張 瀛,張文軍
(天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,天津 300193; 天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院,天津 300052)
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HPLC法測(cè)定甘杏顆粒劑中苦杏仁苷的含量
張 瀛1,張文軍2
(天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,天津 300193; 天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院,天津 300052)
目的:建立甘杏顆粒劑中苦杏仁苷的含量測(cè)定方法。方法:采用高效液相色譜法,流動(dòng)相為水-甲醇-乙腈(75∶15∶10),檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm,進(jìn)樣量20 μl。結(jié)果:苦杏仁苷在0.079 68~0.318 7 mg/ml(r=0.999 9)濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好,平均回收率為99.98,RSD為0.78%。結(jié)論:該法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確,可作為甘杏顆粒劑中苦杏仁苷的含量控制方法。
甘杏顆粒劑,苦杏仁苷,高效液相色譜法
甘杏顆粒劑是由麻杏石甘湯經(jīng)典方劑加減而成,具有宣肺清熱、止咳化痰的功效,對(duì)痰熱型喘證有良好效果,臨床上用于治療急性支氣管炎等癥??嘈尤适欠街兄箍绕酱木?,其中苦杏仁苷是止咳平喘的主要有效成分,在無酶的條件下,只能在胃酸的作用下緩慢分解,產(chǎn)生微量的氫氰酸而奏止咳平喘之效,且無不良反應(yīng)[l,2]??嘈尤受盏暮繉⒅苯佑绊懙礁市宇w粒劑的安全和療效。參考有關(guān)文獻(xiàn)[3,4],采用HPLC測(cè)定苦杏仁苷的含量,控制產(chǎn)品質(zhì)量,為保證該制劑安全有效提供依據(jù)。
高效液相色譜儀:美國(guó)Spectra-physics;Spectra Focus紫外檢測(cè)器;輸液泵SP8810;Anstar色譜工作站;苦杏仁苷對(duì)照品(批號(hào)110820-200403,中國(guó)藥品生物制品檢定所,含量測(cè)定用)。甘杏顆粒劑(本院自制,規(guī)格:5 g/袋,批號(hào)141012、141015、141018)。甲醇為色譜純(天津市康科德科技有限公司),其余試劑均為分析純,水為重蒸餾水。
2.1 色譜條件 色譜柱:TIANHE Kromasil C18(200 mm×4.6 mm,5 μm)。流動(dòng)相:水-甲醇-乙腈(75∶15∶10);檢測(cè)波長(zhǎng):210 nm;流速:0.8 ml/min,柱溫:室溫,進(jìn)樣量20 μl。在上述色譜條件下苦杏仁苷對(duì)照品的保留時(shí)間為11.5 min。理論塔板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算不低于2 500,分離度大于1.5。
2.2 溶液的制備
2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取對(duì)照品5.00 mg,置25 ml量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得 0.199 2 mg/ml的對(duì)照品溶液。
2.2.2 供試品溶液的制備 取甘杏顆粒劑(批號(hào)141015) 5 g,研細(xì),精密稱定,用適量甲醇溶解,浸泡l h,超聲處理 30 min,微孔濾膜過濾,定容為25 ml,作為供試品溶液。
2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按“2.3.2”項(xiàng)下方法制得不含苦杏仁的陰性對(duì)照品溶液,備用。
2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各20 μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖??嘈尤受盏谋A魰r(shí)間約為 11.5 min。陰性樣品在苦杏仁苷峰位置處干擾,本色譜條件苦杏仁苷與其他組分分離完全,見圖1。
2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍 分別精密吸取對(duì)照品溶液,用甲醇稀釋配制濃度分別為0.079 68、0.119 52、0.159 36、0.199 2、0.239 0、0.278 9和0.318 7 mg/ml的苦杏仁苷系列對(duì)照品溶液。 精密吸取上述苦杏仁苷系列對(duì)照品溶液各20 μl,注入液相色譜儀,依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,以峰面積積分值(Y)對(duì)濃度(X)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程Y=32 617 248.7X-8 869.6(r=0.999 9),苦杏仁苷在0.079 68~0.318 7 mg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。
1.苦杏仁苷
2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對(duì)照品溶液20 μl,依“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次,記錄色譜圖,RSD為0.39%。
2.6 穩(wěn)定性考查 取“2.2.1”項(xiàng)下濃度為0.199 2 mg/min的對(duì)照品溶液,依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,于3、6、12和24 h分別進(jìn)樣20 μl,結(jié)果峰面積RSD為0.50%(n=6),表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.7 重復(fù)性考查 取同一批號(hào)(批號(hào)141015)樣品6份,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液,依“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣20 μl,測(cè)定峰面積,計(jì)算苦杏仁苷的含量,本試驗(yàn)重復(fù)性較好,RSD為1.03%。
2.8 加樣回收試驗(yàn) 取6份已測(cè)定含量(苦杏仁苷含量為0.203 3 mg/g)的同一批甘杏顆粒劑(批號(hào)141015) 樣品約5.0 g,分別準(zhǔn)確加入80%、100%和120%的對(duì)照品適量,照“2.1”項(xiàng)下色譜條件操作,進(jìn)樣20 μl,計(jì)算回收率為99.98,RSD為0.78%,結(jié)果見表1。
表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果
2.9 含量測(cè)定 精密吸取甘杏顆粒劑供試品溶液20 μl,依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜圖,用外標(biāo)法計(jì)算苦杏仁苷的含量,結(jié)果見表2。
表2 甘杏顆粒劑中苦杏仁苷的含量測(cè)定結(jié)果
3.1 苦杏仁酶的去除 苦杏仁苷在苦杏仁酶的作用下會(huì)水解破壞,故原藥材中苦杏仁苷的含量與苦杏仁酶密切相關(guān)[1],傳統(tǒng)方法是以加熱除去苦杏仁酶來保證苦杏仁的質(zhì)量。
3.2 提取方法 樣品曾采用甲醇熱回流、水熱回流和甲醇超聲提取,用水提取測(cè)得苦杏仁苷峰形有分叉且含量偏小,說明提取不完全。甲醇熱回流和超聲提取的苦杏仁苷含量偏差不大,超聲提取比熱回流操作簡(jiǎn)便,故選用甲醇超聲提取。
3.3 流動(dòng)相的選擇 本實(shí)驗(yàn)用水-甲醇作為流動(dòng)相,苦杏仁苷峰有拖尾,增大甲醇比例并加入適量乙腈后,圖譜有明顯改善,與其他峰分離良好。
以苦杏仁苷作為定量控制指標(biāo),采用HPLC法測(cè)定,方法簡(jiǎn)便可靠、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好,能夠較全面地反映該制劑的內(nèi)在質(zhì)量,可進(jìn)一步提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[5,6]。
1 魏金婷,劉文奇.方藥中苦杏仁苷的研究和應(yīng)用進(jìn)展[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,13(6):589-591
2 何俊,廖茂梁,劉昌孝,等.配伍對(duì)三拗湯煎液中苦杏仁苷煎出量的影響[J].中成藥,2011,30(1):18-120
3 張?jiān)骑L(fēng).HPLC測(cè)定杏桔合劑中苦杏仁苷的含量[J].安徽醫(yī)藥,2010,14(8):896-897
4 楊樹斌,劉青,孫立立.HPLC測(cè)定苦杏仁飲片中苦杏仁苷的含量[J].中成藥,2006,28(10):1452-1454
5 魏智銳,賈少謙. 高效液相色譜法測(cè)定麻杏定喘合劑中苦杏仁苷含量[J].中國(guó)藥業(yè),2009,l8(20):36-37
6 鄒小娟,謝和兵,錢芳,等.HPLC法測(cè)定苦杏仁中苦杏仁苷含量的方法研究[J].中國(guó)藥事,2009,23(1):33-36
Determination of amygdalin content in Ganshi granules by HPLC
Zhang Ying,Zhang Wenjun
(1.College of Traditional Chinese Medicine,Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193; 2.Tianjin Medical University General Hospital,Tianjin 300052)
Objective:To develop an HPLC for quantitative analysis of amygdalin in Ganshi granules.Methods:Mobile phase was composed of water, methanol, and acetonitrile at a rate of 70∶15∶10.The detection wavelength was at 210 nm.Results:The average recovery of amygdalin from Ganshi granules was 99.98%(RSD was 0.79%),and the content of amygdalin was 0.203 3 mg/g in Ganshi granules.Conclusion:Besides simplicity,the method yields accurate reproducible results and can therefore be used in the quality control of a mygdalin content in Ganshi granules.
Ganshi granules,amygdalin,HPLC
2015-05-21
R927.2
A
1006-5687(2015)04-0005-03