicaeon tobacco

Gan YE1， Da-Lin FANG2, Lian-De WANG2*

(1.FruitIndustryBureauofGanzhouCity,Ganzhou,Jiangxi341000,China;

2.CollegeofPlantProtection,FujianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou,Fujian350002,China)

Abstract:Crude metabolite toxins (toxinV3450，toxinVp28and toxinVl6063)extracted from Lecanicillium lecanii (Fungi: Hyphomycetes) strain V3450, Vl6063 and Vp28, respectively) were tested for contact toxicity activity against two tobacco pests Bemisia tabaci (Gennadius) (Hemiptera, Aleyrodidae) and Myzus persicae (Sulzer) (Hemiptera, Aphididae). The results showed that crude metabolites extracted from 3 strains of L.Lecanii exhibited high insecticidal toxicity against the third instar nymphs of B.tabaci and wingless adults of M.persicae, with values of LC50to the third instar nymphs of B.tabaci were 0.11%, 0.23% and 0.18%, respectively; values of LC50to wingless adults of M.persicae 0.14%, 0.35% and 0.29%, respectively. ToxinV3450exhibited the highest insecticidal toxicity against the third instar nymphs of B.tabaci and wingless adult of M.persicae, followed by toxinVp28. ToxinVl6063exhibited the lowest insecticidal toxicity against the third instar nymphs of B.tabaci and wingless adult of M.persicae.

Key words:tobacco pest; Bemisia tabaci; Myzus persicae; Lecanicillium lecanii; crude metabolite toxin; insecticidal activity

中圖分類號:Q142； Q939.9

文獻標識碼:A

文章編號：1001-4276-(2015)01-0109-04

作者簡介：葉淦(1964-)，男，本科。研究方向：農(nóng)作物病蟲害防治與技術推廣。Email：yegan12@126.com。*通訊作者王聯(lián)德(1967-),男，博士，教授。研究方向：害蟲微生物防治與蟲生真菌。Email：wangliande@126.com。

基金項目：中國煙草總公司福建省公司科技項目(閩煙科2013[2號])；公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(200803005)。

收稿日期：2015-10-10; 發(fā)表日期：2015-10-31