劉子豪 姜兆財 魏世輝 陳霆雋

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·神經(jīng)眼科專題·

急性視神經(jīng)炎血清CXCL12、血小板源性生長因子及CXCL14水平與疾病轉(zhuǎn)歸

劉子豪＊姜兆財＊＊魏世輝 陳霆雋

目的 對視神經(jīng)炎(ON)及相關(guān)脫髓鞘疾病進(jìn)行血清趨化因子12(CXCL12)、血小板源性生長因子(PDGF)、趨化因子14(CXCL14)濃度檢測，分析不同疾病類型及時期各項因子的變化規(guī)律。方法 采集就診ON及相關(guān)脫髓鞘疾病患者的靜脈血，并根據(jù)疾病種類及病程進(jìn)行分組。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)對血液樣本中CXCL12、PDGF及CXCL14的濃度進(jìn)行定量檢測。結(jié)果 ①血清CXCL12檢測結(jié)果：健康對照組(HC)的濃度為(0.207±0.150)ng/mL；急性期視神經(jīng)炎(AON)組的濃度為(0.136±0.076)ng/mL；緩解期視神經(jīng)炎(CON)組的濃度為(0.431±0.276)ng/mL；急性期視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病(ANMOSDs)組的濃度為(0.281±0.257)ng/mL；緩解期視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病(CNMOSDs)組的濃度為(0.270±0.132)ng/mL；視神經(jīng)脊髓炎(NMO)組的濃度為(0.498±0.221)ng/mL；多發(fā)性硬化(MS)組的濃度為(0.439±0.174)ng/mL。②血清PDGF檢測結(jié)果：HC組的濃度為(40.944±14.677)pg/mL；AON組的濃度為(25.771±5.094)pg/mL；CON組的濃度為(34.359±4.567)pg/mL；ANMOSDs組的濃度為(32.589±8.957)pg/mL；CNMOSDs組的濃度為(38.805±10.449)pg/mL；NMO組的濃度為(48.982±12.985)pg/mL；MS組的濃度為(50.498±6.322)pg/mL。③血清CXCL14檢測結(jié)果：HC組的濃度為(2.149±1.783)ng/mL；AON組的濃度為(1.312±1.127)ng/mL；CON組的濃度為(4.740±2.281)ng/mL；ANMOSDs組的濃度為(2.111±1.351)ng/mL；CNMOSDs組的濃度為(2.127±1.739)ng/mL；NMO組的濃度為(7.096±5.198)ng/mL；MS組的濃度為(2.409±1.009)ng/mL。結(jié)論 ①在ON的急性期，CXCL12、PDGF、CXCL14的血清濃度降低，而隨著疾病的恢復(fù)，各因子濃度升高，可能略高于正常人水平。②在NMOSDs的急性期和緩解期，CXCL12和CXCL14血清濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義，與正常血清濃度差異也無統(tǒng)計學(xué)意義。PDGF血清濃度在急性期降低，緩解期升高，但始終低于正常人水平。③急性期的NMO和MS，CXCL12濃度均高于正常人水平。非急性期的NMO患者，CXCL14濃度高于正常人。④NMOSDs和NMO在疾病預(yù)后或神經(jīng)修復(fù)機(jī)制上可能差異較大，因而導(dǎo)致血清CXCL12、PDGF和CXCL14濃度之間的顯著差異。 (中國眼耳鼻喉科雜志，2015，15：155-162)

視神經(jīng)炎；脫髓鞘疾?。悔吇蜃?2；血小板源性生長因子；趨化因子14

視神經(jīng)炎(optic neuritis，ON)是臨床孤立綜合征(clinically isolated syndrome, CIS)的一種類型。在臨床上，CIS患者可進(jìn)展為多發(fā)性硬化(multiple sclerosis, MS)或視神經(jīng)脊髓炎(neuromyelitis optica, NMO)等中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system, CNS)脫髓鞘疾病。在脫髓鞘疾病中，CNS不但存在髓鞘的脫失，還存在軸索的損傷。就MS和NMO而言，NMO的病理學(xué)損傷在軸索上更為明顯，特別是水通道蛋白4(aquaporins 4, AQP4)密集區(qū)域[1]。在疾病早期，特別是ON初次發(fā)作的時候，AQP4-Ab、腦脊液寡克隆區(qū)帶(cerebrospinal fluid-restricted oligoclonal bands, CSF-OCB)等免疫指標(biāo)為疾病進(jìn)展提供了很好的參考標(biāo)準(zhǔn)。但是由于隨訪時間、個體差異等因素，在ON首次發(fā)作后，疾病的預(yù)后和轉(zhuǎn)歸尚無較為合適的生物學(xué)指標(biāo)作為參照。

從20世紀(jì)末至今，有關(guān)MS和NMO生物學(xué)標(biāo)記的研究為2種疾病的臨床診斷、鑒別及治療提供了重要支持；然而作為這2種CNS脫髓鞘疾病的一部分，在臨床上首次發(fā)作的ON，其疾病走勢仍是臨床及科研工作中的一大難題。目前NMO的重要診斷指標(biāo)AQP4-Ab往往在患者還處在ON階段時無法檢出，但是其他一些因子，尤其是與神經(jīng)髓鞘再生相關(guān)的細(xì)胞因子，在近年來的研究中越來越受到重視。這些因子包括血小板源性生長因子(platelet-derived growth factor, PDGF)、趨化因子12(chemokine 12, CXCL12) 和CXCL14。

CNS脫髓鞘疾病是一種免疫介導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，越來越多的免疫指標(biāo)正在研究。在免疫系統(tǒng)中，趨化因子對調(diào)節(jié)髓系細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及前體細(xì)胞在中樞和外周之間的運輸和定位起到?jīng)Q定性作用[2-3]。在炎性反應(yīng)中，趨化因子對白細(xì)胞的歸巢和募集有決定性作用，因而直接誘發(fā)炎性反應(yīng)，包括CNS的自身免疫性疾病。有研究發(fā)現(xiàn)，CXCL12在CNS炎性疾病中升高[4]，特別是在MS患者的CSF中[5]。在CNS炎性疾病中，CXCL12主要是由星形膠質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌[6]，這為從血清中研究CXCL12與炎性脫髓鞘疾病提供了依據(jù)。PDGF對調(diào)節(jié)CNS功能有重要作用。在MS患者CSF中，PDGF濃度升高代表治療有效[7]。與CXCL12類似，PDGF也可由血管細(xì)胞分泌，如內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、外皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞[8-10]。CXCL14可與CXCL12的受體趨化因子受體4(chemokine receptor 4, CXCR4)特異性結(jié)合，抑制CXCL12的作用[11]，但在CNS炎性疾病中的作用尚需更多研究。

本研究選取血清CXCL12、PDGF和CXCL14作為指標(biāo)進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)定量檢測，對不同情況CNS脫髓鞘疾病進(jìn)行分析，以期對不同類型脫髓鞘疾病乃至不同疾病時期給予指示作用。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 ON血液來源 在解放軍總醫(yī)院眼科門診和病房，根據(jù)ON治療研究小組(ONTT)制訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷為ON的患者，排除既往有MS、NMO、視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病(neuromyelitis optica spectrum diseases，NMOSDs)及感染等其他原因造成的視神經(jīng)病變者。對急性期ON且病程≤2周者進(jìn)行血液采集；對緩解期患者，病程>3個月，最佳矯正視力(BCVA)恢復(fù)至 1.0 且視野大致正常者進(jìn)行血液采集，并將血液分為急性期ON(acute ON, AON)組與緩解期ON(catabatic ON, CON)組。

1.1.2 NMOSDs血液來源 明確NMOSDs當(dāng)前的范圍[12]：NMO、特發(fā)的單次或復(fù)發(fā)的長節(jié)段脊髓炎(長度>3個脊髓節(jié)段)、復(fù)發(fā)的或雙眼同時發(fā)病的ON、亞洲的視神經(jīng)脊髓型MS、與系統(tǒng)性自身免疫性疾病相關(guān)的ON或長節(jié)段脊髓炎、ON或脊髓炎且在顱內(nèi)有NMO特征性病灶的一類疾病。在資料收集過程中，由于眼科病源限制，主要收集與ON關(guān)系較為密切的患者血液；并根據(jù)病程分為急性期NMOSDs(acute NMOSDs, ANMOSDs)組和緩解期NMOSDs(catabatic NMOSDs，CNMOSDs)組。

1.1.3 NMO和MS血液來源 在解放軍總醫(yī)院眼科門診和病房，根據(jù)2010年McDonald診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為MS的患者和2006年Wingerchuk對NMO的診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為NMO的患者，對其進(jìn)行血液采集并分為NMO組和MS組。

1.1.4 健康對照組血液來源 收集近期健康人且血液檢查結(jié)果不合并炎癥性疾病及病毒感染(如乙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒等)的血液，分類為健康對照(health control, HC)組。

1.2 血液收集及保存 靜脈血均用含惰性分離膠的采血管進(jìn)行采集。血液采集完畢靜置1～2 h后進(jìn)行離心(3 000 r/min, 10 min)。將離心后采血管里的血清取出并分裝至Eppendorf管中，每管200 μg。分裝完畢并標(biāo)記后立即置-80 ℃冰箱保存，直到使用前取出。

1.3 試劑盒制備

1.3.1 材料 96孔板(Sigma-Aldrich公司，美國)；CXCL12、PDGF、CXCL14捕獲抗體(R&D公司，美國)；磷酸鹽緩沖液(phosphate-buffered saline, PBS)(上海生工生物工程有限公司)；磷酸鹽吐溫緩沖液(PBS/0.05% Tween-20, PBST)(Sigma-Aldrich公司，美國)；牛血清蛋白(bovine serum albumin, BSA)(Sigma-Aldrich公司，美國)；CXCL12、PDGF、CXCL14標(biāo)準(zhǔn)品(Peprotech公司，美國)；生物素標(biāo)記抗CXCL12、PDGF、CXCL14抗體(Santa cruz公司，美國)；鏈霉親和素辣根過氧化物酶(美國Santa cruz公司)；洗滌液(上海碧云天生物技術(shù)有限公司)；顯色劑(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)；終止液(北京康為世紀(jì)生物科技有限公司)。

1.3.2 制備過程(CXCL12、PDGF、CXCL14) ①包被：用PBS稀釋捕獲抗體至2 μg/mL，分別加至96孔板各孔中，每孔加液量100 μL。將96孔板置4 ℃冰箱24 h。②洗滌：傾去包被液，用PBST加滿每孔，靜置 5 min，傾去洗液，重新加滿，重復(fù)洗滌5次，最后拍干96孔板。③封閉：每孔加1%BSA 200 μL，置 37 ℃恒溫箱溫育2 h。④洗滌：方法同②。

1.4 ELISA檢測所需設(shè)備及試劑 4 ℃冰箱、37 ℃恒溫箱、酶標(biāo)分析儀(DNM-9606)、不同規(guī)格Eppendorf移液槍數(shù)把、一次性槍頭、蒸餾水、已制備完成的CXCL12/PDGF/CXCL14試劑盒等。

1.5 血清樣本準(zhǔn)備 在實驗前1 d將血清樣本從-80 ℃冰箱轉(zhuǎn)移至-20 ℃冰箱。在檢測當(dāng)天將血清樣本取出，在冰水混合物中解凍至血清完全溶解。在ELISA所需試劑及設(shè)備調(diào)試好之前，放入4 ℃冰箱待檢。

1.6 血清樣本ELISA

1.6.1 CXCL12血清樣本測定 ①加樣：將標(biāo)準(zhǔn)品(A. 0 ng/mL，B. 0.5 ng/mL，C. 1.0 ng/mL，D. 2.5 ng/mL，E. 5.0 ng/mL, F. 10 ng/mL)和待測樣品加入96孔板，每孔均加樣100 μL，空白孔加入PBS，所有檢測均做復(fù)孔。將96孔板充分混合后置37 ℃溫育 2 h。②洗滌：傾去液體，拍干，每孔加滿洗滌液，震蕩 30 s，傾去洗滌液。如此重復(fù)5次，拍干。③每孔加入生物標(biāo)記抗CXCL12抗體100 μL，37 ℃反應(yīng)15 min。④洗滌：方法同②。⑤每孔加入鏈霉親和素辣根過氧化物酶100 μL，37 ℃反應(yīng)15 min。⑥洗滌：方法同②。⑦顯色：每孔加入顯色劑A 50 μL，再加入顯色劑B 50 μL，輕輕震蕩混勻，37 ℃避光反應(yīng)15 min。⑧終止：每孔加入終止液50 μL，終止反應(yīng)。⑨測定：在加入終止液10 min內(nèi)，將酶標(biāo)板放入酶標(biāo)分析儀進(jìn)行測定。⑩得出數(shù)據(jù)：將酶標(biāo)儀讀出的數(shù)據(jù)用空白孔調(diào)零后，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度及對應(yīng)OD值算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程(R2>0.99)，由此算出各樣品濃度。

1.6.2 PDGF和CXCL14血清樣本測定 PDGF和CXCL14血清樣本測定過程與CXCL12的測定過程基本相同，除了步驟①和步驟③。步驟①中，PDGF的標(biāo)準(zhǔn)品為A. 0 pg/mL，B. 50 pg/mL，C. 100 pg/mL，D. 250 pg/mL，E. 500 pg/mL，F(xiàn). 1 000 pg/mL；CXCL14的標(biāo)準(zhǔn)品為A. 0 ng/mL，B. 0.5 ng/mL，C. 1.0 ng/mL，D. 2.5 ng/mL，E. 5.0 ng/mL, F. 10 ng/mL。在加樣過程中，標(biāo)準(zhǔn)品及檢測樣品加樣量均為10 μL。步驟③中測定PDGF時加入生物素標(biāo)記抗PDGF抗體，測定CXCL14時加入生物標(biāo)記抗CXCL14抗體。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 19.0建立數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行各組間差異性檢驗，并用GraphPad Prism 5對檢測結(jié)果作圖。

2 結(jié)果

2.1 血液樣本 共收集血清95份：ON患者血清22份，其中AON組10份，CON組12份；NMOSDs患者血清41份，其中ANMOSDs組24份，CNMOSDs組17份；NMO組血清13份；MS組血清5份；HC組血清14份。其中NMOSDs組主要是復(fù)發(fā)性的ON、雙眼同時發(fā)病的ON和伴隨系統(tǒng)性自身免疫性疾病的ON。

2.2 CXCL12檢測結(jié)果 HC組濃度為(0.207±0.150)ng/mL；AON組濃度為(0.136±0.076)ng/mL；CON組濃度為(0.431±0.276)ng/mL；ANMOSDs組濃度為(0.281±0.257)ng/mL；CNMOSDs組濃度為(0.270±0.132)ng/mL；NMO組濃度為(0.498±0.221)ng/mL；MS組濃度為(0.439±0.174)ng/mL。以分組為變量進(jìn)行方差分析(ANOVA)，各組之間濃度差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)。

CXCL12在各組間的相互比較見圖1。①AON組、CON組與HC組的比較中(圖1A)，AON組較為集中，CON組波動范圍較大。AON組濃度均數(shù)低于CON組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.003 8)。CON組濃度均數(shù)比HC組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.015 8)。AON組均數(shù)低于HC組，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.168 6)。②ANMOSDs組、CNMOSDs組與HC組的比較中(圖1B)，ANMOSDs組離散程度較大，CNMOSDs組相對集中。各組間均數(shù)差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，ANMOSDs組與HC組(P=0.340 2)，ANMOSDs組與CNMOSDs組(P=0.867 8)，CNMOSDs組與HC組(P=0.235 9)，但HC組均數(shù)略低于ANMOSDs組和CNMOSDs組。③NMO組、MS組與HC組的比較中(圖1C)，各組均表現(xiàn)出較大的離散度。NMO組均數(shù)高于HC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000 5)。MS組均數(shù)高于HC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.011 6)。NMO組均數(shù)高于MS組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.601 9)。④NMOSDs組(包含ANMOSDs組與CNMOSDs組)、NMO組與HC組比較中(圖1D)，各組間離散度較大。NMO組均數(shù)高于NMOSDs組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002 1)。NMO組均數(shù)也高于與HC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000 5)。NMOSDs組與HC組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.272 9)。

圖1. 不同分組中CXCL12濃度及組內(nèi)差異性 *示P<0.05，**示P<0.01，***示P<0.001

2.3 PDGF檢測結(jié)果 HC組濃度為(40.944±14.677)pg/mL；AON組濃度為(25.771±5.094)pg/mL；CON組濃度為(34.359±4.567)pg/mL；ANMOSDs組濃度為(32.589±8.957)pg/mL；CNMOSDs組濃度為(38.805±10.449)pg/mL；NMO組濃度為(48.982±12.985)pg/mL；MS組濃度為(50.498±6.322)pg/mL。以分組為變量進(jìn)行ANOVA，各組間濃度差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)。

PDGF在各組間的相互比較見圖2。①AON組、CON組與HC組的比較中，AON組與CON組均較為集中，HC組變異度較大。AON組濃度均數(shù)低于CON組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000 5)。AON組濃度均值同樣低于HC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.005 0)。CON組與HC組濃度均數(shù)略有差別，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.149 2)。②ANMOSDs組、CNMOSDs組與HC組的比較中，ANMOSDs組濃度最低，與HC組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.035 3)，與CNMOSDs組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.047 8)。CNMOSDs組濃度均數(shù)略低于HC組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.639 5)。③NMO組、MS組與HC組的比較中，各組間離散程度不等。NMO組與MS組濃度均數(shù)基本相同，高于HC組濃度。各組間差異無統(tǒng)計意義，NMO組與HC組(P=0.145 5)，NMO組與MS組(P=0.808 0)，MS組與HC組(P=0.182 4)。④NMOSDs組(包含ANMOSDs組與CNMOSDs組)、NMO組與HC組比較中，NMOSDs組濃度均數(shù)最低，與NMO組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000 2)，但與HC組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.104 7)。NMO組略高于HC組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.145 5)。

圖2. 不同分組中PDGF濃度及組內(nèi)差異性 *示P<0.05，**示P<0.01，***示P<0.001

2.4 CXCL14檢測結(jié)果 HC組濃度為(2.149±1.783)ng/mL；AON組濃度為(1.312±1.127)ng/mL；CON組濃度為(4.740±2.281)ng/mL；ANMOSDs組濃度為(2.111±1.351)ng/mL；CNMOSDs組濃度為(2.127±1.739)ng/mL；NMO組濃度為(7.096±5.198)ng/mL；MS組濃度為(2.409±1.009)ng/mL。以分組為變量進(jìn)行ANOVA，各組間濃度差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)。

CXCL14在各組間的相互比較見圖3。①AON組、CON組與HC組的比較中，AON組較為集中，CON組離散度最大，HC組濃度呈兩端分布明顯。AON組濃度均數(shù)最低，與CON組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000 3)，與HC組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.205 3)。CON組濃度均數(shù)高于HC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.003 4)。②ANMOSDs組、CNMOSDs組與HC組的比較中，ANMOSDs組與CNMOSDs組成倒三角分布，HC組呈兩端分布。各組間濃度均數(shù)大致相等，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，ANMOSDs組與HC組(P=0.942 1)，ANMOSDs組與CNMOSDs組(P=0.970 7)，CNMOSDs組與HC組(P=0.975 6)。③NMO組、MS組與HC組的比較中，NMO組離散度最大，MS組相對集中，HC組呈兩端分布。NMO組濃度均數(shù)最高，與HC組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002 5)，但與MS組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.066 9)。MS組與HC組濃度均數(shù)大致相同，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.761 9)。④NMOSDs組(包含ANMOSDs組與CNMOSDs組)、NMO組與HC組比較中，NMOSDs組較為集中，NMO離散度大，HC組成兩端分布。NMOSDs組濃度均數(shù)低于NMO組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.000 1)。NMOSDs組與HC組濃度均數(shù)大致相等，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.951 1)。NMO組濃度均數(shù)高于HC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002 5)。

圖3. 不同分組中CXCL14濃度及組內(nèi)差異性 *示P<0.05，**示P<0.01，***示P<0.001

2.5 相同患者在疾病不同時期各因子變化 共有6例患者在ON的急性期和緩解期均有血液樣本采集(圖4)，其各項指標(biāo)結(jié)果如下：AON組，CXCL12濃度為(0.204±0.179)ng/mL，PDGF濃度為(24.312±5.788)pg/mL，CXCL14濃度為(1.424±0.878)ng/mL；CON組，CXCL12濃度為(0.308±0.275)ng/mL，PDGF濃度為(32.450±11.932)pg/mL，CXCL14濃度為(1.756±1.772)ng/mL。各因子在AON組的濃度均數(shù)均低于CON組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P值分別為0.351、0.085及0.731)。

圖4. 相同患者在疾病急性期及緩解期血清CXCL12、PDGF和CXCL14濃度水平

3 討論

3.1 CXCL12濃度與各組間的關(guān)系 在CNS脫髓鞘動物模型中發(fā)現(xiàn)，CXCL12在病灶區(qū)域的微血管高表達(dá)，說明在脫髓鞘疾病中，血-腦屏障(blood-brain barrier, BBB)是CXCL12的主要來源[13]。在這些動物BBB中CXCL12濃度較高的表現(xiàn)出較輕微的癥狀，而CXCL12濃度較低甚至檢測不到的動物，則接近癱瘓狀態(tài)[13]。CXCL12沿血管腔分泌，通過活化星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤至CXCL12高濃度區(qū)；并與CNS中與高表達(dá)CXCR4的少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞(oligodendrocyte progenitor cells，OPCs)特異性結(jié)合，促進(jìn)OPCs成熟，且OPCs本身也可分泌CXCL12以放大效應(yīng)[14-16]。這說明CXCL12在脫髓鞘損傷的修復(fù)中起重要作用。

在本研究中，AON組血清中CXCL12濃度較低，而CON組血清中濃度較高，且高于HC組患者。血清中CXCL12濃度在ON不同時期的變化，印證了在基礎(chǔ)實驗中CXCL12對CNS脫髓鞘損傷的修復(fù)作用。CON組CXCL12濃度離散程度較高，可解釋為在緩解的過程中所表現(xiàn)出來的不同階段，可能為ON的預(yù)后提供了一個有效的血液學(xué)指標(biāo)。

對于NMOSDs組來說，無論是ANMOSDs組或CNMOSDs組，與HC組均沒有顯著差異。在國內(nèi)外文獻(xiàn)中也尚無關(guān)于CXCL12與NMOSDs間的研究。NMOSDs所包含的疾病較多，無論是復(fù)發(fā)性O(shè)N、雙眼同時發(fā)病的ON及系統(tǒng)性自身免疫性疾病相關(guān)的ON等，其疾病本身都有著復(fù)雜性，而在這種復(fù)雜環(huán)境的影響下，血清CXCL12濃度尚不能對疾病的預(yù)后有明確的指示作用。然而從另一角度分析，首次發(fā)病的ON患者，如果病程的急性期和緩解期CXCL12濃度變化較小，可能意味著該患者應(yīng)歸屬于NMOSDs，對其疾病的進(jìn)程應(yīng)做進(jìn)一步的觀察。

在NMO組及MS組中，血清并非來自患者急性期。因此，在NMO組、MS組及HC組三者的比較中，NMO組和MS組CXCL12濃度比HC組顯著增高，說明在NMO及MS的非急性期，脫髓鞘后的修復(fù)作用占主導(dǎo)地位。

在NMOSDs組、NMO組及HC組的比較中發(fā)現(xiàn)，NMOSDs組CXCL12濃度明顯低于NMO組。由于NMOSDs組包括了急性期和緩解期兩個時期，這種與NMO組間的差異，顯得不易解釋。這可能也是因為NMOSDs的易復(fù)發(fā)性和復(fù)雜性所導(dǎo)致。

3.2 PDGF濃度與各組間關(guān)系 在CNS中，PDGF對神經(jīng)元增生和分化起到至關(guān)重要的作用[17-19]。PDGF也被認(rèn)為與神經(jīng)損傷后的修復(fù)相關(guān)，如在動物腦缺血模型中，負(fù)責(zé)PDGF轉(zhuǎn)錄的mRNA迅速增高；與此同時在CNS中，PDGF受體的表達(dá)也增高[20]。有研究[21]發(fā)現(xiàn)，在動物模型中PDGF調(diào)節(jié)Arc/Arg3.1基因的表達(dá)，而Arc/Arg3.1基因與突觸可塑性和神經(jīng)的長期修復(fù)有關(guān)。在MS的研究中發(fā)現(xiàn)，PDGF通過活化OPCs來促進(jìn)CNS脫髓鞘病灶的髓鞘再生[22]。然而PDGF由于其來源和作用廣泛，并有多種不同的類型，包括PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C和PDGF-D，致使其在CNS脫髓鞘疾病的血液研究中構(gòu)成了重大障礙。

在本研究中，AON、CON與HC 3組的比較中，AON組和CON組PDGF濃度較為集中，且AON組與CON組血清中PDGF的顯著性差異仍被檢測到。CON組中高濃度的PDGF可以理解為PDGF對OPCs增殖分化作用和對神經(jīng)元修復(fù)及突觸重塑作用，在臨床上使得ON臨床表現(xiàn)緩解；而CON組與HC組相比，其差別雖沒有顯著差異，HC組卻表現(xiàn)出較高的均數(shù)。但是，HC組離散度較大，是否是由于標(biāo)本量過少，還是由于血液中其他來源的PDGF對研究結(jié)果造成的影響尚不能明確分析，需要進(jìn)一步的研究才能得出結(jié)論。

NMOSDs兩組和HC組的對比中，急性期與緩解期和正常組間的濃度差異顯著。而在相同標(biāo)本的CXCL12中沒有檢測出差異性，PDGF是否能結(jié)合CXCL12來分析NMOSDs疾病的預(yù)后甚至疾病的診斷值得進(jìn)一步的研究。

在NMO、MS與HC 3組的比較中，3組離散程度均較大，NMO組和MS組均數(shù)高于HC組，但沒有顯著性差異。這種血清PDGF濃度的升高在非急性期NMO和MS中也可以解釋為PDGF升高帶來的CNS修復(fù)作用在血液學(xué)中的客觀表現(xiàn)。

在NMOSDs、NMO與HC 3組的比較中，NMOSDs組血清PDGF均數(shù)顯著低于NMO組。這種顯著性差異，在CXCL12的血清檢測中同樣存在。

3.3 CXCL14濃度與各組間關(guān)系 CXCL14又名胸腎表達(dá)趨化因子(breast and kidney expressed chemokine, BKEC)，在腫瘤的研究中具有重要的地位。在免疫反應(yīng)中，CXCL14活化巨噬細(xì)胞、未成熟的樹突細(xì)胞和NK細(xì)胞；但在CXCL14缺乏的小鼠中，并沒有出現(xiàn)明顯的免疫缺陷，這意味著其作用可能被其他趨化因子代償[23]。近年來在動物模型的CNS免疫反應(yīng)中CXCL14發(fā)揮重要的作用[24-25]。隨后，日本一個關(guān)于干細(xì)胞工程的研究團(tuán)隊發(fā)現(xiàn)，CXCL14與CXCL12的特異性受體CXCR4特異性結(jié)合抑制CXCL12所產(chǎn)生的趨化作用，從而限制白細(xì)胞和造血祖細(xì)胞的增殖和趨化作用[26]。但在CNS損傷和修復(fù)中，CXCL14的來源仍不清楚。

在各組組內(nèi)和組間的比較中，CXCL14在血清中的濃度均數(shù)變化與CXCL12表現(xiàn)出近乎完全相同。結(jié)合日本研究團(tuán)隊研究結(jié)果，CXCL14更傾向是伴隨CXCL12濃度升高反饋產(chǎn)生的抑制性因子。但是從本研究結(jié)果來看，各組均表現(xiàn)出較高的離散度，特別是HC組中，CXCL14濃度呈兩端分布。這是否與CXCL14的濃度受體內(nèi)更多因素調(diào)節(jié)有關(guān)，特別是某些周期性因素，如女性生理周期中雌、孕激素變化等。體內(nèi)其他來源的CXCL14對血清濃度的影響也不能排除。

在AON、CON和HC 3組對照中，AON組和CON組血清CXCL14濃度顯著的差異在判斷ON急性期與緩解期之間的差異仍不失為一項可靠指標(biāo)。

3.4 不同指標(biāo)在相同患者不同時期的意義 本研究幸運地獲取了6例ON患者急性期及緩解期的血清，并同時做了CXCL12、PDGF和CXCL14的檢測分析。其結(jié)果與不同患者的急性期和緩解期表現(xiàn)出相同的趨勢，進(jìn)一步證明了在ON緩解的過程中，這3種因子濃度升高有著明確的意義。

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(本文編輯 諸靜英)

Serum level of CXCL12, platelet-derived growth factor, CXCL14 in acute optic neuritis and its association with prognosis

LIU Zi-hao＊, JIANG Zhao-cai＊＊, WEI Shi-hui, CHEN Ting-jun

Department of Ophthalmology, Chinese People′s Liberation Army General Hospital, Beijing 100853, China

CHEN Ting-jun, chentingj_1@163.com

Objective To detect the serum level of chemokine 12(CXCL12), platelet-derived growth factor(PDGF), and chemokine 14(CXCL14) in optic neuritis (ON) as well as other demyelination diseases, and to analyze the differences of these factors. Methods Venous blood of patients with ON and other demyelination diseases were collected and divided into several groups. Enzyme-linked immunosorbent assay was used to measure the serum level of CXCL12, PDGF and CXCL14. Results ①The serum level of CXCL12 were 0.207±0.150 ng/mL in healthy control group(HC), 0.136±0.076 ng/mL in acute optic neuritis group(AON), 0.431±0.276 ng/mL in catabatic optic neuritis group(CON), 0.281±0.257 ng/mL in acute neuromyelitis optica spectrum diseases group(ANMOSDs), 0.270±0.132 ng/mL in catabatic neuromyelitis optica spectrum diseases group(CNMOSDs), 0.498±0.221 ng/mL in neuromyelitis optica group(NMO), and 0.439±0.174 ng/mL in multiple sclerosis group(MS). ②The serum level of PDGF were 40.944±14.677 pg/mL in HC group, 25.771±5.094 pg/mL in AON group, 34.359±4.567 pg/mL in CON group, 32.589±8.957 pg/mL in ANMOSDs group, 38.805±10.449 pg/mL in CNMOSDs group, 48.982±12.985 pg/mL in NMO group, and 50.498±6.322 pg/mL in MS group. ③The serum level of CXCL14 were 2.149±1.783 ng/mL in HC group, 1.312±1.127 ng/mL in AON group, 4.740±2.281 ng/mL in CON group, 2.111±1.351 ng/mL in ANMOSDs group, 2.127±1.739 ng/mL in CNMOSDs group, 7.096±5.198 ng/mL in NMO group, and 2.409±1.009 ng/mL in MS group. Conclusions ①The serum level of CXCL12, PDGF and CXCL14 decrease in AON group, and increase even higher than that in HC group as symptom recovering. ②The serum level of CXCL12 and CXCL14 have no significant distinction in different stages of NMOSDs. The serum level of PDGF is low in acute stage and high in catabatic stage, but is lower than that in HC group all the time. ③The serum level of CXCL12 in non-acute stage of NMO and MS are higher than that in HC group, without significant distinction. The serum level of CXCL14 in non-acute stage of NMO are higher than that in HC group. ④NMOSDs and NMO may have significant differences in prognosis and mechanism of nerve regeneration, which lead to the differences of serum levels of CXCL12, PDGF and CXCL14. (Chin J Ophthalmol and Otorhinolaryngol,2015,15:155-162)

Optic neuritis; Demyelinating diseases; Chemokine 12; Platelet-derived growth factor; Chemokine 14

中國人民解放軍總醫(yī)院眼科 北京 100853；＊北京市中醫(yī)藥大學(xué)附屬東直門醫(yī)院眼科 北京 100700；

＊＊北京市隆福醫(yī)院眼科 北京 100010

陳霆雋(Email:chentingj_1@163.com)

10.14166/j.issn.1671-2420.2015.03.003

2015-03-12)