謝　所

(安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院，安徽 合肥　230051)

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頂空毛細(xì)管氣相色譜法測定拉夫替丁中的殘留溶劑

謝所

(安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院，安徽 合肥230051)

摘要：目的建立拉夫替丁中乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、三氯甲烷、苯、吡啶與甲苯等9種有機(jī)溶劑殘留量的檢測方法。方法用頂空進(jìn)樣毛細(xì)管氣相色譜法，F(xiàn)ID檢測器，DB-624(30.0 m×0.53 mm,3.0 μm)毛細(xì)管色譜柱，程序升溫，進(jìn)樣口溫度220℃，檢測器溫度260℃。結(jié)果有機(jī)溶劑均完全分離，在所考察的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r為0.998 5～0.999 9，平均回收率為97.0%～101.6%。結(jié)論該方法靈敏、準(zhǔn)確、可靠，可用于拉夫替丁的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：頂空毛細(xì)管氣相色譜法；拉夫替丁；殘留溶劑

拉夫替丁為H2受體阻滯藥，可持續(xù)控制胃酸分泌，主要用于胃潰瘍和十二指腸潰瘍[1]。該原料藥目前國內(nèi)國有三家生產(chǎn)企業(yè)，各生產(chǎn)企業(yè)因工藝不同所涉及的溶劑也各不相同，表現(xiàn)在各自執(zhí)行的檢測標(biāo)準(zhǔn)中溶劑殘留的檢驗(yàn)項(xiàng)不論是溶劑的種類還是檢測方法都有較大差異，且三家生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)工藝流程都較長，在合成過程中都使用了多種有機(jī)溶劑，這些溶劑會對人體的健康和環(huán)境造成危害，根據(jù)我所標(biāo)準(zhǔn)提高任務(wù)中征集到的其中2家不同企業(yè)的拉夫替丁合成工藝資料，主要涉及到9種有機(jī)溶劑，按照人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(ICH)的指導(dǎo)原則[2]，這些殘留溶劑必須予以控制。本文參考相關(guān)文獻(xiàn)[3-11]，采用頂空毛細(xì)管氣相色譜法，以二甲亞砜為溶劑，同時(shí)測定9種有機(jī)溶劑的殘留量，操作簡便、結(jié)果可靠。

1儀器與試劑

1.1儀器美國Agilent7890N氣相色譜儀，氫火焰檢測器，CTC PAL頂空進(jìn)樣器，Agilent DB-624毛細(xì)管色譜柱(30 m× 0.53 mm，3.00 μm)，瑞士梅特勒 XS205電子天平。

1.2試劑拉夫替丁(樣品①：由安徽貝克聯(lián)合制藥有限公司提供，批號1003001、1011001、1106001；樣品②：由四川新元制藥有限公司提供，批號100701、100702、100703)；二氯甲烷、三氯甲烷、苯、吡啶、甲苯均為分析純，正己烷、乙酸乙酯、乙腈、四氫呋喃、二甲亞砜均為色譜純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜條件：DB-624毛細(xì)管色譜柱(30 m× 0.53 mm，3.00 μm)；柱溫：35℃維持20 min，再以5 ℃·min-1的速率升溫至110℃，保持5 min；分流進(jìn)樣，分流比為3∶1；進(jìn)樣口溫度為220℃；檢測器：FID檢測器，檢測器溫度為260℃，頂空進(jìn)樣，平衡溫度為80℃，平衡時(shí)間為30 min；載氣為N2，流速3.0 mL·min-1。

2.2對照品溶液與供試品溶液的配制

2.2.1對照品溶液的配制精密稱取甲苯111 mg、吡啶25 mg、苯0.25 mg、三氯甲烷7.5 mg、四氫呋喃90 mg、乙酸乙酯625 mg、正己烷36 mg、二氯甲烷75 mg、乙腈51 mg，于一相同250 mL量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液的儲備液。精密量取對照品溶液的儲備液10 mL，置100 mL量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置頂空瓶中，密封，作為對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的配制取本品約0.25 g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加二甲亞砜5 mL使溶解，密封，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3空白溶液精密量取二甲亞砜5 mL，置頂空瓶中，密封，作為空白溶液。

2.3系統(tǒng)適用性考察精密量取對照品溶液、供試品溶液和空白溶液各5 mL，分別置頂空瓶中，密封，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1。

圖1色譜圖

注：1.乙腈；2.二氯甲烷；3.正己烷；4.乙酸乙酯；5.四氫呋喃；6.三氯甲烷；7.苯；8.吡啶；9.甲苯。

結(jié)果表明：9種殘留溶劑分離良好，二甲亞砜不干擾測定，各色譜峰理論板數(shù)均不低于8 000。

2.4線性關(guān)系考察精密量取對照品溶液的儲備液0.3、0.5、0.8、1.0、1.5、3.0、5.0 mL，分別置不同的10 mL量瓶中，用二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件進(jìn)行檢測，記錄色譜圖，檢測結(jié)果見表1。

表1　9種溶劑回歸方程與線性關(guān)系考察結(jié)果

2.5精密度試驗(yàn)精密量取同一對照品溶液6份，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，9種溶劑分別為甲苯、吡啶、笨、三氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、乙腈峰面積的RSD分別為0.3%、1.9%、1.1%、2.1%、0.4%、0.6%、1.1%、1.1%、0.8%。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)按“2.2”供試品溶液制備項(xiàng)下制取供試品溶液共6份，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，批號為(100701)樣品中乙酸乙酯檢出，其含量為0.035%，RSD為1.2%；其余8種溶劑分別為乙腈、二氯甲烷、正己烷、四氫呋喃、三氯甲烷、苯、吡啶、甲苯均未檢出。

2.7準(zhǔn)確度(回收率)試驗(yàn)取已知溶劑含量的樣品(批號：1003001)約0.5 g，精密稱定，共6份，分別置10 mL量瓶中，每份精密加入對照品貯備液1 mL，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，按“2.2”分別制得供試品溶液和對照品溶液，精密量取對照品溶液和供試品溶液各5 mL，分別置頂空瓶中，立即密封，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算回收率，甲苯、吡啶、笨、三氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、乙腈的平均回收率分別為101.5%、99.4%、100.2%、97.6%、101.6%、98.2%、97.0%、100.5%、98.5%，RSD 分別為1.4%、2.3%、1.8%、1.8%、0.7%、2.1%、0.9%、0.5%、0.7%。

2.8檢測限試驗(yàn)分別取9種有機(jī)溶劑適量，精密稱定，以二甲亞砜為溶劑，制程適當(dāng)濃度的溶液，在上述色譜條件下測定，以信噪比S/N=3計(jì)算檢測限，結(jié)果乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、三氯甲烷、苯、吡啶與甲苯檢出限分別為0.4、1.1、0.000 014、0.6、0.4、3.0、0.07、0.2、0.089 mg·L-1。

2.9樣品含量測定取不同批號的樣品六批(批號分別為1003001、1011001、1106001、100701、100702、100703)約0.25 g，精密稱定，分別置頂空瓶中，各精密加二甲亞砜5 mL使溶解，密封，作為供試品溶液；取精密度項(xiàng)下溶液作為對照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果見表2。

表2　殘留溶劑測定結(jié)果

3結(jié)果與討論

色譜柱的確定，由于拉呋替丁生產(chǎn)工藝中用到大量的有機(jī)溶劑，為了較好的分離各殘留溶劑，實(shí)驗(yàn)中用了不同極性不同生產(chǎn)廠家的毛細(xì)管柱進(jìn)行測定比較，如HP-1、HP-5、HP-INNO-Wax、DB-624等，結(jié)果用HP-1、HP-5，三氯甲烷與四氫呋喃難以分離，甚至出現(xiàn)重疊峰，用HP-INNOWax色譜柱，雖然吡啶峰形及響應(yīng)值有所提高，但部分組分未能檢出，用DB-624毛細(xì)管后，峰形較佳，各峰分離較好。

柱溫及其他色譜條件的選擇，經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)，最終確定最佳的柱溫、頂空溫度及頂空平衡時(shí)間，使其達(dá)到最佳的分離效果。

苯、吡啶和三氯甲烷在本次擬定方法的中，雖然響應(yīng)值稍低，但檢出信號均能滿足實(shí)驗(yàn)要求；三氯甲烷雖然通過ECD檢測器檢測能夠提高檢測的靈敏度，但部分組分不能檢出，為了經(jīng)濟(jì)、環(huán)保，本次實(shí)驗(yàn)方法中未采用ECD為檢測器和FID為檢測器兩個(gè)系統(tǒng)，統(tǒng)一選擇應(yīng)用范圍廣泛的FID為檢測器。

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收稿日期：(2015-02-03，修回日期：2015-05-29)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.11.013