劉桂蘭　孫　萍　鐘海平　吳正庚

南昌大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，江西省南昌市　330006

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肺炎支原體肺炎患兒血清IL-37、IL-18水平變化的研究

劉桂蘭孫萍鐘海平吳正庚

南昌大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，江西省南昌市330006

MPP是小兒肺炎常見的種類之一，近年來其發(fā)病率明顯增高，并且呈小年齡化趨勢[1]，肺炎支原體(MP)已成為小兒下呼吸道感染的重要病原，反復感染后還可引起慢性咳嗽、反復喘息,與支氣管哮喘有關(guān)，可能對哮喘的產(chǎn)生、加重、慢性化起了一定作用[2],發(fā)病機制仍不十分清楚，目前認為機體在MP感染后產(chǎn)生強烈的免疫應答反應是MPP最為重要的發(fā)病機制[3]。

IL-18是一個重要的前炎癥細胞因子，在多種炎癥性疾病中都升高； IL-37作為一個抗炎細胞因子而受到廣泛重視，其抗炎作用與IL-18關(guān)系密切，但MPP患兒血清IL-37水平變化及其與病情的關(guān)系如何？IL-37、IL-18二者的關(guān)系如何？國內(nèi)未見相關(guān)報道,因此，本研究通過檢測MPP患兒急性期和恢復期血清IL-37、IL-18水平變化，通過與正常兒童對照，探討血清IL-37、IL-18在肺炎支原體肺炎中的作用及與病情的關(guān)系，從而進一步探討肺炎支原體肺炎的免疫學發(fā)病機制,為臨床治療肺炎支原體肺炎提供新的方法及一定的理論依據(jù)。

1資料和方法

1.1一般資料選取2014年3-12月在我院兒科住院確診為MPP的患兒40例為MPP組，其中男21例，女19例；年齡1～10歲，平均年齡(4.18±1.99)歲；另選同期健康體檢兒童40例為對照組，其中男17例，女23例，年齡1～10歲，平均年齡(4.58±1.96)歲，兩組男女性別組成及年齡比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。

1.2入選標準MPP急性期診斷符合諸福棠《實用兒科學》中診斷標準[4]，重癥MPP的診斷標準參考俞珍惜等[5]文獻?；謴推冢阂约毙园l(fā)作期患兒經(jīng)阿奇霉素治療，體溫正常至少2周以上，咳嗽、咳痰等臨床癥狀明顯緩解或消失；肺部體征及X線表現(xiàn)消失或明顯減輕。入選MPP組患兒需排除有過敏性疾病、哮喘及心、肝、腎臟器質(zhì)性疾病史。排除結(jié)核、細菌等其他病原微生物感染；入選前未經(jīng)大環(huán)內(nèi)酯類藥物、激素及免疫調(diào)節(jié)劑治療。對照組，近4周無任何感染、過敏性疾病及藥物服用史，無器質(zhì)性疾病史。

1.3實驗方法采集MPP組患兒入院治療前、恢復期及對照組兒童的靜脈血測定各項指標；IL-37、IL-18及MP-IgM的測定嚴格按：人IL-37及IL-18酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒(廈門慧嘉生物科技有限公司提供CUSABIO試劑盒)、肺炎支原體抗體檢測試劑盒(被動凝集法，珠海麗珠試劑股份有限公司)說明書進行操作。

1.4統(tǒng)計學處理采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對所得數(shù)據(jù)進行處理，資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(±s)表示,性別差異比較采用χ2檢驗；各組樣本均數(shù)比較方差齊性分析后采用t檢驗；相關(guān)性分析采用pearson直線相關(guān)分析；P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1MPP組急性期、恢復期和對照組血清IL-37、IL-18水平的比較MPP組急性期血清IL-37、IL-18水平均高于恢復期及對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，MPP組恢復期IL-37、IL-18水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，見表1。

表1　MPP組急性期、恢復期和對照組血清IL-37、IL-18水平的比較(±s，pg/ml)

表1　MPP組急性期、恢復期和對照組血清IL-37、IL-18水平的比較(±s，pg/ml)

組別nIL-37IL-18MPP組急性期40111.33±70.83 170.70±68.55 MPP組恢復期4028.28±13.62a61.25±30.97a對照組4017.35±15.35ab31.28±13.56abF值32.56842.177P值<0.001<0.001

注：a與MPP組急性期比較，P<0.01；b與MPP組恢復期比較，P<0.01。

2.2MPP組重癥和輕癥患兒血清IL-37、IL-18水平的比較MPP組中,重癥患兒急性期和恢復期血清IL-37、IL-18水平高于輕癥患兒，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2　MPP組重癥和輕癥患兒血清IL-37、IL-18水平的比較(±s，pg/ml)

表2　MPP組重癥和輕癥患兒血清IL-37、IL-18水平的比較(±s，pg/ml)

組別nIL-37急性期恢復期IL-18急性期恢復期重癥17169.18±68.5834.59±12.81226.06±50.5783.76±26.76輕癥2368.57±31.2423.61±12.49129.78±48.5144.61±22.31t值6.2352.7206.0564.903P值<0.0010.01<0.001<0.001

2.3MPP患兒急性期IL-37與IL-18的關(guān)系MPP患兒急性期血清IL-37水平與IL-18水平呈顯著正相關(guān)(r=0.670，P<0.01)。見圖1。

圖1　MPP患兒急性期IL-37與IL-18的關(guān)系

3討論

MPP有臨床癥狀復雜、肺外損害重等特征，到目前為止，MPP發(fā)病機制仍不十分清楚，國內(nèi)外研究[6]均證實體液免疫和細胞免疫共同參與了MPP的發(fā)病過程，其中細胞介導的免疫反應失衡以及大量細胞因子的釋放失衡，在MPP的發(fā)病過程中起著重要作用。

本研究結(jié)果顯示：MPP患兒血清IL-37及IL-18水平急性期明顯高于恢復期及正常對照組，而疾病組和對照組不同性別之間血清IL-37及IL-18水平均無差異,提示IL-37及IL-18 在MPP的發(fā)病中可能起了重要作用，與性別無關(guān)。

IL-18作為重要的炎癥細胞因子，在多種自炎癥性疾病[7，8]的進展期中均升高，國內(nèi)多項研究顯示MP感染后及MPP患者血清IL-18水平升高，且與病情嚴重程度呈正相關(guān)[8，9]。本研究結(jié)果也顯示：MPP患兒血清IL-18水平急性期明顯高于對照組及恢復期,其中重癥患兒無論是急性期還是恢復期均較輕癥患兒顯著升高，證實了炎癥因子過度釋放導致機體免疫損傷,表明血清IL-18可能可以反映炎癥反應程度，作為MPP病情嚴重程度評估的一個指標。

IL-37是新近發(fā)現(xiàn)的IL-1F成員，在某些炎癥組織中高表達，前炎癥因子IL-18、IFN-γ、IL-1β以及TNF能促進IL-37的合成[10]。研究表明，IL-37具有抗炎和免疫抑制作用,在許多炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要保護作用,其炎性保護作用與抑制炎性因子的表達水平密切相關(guān)[10~14]。IL-37可以通過巨噬細胞有效地抑制前炎癥細胞因子產(chǎn)物，抑制TLR誘導的前炎癥因子的釋放及DCs 的活性，作為一種天然炎癥調(diào)節(jié)因子，在調(diào)節(jié)免疫炎癥反應方面起到重要作用。本研究結(jié)果顯示，MPP患兒血清IL-37水平急性期明顯高于對照組及恢復期,其中重癥患兒急性期和恢復期均較輕癥患兒顯著升高; 由此推測， MPP患兒急性期及重癥組血清IL-37水平升高可能是由于前炎癥因子IL-18升高而啟動的機體負反饋機制抑制炎癥的過度表達所致。與IL-18一樣，IL-37可能也可以作為MPP病情嚴重程度評估的一個指標。

已有的研究證實，IL-37與IL-18對炎癥的作用分別起到抑制和促進作用，其呈正相關(guān)的機制可能與IL-37的抑制炎癥機制有關(guān)。IL-37的控制炎癥機制與IL-18密切相關(guān)，相關(guān)實驗證明，IL-37主要與IL-18的天然抑制劑IL-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)結(jié)合,增強IL-18BP對IL-18的抑制能力,而IL-18是通過與IL-18Rα鏈和β鏈組成的受體復合物結(jié)合, 誘導IFN的表達，因此 IL-37可以抑制IFN-γ的產(chǎn)生；IL-37還可以進入細胞核與Smad3結(jié)合形成一個功能性復合物,影響基因轉(zhuǎn)錄, 并抑制TLR誘導表達促炎癥性細胞因子以及DCs的活化[15]；IL-37可以抑制STAT1-4、 c-Jun和p38絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)的功能，促進糖原合成酶激酶(GSK)-3α/β磷酸化，發(fā)揮抗炎作用[16]。通過相關(guān)性比較分析發(fā)現(xiàn)：MPP患兒急性期血清IL-37與IL-18水平呈顯著正相關(guān)，提示二者相互影響。推測MPP患兒急性期，血清IL-37水平隨著IL-18的升高而上升，可能與在機體遭受MPP感染、促炎因子IL-18釋放增多、炎癥損傷加重、機體進行保護性負反饋調(diào)節(jié)、增加 IL-37的釋放、抑制炎癥反應有一定關(guān)系。

由此推論：IL-37及IL-18可能參與了MPP的發(fā)生、發(fā)展；MPP患兒 IL-37及IL-18二者互為影響，在一定程度上有助于臨床監(jiān)測病情。

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(編輯落落)

摘要目的：研究肺炎支原體肺炎(MPP)患兒不同時期血清白細胞介素-37(IL-37)及白細胞介素-18(IL-18)的水平變化，并探討其在MPP發(fā)生、發(fā)展中的作用及意義。方法：(1)采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定40例MPP患兒(MPP組)急性期和恢復期血清IL-37及IL-18水平，與40例健康體檢兒童(對照組)進行比較；(2)比較MPP重癥與輕癥患兒血清IL-37及IL-18水平變化；(3)分析MPP組急性期IL-37與IL-18的相關(guān)性。結(jié)果：(1) MPP組急性期血清IL-37及IL-18水平均顯著高于恢復期及對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)； (2)MPP組恢復期血清IL-37及IL-18水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；(3) MPP組重癥與輕癥比較，重癥患兒血清IL-37、IL-18水平呈在急性期和恢復期均高于輕癥患兒，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；(4)MPP急性期血清IL-37及IL-18水平呈顯著正相關(guān)(P<0.01)。結(jié)論：(1)IL-37及IL-18可能參與了MPP的發(fā)生、發(fā)展；(2)IL-37及IL-18二者互為影響，在一定程度上有助于臨床監(jiān)測病情。

關(guān)鍵詞IL-37IL-18肺炎支原體肺炎兒童

Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia in Children with Changes in Serum Levels of IL-37, IL-18 of Study

LIU Guilan,SUN Ping,ZHONG Haiping,etal.TheFirstAffiliatedHospitalofNanchangUniversity，NanchangCity，JiangxiProvince330006

ABSTRACTObjective:Study of children with mycoplasma pneumoniae pneumonia (MPP) at different times of serum interleukin 37 (IL-37) and interleukin 18 (IL-18) levels of change, and to explore its role in the occurrence and development of MPP and significance.Methods:(1) With double antibody sandwich enzyme-linked immunoassay (ELISA) determination of 40 cases of children with MPP acute phase and convalescence, serum levels of IL-37 and IL-18,and compared with 40 cases of healthy check-up children (control group) were compared;(2)MPP severe and mild serum IL-37 and IL-18 level changes;(3)compare the MPP acute IL-37 and the correlation of IL-18.Results:(1)MPP children with acute phase serum IL-37 and IL-18 levels were significantly higher than that of recovery and healthy controls children, differences were statistically significant (P<0.01); (2)the recovery of serum IL-37 children with MPP and level of IL-18 children is higher than the healthy controls, differences were statistically significant (P<0.01);(3)the MPP children with severe compared with mild, severe patients serum IL-37, IL-18 level were higher than in children with mild acute phase and convalescence and the differences were statistically significant (P<0.05);(4)MPP acute phase serum IL-37 and IL-18 were significantly positive correlation (P< 0.01).Conclusion:(1)IL-37 and IL-18 maybe have involved in the occurrence and development of mycoplasma pneumoniae pneumonia;(2)IL-37 and IL-18 both influence each other. in a certain extent, It is helpful to the clinical monitoring condition.

KEY WORDSIL-37,IL-18,Mycoplasma pneumoniae pneumonia,Child

收稿日期2015-04-23

中圖分類號：R725.6

文獻標識碼：A

文章編號：1001-7585(2015)18-2428-03