林 清，符小英，林志繡

(1.廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院藥學部，湛江 524001； 2.廣東恒誠制藥有限公司，湛江 524022)

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藥物制劑

腹可安片中東莨菪內(nèi)酯提取工藝的正交實驗法優(yōu)化

林 清1，符小英2，林志繡1

(1.廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院藥學部，湛江 524001； 2.廣東恒誠制藥有限公司，湛江 524022)

目的：優(yōu)選腹可安片中東莨菪內(nèi)酯的提取工藝。方法：以干膏得率和處方中的主要藥效成分東莨菪內(nèi)酯含量為觀察指標，采用正交實驗法篩選最佳提取工藝條件。結(jié)果：最佳提取方法為10倍量水，煎煮3次，每次1.5 h,醇沉濃度為60%。結(jié)論:優(yōu)選的提取方法為腹可安片中東莨菪內(nèi)酯含量測定提供可靠方案，保證產(chǎn)品質(zhì)量。

腹可安片，正交實驗，提取工藝

腹可安片由扭肚藤、火炭母、救必應、車前草、石榴皮組成，具有清熱利濕、收斂止痛的功效，主要用于治療急性胃腸炎、消化不良引起的腹痛、腹瀉、嘔吐等癥。方中扭肚藤、火炭母清熱利濕，救必應清熱解毒、利濕止痛，共為主藥。扭肚藤為木犀科植物扭肚藤(JasminumamplexicauleBuch -Ham)的莖葉，可清熱解毒、利濕消滯，用于急性胃腸炎、痢疾等癥[1]，其主要化學成分包括東莨菪內(nèi)酯等[2]。為了有效控制該制劑的質(zhì)量，保證其臨床療效，筆者以干膏得率和提取液中東莨菪內(nèi)酯的含量為考查指標，采用正交實驗法對其提取工藝進行研究。

1 儀器與試藥

島津10A高效液相色譜儀(LC-10AD 泵、SPD-10A 紫外檢測器、N2000 色譜工作站)， HN1006型超聲清洗機(中國華南超聲設(shè)備廠)；BP211D型電子天平(德國賽多利斯公司)。 東莨菪內(nèi)酯對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110768-200504)；腹可安片 (廣東恒誠制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：素片0.21 g/片，批號1501101、1501102、1501103)；乙腈為色譜純，甲醇、磷酸均為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)，流動相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(23∶77)，流速：1.0 ml/min；柱溫：室溫；檢測波長：346 nm；進樣量：10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取減壓干燥至恒重的東莨菪內(nèi)酯對照品適量，加甲醇制成每1 ml 含82 μg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品20片，除去包衣，研細，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min， 濾過，用甲醇15 ml分3次洗滌殘渣和器皿，同樣濾過，全部濾液置蒸發(fā)皿中，水浴上揮干，再用流動相溶解殘渣并轉(zhuǎn)移至5 ml的量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過(0.45 μm微孔濾膜)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 標準曲線與線性范圍 精密稱定東莨菪內(nèi)酯對照品，加甲醇分別制成每1 ml含東莨菪內(nèi)酯10.25、20.5、30.75、41.0、61.5和82.0 μg的溶液，再分別精密吸取10 μl按“2.1”項下色譜條件測定，以峰面積積分值(Y)為縱坐標，東莨菪內(nèi)酯濃度(X)為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=6.06×10-5X-3.10(r=0.999 5)。結(jié)果表明，東莨菪內(nèi)酯濃度在0.102 5～0.82 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗 精密吸取東莨菪內(nèi)酯對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件重復進樣6次。結(jié)果，RSD為0.52 %(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗 取“2.2.2”項下供試品溶液，分別于0、2、4、6、8和12 h進樣，按“2.1”項下色譜條件測定東莨菪內(nèi)酯對照品峰面積，RSD為1.2 %(n=6)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復性試驗 取同一批(批號1501101)的腹可安片6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,按“2.1”項下色譜條件測定東莨菪內(nèi)酯含量。結(jié)果，平均含量為492 μg/g，RSD為1.89 %(n=6)，表明方法重復性良好。

2.7 加樣回收率試驗 取同一批(批號1501101)已知含量(東莨菪內(nèi)酯含量為492 μg/g)的腹可安片，除去包衣，研細，精密稱取0.5 g，置于錐形瓶中，分別精密加入高、中、低三個濃度各3份的對照品溶液，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，計算加樣回收率，結(jié)果平均回收率為99.30%，RSD為0.31%，見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

2.8 莨菪內(nèi)酯提取條件優(yōu)化

2.8.1 正交試驗設(shè)計 根據(jù)文獻資料[3]，采用水提醇沉工藝，選取了對東莨菪內(nèi)酯提取率影響較大的煎煮次數(shù)(A)、煎煮時間(B)、醇沉濃度(C)、加水量(D)作為考查因素, 以干膏得率和東莨菪內(nèi)酯的含量作為考查指標，采用L9(34)正交設(shè)計進行試驗，因素水平表見表2。

表2 正交試驗因素水平表

2.8.2 試驗安排及結(jié)果 根據(jù)因素水平表，選用L9(34)表進行試驗。見表3-表5。由表4和表5方差分析可以看出，對于東莨菪內(nèi)酯浸膏得率A為顯著性因素；對于東莨菪內(nèi)酯含量A、B、C為顯著性因素、其中A因素最為顯著。由表3可以看出，影響東莨菪內(nèi)酯提取率和浸膏得率的因素均為煎煮次數(shù)>煎煮時間>醇沉濃度>加水量。根據(jù)表3直觀分析考慮東莨菪內(nèi)酯浸膏得率，工藝條件應選擇A3B3C1D3；若考慮提取率，工藝條件應選擇A3B2C1D3。綜合方差分析、極差數(shù)據(jù)，并從節(jié)省加熱時間和能源的角度考慮，選擇的最佳提取工藝為A3B2C1D3即煎煮3次，煎煮1.5 h，醇沉濃度60%，加水量為10倍。

2.8.3 驗證試驗 按照優(yōu)化工藝條件操作，進行3次重復試驗加以驗證。結(jié)果表明：東莨菪內(nèi)酯含量均較高(平均含量為134.87 μg/片)，說明正交設(shè)計篩選的工藝是合理的。

表3 正交試驗結(jié)果

表4 出膏率方差分析表

注：F0.05(2,2)=19

表5 含量方差分析表

注：F0.05(2,2)=19

3 討論

本制劑為多種藥材加水煎煮成膏加以輔料制成片劑，為保持原處方療效，本組以水做提出溶劑，再根據(jù)東莨菪內(nèi)酯可溶于乙醇，故加乙醇沉淀提取有效成分，因此，在提取工藝研究中選擇東莨菪內(nèi)酯的含量為考查指標是可行的。

制備供試品溶液時，將提取液的溶劑揮干后用流動相復溶，減少了溶液中的弱極性成分，減少每次分析后強保留的雜質(zhì)，可縮短分析時間、保護色譜柱。同時以流動相溶解，避免因為供試品溶液溶劑洗脫力強而導致溶劑峰和峰延伸，提高分離度。

本實驗采用東莨菪內(nèi)酯提取率和浸膏得率為考查指標，經(jīng)驗證優(yōu)化后的提取工藝能確保有效成分東莨菪內(nèi)酯的提取，達到優(yōu)化工藝條件的目的。

1 廣東省食品藥品監(jiān)督管理局. 廣東省中藥材標準(第一冊)[S]. 廣州: 廣東科技出版社, 2004: 109-110

2 彭維, 王小銳, 王永剛, 等. HPLC法測定扭肚藤藥材中東莨菪素的含量. 中藥材, 2007, 30(5): 562-563

3 劉瑛，陳景勇，黃勁松，等.胃腸寧膠囊的提取工藝研究[J].宜春學院學報，2014.36(9)：88-90

2015-05-19

TQ460.6 R927.2

A

1006-5687(2015)04-0027-03