黃錦桃，梁翠莎，陳劍煌，周 紅，朱兆玲，胡黎平，李美玉

（中山大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心，廣東廣州510080）

高校病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全體系建設(shè)與實(shí)施

黃錦桃，梁翠莎，陳劍煌，周 紅，朱兆玲，胡黎平，李美玉

（中山大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心，廣東廣州510080）

高校病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室不可避免地存在生物安全隱患，對(duì)師生生命財(cái)產(chǎn)安全和教學(xué)、科研工作造成嚴(yán)重威脅。本文通過(guò)介紹中山大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室在生物安全管理、生物安全體系建設(shè)過(guò)程中的成效與經(jīng)驗(yàn)，指出實(shí)驗(yàn)室可能存在的生物安全風(fēng)險(xiǎn)與隱患；并結(jié)合國(guó)家、省、學(xué)校實(shí)驗(yàn)室生物安全三級(jí)管理規(guī)章制度，提出防范隱患、進(jìn)一步完善實(shí)驗(yàn)室生物安全體系建設(shè)的建議。

病原生物學(xué)； 實(shí)驗(yàn)室； 安全； 感染

高校病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室不可避免存在生物安全隱患，對(duì)師生生命財(cái)產(chǎn)安全和教學(xué)、科研工作造成嚴(yán)重威脅。因此，實(shí)驗(yàn)室生物安全問(wèn)題已越來(lái)越受關(guān)注，并已成為世界共同關(guān)注的問(wèn)題[1-2]。2011年，中國(guó)東北農(nóng)業(yè)大學(xué)發(fā)生28名師生動(dòng)物實(shí)驗(yàn)感染“布魯氏菌病”事件，再次為高校實(shí)驗(yàn)室生物安全敲響警鐘。

中山大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，主要承擔(dān)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)和人體寄生蟲(chóng)學(xué)2門基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)課程的實(shí)驗(yàn)教學(xué)工作。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的教師和學(xué)生，都會(huì)不同程度地接觸到病原體。為了有效預(yù)防、及時(shí)控制和消除可能發(fā)生在實(shí)驗(yàn)室的生物安全隱患，指導(dǎo)和規(guī)范實(shí)驗(yàn)室的生物安全工作，保障教職員工和學(xué)生的身體健康和生命安全，維護(hù)正常教學(xué)秩序，實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心根據(jù)國(guó)家、省、學(xué)校的相關(guān)規(guī)定和預(yù)案，結(jié)合病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室實(shí)際，制訂一系列具有針對(duì)性的安全規(guī)章制度，并取得了一定成效。

1 實(shí)驗(yàn)室的安全制度與管理

1.1 建立實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心管理組織 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心根據(jù)各實(shí)驗(yàn)室和平臺(tái)的特點(diǎn)，建立了完善的生物安全規(guī)章制度，自上而下明確生物安全管理責(zé)任人。成立中心生物安全領(lǐng)導(dǎo)小組，中心主任擔(dān)任生物安全管理責(zé)任人，各實(shí)驗(yàn)室副主任為小組成員；指定中心1名工作人員作為生物安全事務(wù)聯(lián)系人。各實(shí)驗(yàn)室相應(yīng)指定管理責(zé)任人，由實(shí)驗(yàn)室或平臺(tái)副主任擔(dān)任責(zé)任人，與另一名實(shí)驗(yàn)人員共同負(fù)責(zé)本實(shí)驗(yàn)室或平臺(tái)的生物安全相關(guān)工作，監(jiān)督檢查實(shí)驗(yàn)室技術(shù)規(guī)范和操作規(guī)程的落實(shí)情況。

1.2 建立病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室管理組織 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室成立了實(shí)驗(yàn)室生物安全管理小組，制訂學(xué)生實(shí)驗(yàn)室管理責(zé)任人，分別負(fù)責(zé)一間學(xué)生實(shí)驗(yàn)室的教學(xué)實(shí)驗(yàn)工作。明確菌種保管室、細(xì)菌接種培養(yǎng)室、真菌接種培養(yǎng)室、實(shí)驗(yàn)室使用病原體交接室、病原體銷毀室、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與病原體交接等生物安全相關(guān)場(chǎng)所的安全管理責(zé)任人，做到層層把關(guān)，確保實(shí)驗(yàn)室生物安全。

1.3 建立安全培訓(xùn)制度，樹(shù)立普遍防護(hù)意識(shí) 制度建設(shè)是實(shí)驗(yàn)室生物安全管理工作的最基本的環(huán)節(jié)，對(duì)開(kāi)展工作具有指導(dǎo)意義和約束力[3]。根據(jù)生物安全相關(guān)規(guī)定和實(shí)驗(yàn)教學(xué)特點(diǎn)，將實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)列入對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的培訓(xùn)內(nèi)容，使實(shí)驗(yàn)人員掌握必要的防范技能和措施，定期對(duì)實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行安全教育，不斷提高安全防護(hù)意識(shí)。建立了生物安全實(shí)驗(yàn)技術(shù)培訓(xùn)三級(jí)管理制度，由高職稱實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員培訓(xùn)中級(jí)實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員，中級(jí)人員培訓(xùn)初級(jí)人員，初級(jí)人員培訓(xùn)新入職工作人員。

1.4 嚴(yán)格執(zhí)行規(guī)章制度，規(guī)范管理病原體

1.4.1 菌種室的管理 對(duì)菌種保管室實(shí)行出入登記、使用記錄、雙人雙鎖管理制度，備有《菌種室出入登記冊(cè)》、《常用菌種使用登記冊(cè)》、《新入菌種登記冊(cè)》、《菌種注銷登記冊(cè)》、《菌種移交登記冊(cè)》等記錄。

1.4.2 學(xué)生實(shí)驗(yàn)室使用菌種的管理 對(duì)實(shí)驗(yàn)教學(xué)過(guò)程中學(xué)生使用的菌種，在實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)后，技術(shù)人員與授課教師之間均有明確的交接記錄，填寫(xiě)《實(shí)驗(yàn)室使用病原體交接記錄冊(cè)》，在流程上確保實(shí)驗(yàn)前后病原體數(shù)量和種類的一致。

1.4.3 病原體及其相關(guān)污染物的清潔銷毀管理 學(xué)生實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員接收學(xué)生使用過(guò)的淘汰實(shí)驗(yàn)物品后，與清潔人員之間進(jìn)行病原體交接記錄，填寫(xiě)《移交、銷毀病原體交接記錄冊(cè)》，對(duì)病原體及其污染物品進(jìn)行銷毀。

1.5 明確實(shí)驗(yàn)課病原體使用責(zé)任人

1.5.1 實(shí)驗(yàn)課項(xiàng)目 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)設(shè)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目中，有47項(xiàng)實(shí)驗(yàn)需接觸活體標(biāo)本，其中醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)接觸的活體項(xiàng)目41項(xiàng)，人體寄生蟲(chóng)學(xué)實(shí)驗(yàn)6項(xiàng)。實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員依據(jù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)的要求，明確實(shí)驗(yàn)操作責(zé)任人，分別接種、培養(yǎng)各種病原體、感染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、解剖實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、制作標(biāo)本、清潔、銷毀相關(guān)污染物品等。學(xué)生上實(shí)驗(yàn)課操作的病原體項(xiàng)目有16項(xiàng)，帶教教師作為實(shí)驗(yàn)責(zé)任人指導(dǎo)學(xué)生按照實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)要求完成各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。

1.5.2 實(shí)驗(yàn)教學(xué)生物安全確認(rèn)表 制訂實(shí)驗(yàn)教學(xué)病原體生物安全確認(rèn)表格，要求參加實(shí)驗(yàn)的人員填寫(xiě)此表格。表中記錄了主持該課程的負(fù)責(zé)人、帶教教師、實(shí)驗(yàn)操作的學(xué)生和實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員；病原體名稱、實(shí)驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)；實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)技術(shù)人員操作的內(nèi)容、學(xué)生操作的內(nèi)容；實(shí)驗(yàn)中可能存在的生物安全風(fēng)險(xiǎn)，包括病原體的危害性與應(yīng)急處理措施等。

2 實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備與實(shí)驗(yàn)物品的安全操作

制定與病原體相關(guān)的實(shí)驗(yàn)儀器操作規(guī)范和實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)范，要求實(shí)驗(yàn)相關(guān)人員在日常工作中嚴(yán)格執(zhí)行正確的操作程序和方法。

2.1 病原體相關(guān)儀器設(shè)備的安全操作 在實(shí)驗(yàn)室和儀器放置相應(yīng)位置，備有《離心機(jī)與離心物品的安全操作》、《超凈工作臺(tái)使用規(guī)范與注意事項(xiàng)》、《生物安全柜與病原體的安全操作規(guī)程》等相關(guān)操作規(guī)范。

2.1.1 《離心機(jī)與離心物品的安全操作》 其中包括離心機(jī)的放置位置與安全操作步驟、離心病原體注意事項(xiàng)、異常現(xiàn)象處理原則、離心病原體操作步驟、離心用具的清潔、消毒、銷毀等。

2.1.2 《超凈工作臺(tái)使用規(guī)范與注意事項(xiàng)》 超凈工作臺(tái)主要是保護(hù)操作標(biāo)本不受外界環(huán)境污染。本實(shí)驗(yàn)室主要用于培養(yǎng)基的制作和培養(yǎng)自由生活的阿米巴原蟲(chóng)或?qū)嶒?yàn)室純化的動(dòng)物阿米巴原蟲(chóng)。

2.1.3 《生物安全柜與病原體的安全操作規(guī)程》 生物安全柜用于操作實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的細(xì)菌、真菌、病毒、臨床采集的標(biāo)本等病原體，利于保護(hù)病原體操作人員、實(shí)驗(yàn)教學(xué)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)材料，同時(shí)也是為避免暴露于上述操作過(guò)程中可能產(chǎn)生的氣溶膠和濺出物而設(shè)立。其操作規(guī)程包括操作原理、柜內(nèi)物品放置、操作步驟、安全使用紫外燈、禁止使用明火、妥善處理溢出物、避免氣溶膠產(chǎn)生、操作病原體注意事項(xiàng)、異?，F(xiàn)象處理原則、常見(jiàn)病原體操作步驟、實(shí)驗(yàn)物品的清潔、消毒、銷毀等內(nèi)容，以及安全柜的維護(hù)保養(yǎng)等。

3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的安全管理

3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類與來(lái)源 病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室用于感染病原體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物主要有小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、家兔、家貓、家犬等；流行區(qū)采集或購(gòu)買的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物主要有淡水螺類、魚(yú)類、蝦類、溪蟹、虎紋蛙等寄生蟲(chóng)的中間宿主或轉(zhuǎn)續(xù)宿主。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物主要來(lái)源于學(xué)校動(dòng)物中心、社會(huì)有資質(zhì)的動(dòng)物供應(yīng)商、某些疾病的流行區(qū)、或在自由市場(chǎng)購(gòu)買，其中來(lái)源于外購(gòu)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可能存在某些生物安全風(fēng)險(xiǎn)。因此，制訂了《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的安全管理規(guī)范》，積極防護(hù)，規(guī)范操作，將實(shí)驗(yàn)室生物安全風(fēng)險(xiǎn)控制在最小范圍內(nèi)，保證實(shí)驗(yàn)教學(xué)的圓滿完成。

3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物安全風(fēng)險(xiǎn)與防護(hù)

3.2.1 校內(nèi)領(lǐng)取的動(dòng)物 在校內(nèi)領(lǐng)取的3種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明小鼠，Wistar大鼠，家兔，一般情況下不存在突出的生物安全隱患，但存在被動(dòng)物抓傷、咬傷的可能性。

3.2.2 社會(huì)供應(yīng)商提供的動(dòng)物 由社會(huì)供應(yīng)商提供的5種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，豚鼠、家貓、家犬、虎紋蛙、家雞，可能存在不同程度的生物安全風(fēng)險(xiǎn)，使用前做好應(yīng)急處理預(yù)案，避免事故發(fā)生。

3.2.3 流行區(qū)采集的動(dòng)物 對(duì)于來(lái)自寄生蟲(chóng)病流行區(qū)采集的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、淡水魚(yú)類、陽(yáng)性釘螺、溪蟹等。從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，均存在不同程度的生物安全風(fēng)險(xiǎn)。因此，需采取措施，規(guī)避風(fēng)險(xiǎn)。

3.2.4 制定規(guī)范，安全操作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 制定《病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)動(dòng)物安全管理規(guī)范》，指導(dǎo)師生順利進(jìn)行實(shí)驗(yàn)?！耙?guī)范”內(nèi)容包括操作者的自身防護(hù)知識(shí)；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取與固定、麻醉與病原體感染、血液采集與動(dòng)物解剖；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的倫理與福利、安死術(shù)與尸體銷毀等。

4 討 論

病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室高度重視實(shí)驗(yàn)室生物安全體系建設(shè)工作，多年來(lái)未出現(xiàn)過(guò)嚴(yán)重事故，保證了實(shí)驗(yàn)教學(xué)的有序進(jìn)行，圓滿完成實(shí)驗(yàn)教學(xué)任務(wù)。盡管如此，實(shí)驗(yàn)室仍然存在一些生物安全隱患，如：個(gè)人防護(hù)意識(shí)薄弱、對(duì)本科生缺乏系統(tǒng)的生物安全教育及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的管理不足等。為此，必須采取相應(yīng)措施，防患于未然。

4.1 強(qiáng)化個(gè)人防護(hù)意識(shí) 資料顯示，90%以上的安全事故與人的防范意識(shí)不足有關(guān)[4]。必須嚴(yán)格落實(shí)實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)規(guī)章制度，嚴(yán)格執(zhí)行生物安全管理制度及操作規(guī)程，養(yǎng)成良好的安全習(xí)慣。人的不安全行為是事故的直接原因[5-6]，因此，要定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)行培訓(xùn)，以提高工作人員的安全意識(shí)及操作技能。對(duì)于進(jìn)入病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的學(xué)生，應(yīng)根據(jù)每一個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，對(duì)學(xué)生進(jìn)行一次具體而有針對(duì)性的安全知識(shí)和技能方面的培訓(xùn)。將生物安全滲入到每一個(gè)實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)，形成更規(guī)范的防護(hù)意識(shí)。同時(shí)強(qiáng)調(diào)個(gè)人防護(hù)用品的使用、安全設(shè)備設(shè)施使用方法、清潔及消毒技術(shù)、意外事故處理程序等。使從事病原微生物實(shí)驗(yàn)室的工作人員高度重視生物安全防護(hù)，從根本上減少或盡可能杜絕自身感染、環(huán)境污染、實(shí)驗(yàn)室泄漏等事件發(fā)生。

4.2 加強(qiáng)本科生的系統(tǒng)的生物安全教育 中山大學(xué)自2008年開(kāi)始，將“實(shí)驗(yàn)室與生物安全”列為醫(yī)學(xué)研究生的必修課程，選用顏光美和余新炳教授主編的“實(shí)驗(yàn)室生物安全”作為教學(xué)參考材料，考試通過(guò)學(xué)生可獲得學(xué)位[7]。對(duì)本科生則無(wú)此要求，導(dǎo)致本科生對(duì)生物安全不夠重視，埋下一定的安全隱患。生物安全教育應(yīng)從本科生抓起，建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)入制度，生物安全培訓(xùn)合格，才能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。加強(qiáng)對(duì)本科生生物安全教育，有助于為將來(lái)從事病原生物學(xué)的相關(guān)研究或臨床工作打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，也為今后在實(shí)際工作中樹(shù)立求真務(wù)實(shí)的科學(xué)態(tài)度奠定基石[8]。

4.3 加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的管理 防范源自實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的感染是實(shí)驗(yàn)室生物安全體系建設(shè)的重要工作。必須按生物安全規(guī)范建立動(dòng)物房，各種感染動(dòng)物模型分開(kāi)飼養(yǎng)，對(duì)于自購(gòu)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，感染病原體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，以及寄生蟲(chóng)病流行區(qū)采集的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，做到嚴(yán)密觀察，獨(dú)立飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后及時(shí)銷毀處理。宣傳動(dòng)物倫理福利知識(shí)，提倡實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用“3R”原則[9]。在實(shí)驗(yàn)中遵行“3R”原則，不但是重視實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利和動(dòng)物倫理，善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的表現(xiàn)，也是防范生物安全風(fēng)險(xiǎn)和隱患的需要。

綜上所述，如何將病原微生物實(shí)驗(yàn)室各種風(fēng)險(xiǎn)減低到可接受的范圍內(nèi)，使醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室成為真正意義上的生物安全實(shí)驗(yàn)室，仍有待于不斷探索和實(shí)踐。“安全無(wú)小事”，實(shí)驗(yàn)室生物安全體系建設(shè)是一項(xiàng)持續(xù)、嚴(yán)肅的重要工作，要時(shí)時(shí)刻刻“如履薄冰”，嚴(yán)加防范。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.12.062

:B

:1009-5519（2015）12-1899-03

2015-02-05）

中山大學(xué)教改基金項(xiàng)目（YJ201337）。

黃錦桃（1973-），女，廣東廣州人，實(shí)驗(yàn)師，主要從事病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)工作；E-mail：huangjt@mail.sysu.edu.cn。

李美玉（E-mail：pyt0602@21cn.com）。