張 瀛，張文軍

(天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津 300193； 天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，天津 300052)

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HPLC法測(cè)定甘杏顆粒劑中苦杏仁苷的含量

張 瀛1，張文軍2

(天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津 300193； 天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，天津 300052)

目的：建立甘杏顆粒劑中苦杏仁苷的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜法，流動(dòng)相為水-甲醇-乙腈(75∶15∶10)，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，進(jìn)樣量20 μl。結(jié)果：苦杏仁苷在0.079 68～0.318 7 mg/ml(r=0.999 9)濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為99.98，RSD為0.78%。結(jié)論：該法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可作為甘杏顆粒劑中苦杏仁苷的含量控制方法。

甘杏顆粒劑，苦杏仁苷，高效液相色譜法

甘杏顆粒劑是由麻杏石甘湯經(jīng)典方劑加減而成，具有宣肺清熱、止咳化痰的功效，對(duì)痰熱型喘證有良好效果，臨床上用于治療急性支氣管炎等癥?？嘈尤适欠街兄箍绕酱木?，其中苦杏仁苷是止咳平喘的主要有效成分，在無酶的條件下，只能在胃酸的作用下緩慢分解，產(chǎn)生微量的氫氰酸而奏止咳平喘之效，且無不良反應(yīng)[l，2]?？嘈尤受盏暮繉⒅苯佑绊懙礁市宇w粒劑的安全和療效。參考有關(guān)文獻(xiàn)[3，4]，采用HPLC測(cè)定苦杏仁苷的含量，控制產(chǎn)品質(zhì)量，為保證該制劑安全有效提供依據(jù)。

1 儀器和試藥

高效液相色譜儀：美國(guó)Spectra-physics；Spectra Focus紫外檢測(cè)器；輸液泵SP8810；Anstar色譜工作站；苦杏仁苷對(duì)照品(批號(hào)110820-200403，中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量測(cè)定用)。甘杏顆粒劑(本院自制，規(guī)格：5 g/袋，批號(hào)141012、141015、141018)。甲醇為色譜純(天津市康科德科技有限公司)，其余試劑均為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：TIANHE Kromasil C18(200 mm×4.6 mm，5 μm)。流動(dòng)相：水-甲醇-乙腈(75∶15∶10)；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；流速：0.8 ml/min，柱溫：室溫，進(jìn)樣量20 μl。在上述色譜條件下苦杏仁苷對(duì)照品的保留時(shí)間為11.5 min。理論塔板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算不低于2 500，分離度大于1.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取對(duì)照品5.00 mg，置25 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得 0.199 2 mg/ml的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取甘杏顆粒劑(批號(hào)141015) 5 g，研細(xì)，精密稱定，用適量甲醇溶解，浸泡l h，超聲處理 30 min，微孔濾膜過濾，定容為25 ml，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按“2.3.2”項(xiàng)下方法制得不含苦杏仁的陰性對(duì)照品溶液，備用。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖?？嘈尤受盏谋Ａ魰r(shí)間約為 11.5 min。陰性樣品在苦杏仁苷峰位置處干擾，本色譜條件苦杏仁苷與其他組分分離完全，見圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍 分別精密吸取對(duì)照品溶液，用甲醇稀釋配制濃度分別為0.079 68、0.119 52、0.159 36、0.199 2、0.239 0、0.278 9和0.318 7 mg/ml的苦杏仁苷系列對(duì)照品溶液。 精密吸取上述苦杏仁苷系列對(duì)照品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積積分值(Y)對(duì)濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=32 617 248.7X-8 869.6(r=0.999 9)，苦杏仁苷在0.079 68～0.318 7 mg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

1.苦杏仁苷

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對(duì)照品溶液20 μl，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，RSD為0.39%。

2.6 穩(wěn)定性考查 取“2.2.1”項(xiàng)下濃度為0.199 2 mg/min的對(duì)照品溶液，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，于3、6、12和24 h分別進(jìn)樣20 μl，結(jié)果峰面積RSD為0.50%(n=6)，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性考查 取同一批號(hào)(批號(hào)141015)樣品6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣20 μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算苦杏仁苷的含量，本試驗(yàn)重復(fù)性較好，RSD為1.03%。

2.8 加樣回收試驗(yàn) 取6份已測(cè)定含量(苦杏仁苷含量為0.203 3 mg/g)的同一批甘杏顆粒劑(批號(hào)141015) 樣品約5.0 g，分別準(zhǔn)確加入80%、100%和120%的對(duì)照品適量，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件操作，進(jìn)樣20 μl，計(jì)算回收率為99.98，RSD為0.78%，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 含量測(cè)定 精密吸取甘杏顆粒劑供試品溶液20 μl，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，用外標(biāo)法計(jì)算苦杏仁苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 甘杏顆粒劑中苦杏仁苷的含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 苦杏仁酶的去除 苦杏仁苷在苦杏仁酶的作用下會(huì)水解破壞，故原藥材中苦杏仁苷的含量與苦杏仁酶密切相關(guān)[1]，傳統(tǒng)方法是以加熱除去苦杏仁酶來保證苦杏仁的質(zhì)量。

3.2 提取方法 樣品曾采用甲醇熱回流、水熱回流和甲醇超聲提取，用水提取測(cè)得苦杏仁苷峰形有分叉且含量偏小，說明提取不完全。甲醇熱回流和超聲提取的苦杏仁苷含量偏差不大，超聲提取比熱回流操作簡(jiǎn)便，故選用甲醇超聲提取。

3.3 流動(dòng)相的選擇 本實(shí)驗(yàn)用水-甲醇作為流動(dòng)相，苦杏仁苷峰有拖尾，增大甲醇比例并加入適量乙腈后，圖譜有明顯改善，與其他峰分離良好。

以苦杏仁苷作為定量控制指標(biāo)，采用HPLC法測(cè)定，方法簡(jiǎn)便可靠、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，能夠較全面地反映該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，可進(jìn)一步提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[5，6]。

1 魏金婷，劉文奇.方藥中苦杏仁苷的研究和應(yīng)用進(jìn)展[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，13(6)：589-591

2 何俊，廖茂梁，劉昌孝，等.配伍對(duì)三拗湯煎液中苦杏仁苷煎出量的影響[J].中成藥，2011，30(1)：18-120

3 張?jiān)骑L(fēng).HPLC測(cè)定杏桔合劑中苦杏仁苷的含量[J].安徽醫(yī)藥，2010，14(8)：896-897

4 楊樹斌，劉青，孫立立.HPLC測(cè)定苦杏仁飲片中苦杏仁苷的含量[J].中成藥，2006，28(10)：1452-1454

5 魏智銳，賈少謙. 高效液相色譜法測(cè)定麻杏定喘合劑中苦杏仁苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2009，l8(20)：36-37

6 鄒小娟，謝和兵，錢芳，等.HPLC法測(cè)定苦杏仁中苦杏仁苷含量的方法研究[J].中國(guó)藥事，2009，23(1)：33-36

Determination of amygdalin content in Ganshi granules by HPLC

Zhang Ying，Zhang Wenjun

(1.College of Traditional Chinese Medicine,Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193； 2.Tianjin Medical University General Hospital,Tianjin 300052)

Objective：To develop an HPLC for quantitative analysis of amygdalin in Ganshi granules．Methods：Mobile phase was composed of water, methanol, and acetonitrile at a rate of 70∶15∶10.The detection wavelength was at 210 nm．Results：The average recovery of amygdalin from Ganshi granules was 99.98%(RSD was 0.79%),and the content of amygdalin was 0.203 3 mg/g in Ganshi granules.Conclusion：Besides simplicity，the method yields accurate reproducible results and can therefore be used in the quality control of a mygdalin content in Ganshi granules.

Ganshi granules，amygdalin，HPLC

2015-05-21

R927.2

A

1006-5687(2015)04-0005-03