鄭 浩，顧曉瓊，高 飛，陳曉娟，王潔琳，郭彩嬌，皮 蕾

·臨床研究·

特發(fā)性血小板減少癥患兒抗核抗體及可提取性核抗原多肽抗體譜特點分析

鄭 浩，顧曉瓊，高 飛，陳曉娟，王潔琳，郭彩嬌，皮 蕾

目的 分析特發(fā)性血小板減少癥(ITP)患兒抗核抗體(ANA)及可提取性核抗原(ENA)多肽抗體譜特點。方法 選取2013年1月—2014年10月在廣州市婦女兒童醫(yī)療中心血液及免疫科門診就診或住院的初發(fā)ITP患兒67例為ITP組，另選取同期在該院健康體檢的50例健康兒童為對照組，分別應(yīng)用間接免疫熒光法和蛋白印跡法檢測ANA及ENA多肽抗體譜。結(jié)果 ITP組患兒ANA陽性率、抗ENA抗體陽性率均高于對照組(P<0.01)；ANA陽性ITP患兒治療前、后血小板計數(shù)及增值均低于ANA陰性患兒，且ANA陰性ITP患兒臨床療效優(yōu)于ANA陽性患兒(P<0.05)。結(jié)論 檢測ANA可反映ITP患兒對治療的反應(yīng)，ANA、抗SSA抗體等可能與ITP的發(fā)病及病情進展有關(guān)。

血小板減少；兒童；抗體,抗核；可提取性核抗原多肽抗體譜

特發(fā)性血小板減少癥(idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP)是以皮膚黏膜和內(nèi)臟出血、血小板減少、骨髓巨核細胞發(fā)育成熟障礙、血小板生存時間縮短及出現(xiàn)抗血小板自身抗體為主要特征的出血性疾病[1]，目前研究認為ITP與感染及免疫因素有關(guān)，但具體作用機制尚不清楚。除血小板自身抗體外，其他抗體如抗核抗體(ANA)等與ITP發(fā)病、臨床表現(xiàn)及預(yù)后也有密切關(guān)系。為進一步了解ITP的發(fā)病機制及有效治療手段，本研究對67例ITP患兒的ANA及可提取性核抗原(ENA)多肽抗體譜進行了分析，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2013年1月—2014年10月在廣州市婦女兒童醫(yī)療中心血液及免疫科門診就診或住院初發(fā)ITP患兒67例為ITP組，均符合我國ITP診斷標準[2]，其中男36例，女31例；年齡8個月～13歲，平均年齡5歲11個月；均無系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)及其他結(jié)締組織病。另選取同期在該院進行健康體檢的50例健康兒童作為對照組，其中男27例，女23例；年齡3個月～12歲。兩組兒童性別、年齡間具有均衡性。

1.2 治療方法及臨床療效判定標準 ITP組患兒給予口服潑尼松1～2 mg·kg-1·d-1，血小板<50×109/L患兒給予丙種球蛋白400 mg·kg-1·d-1，連用5 d。以治療后血小板計數(shù)≥100×109/L為完全反應(yīng)(CR),(50～99)×109/L為部分反應(yīng)(PR)，(30～49)×109/L且無活動性出血為微小反應(yīng)(MR)，<30×109/L或伴活動性出血為無反應(yīng)(NR)[2]。

1.3 檢測方法 ITP組患兒于未治療前抽血，對照組兒童與體檢當天抽血，送檢。血小板計數(shù)的檢測采用SYSMEX5000全自動血細胞分析儀。ANA的檢測采用間接免疫熒光法(IIF)：以猴肝及Hep-2細胞作為抗原基質(zhì)，根據(jù)猴肝及Hep-2細胞核是否產(chǎn)生特異性熒光判定是否存在ANA，以ANA滴度≥1∶100為陽性。抗ENA抗體的檢測采用蛋白印跡法(LIA)，包括抗nRNP、抗Sm、抗SS-A、抗SS-B、抗SCL-70、抗JO-1、抗CENP-B及抗dsDNA。ANA及抗ENA抗體檢測試劑均購自德國歐蒙公司。ITP組患兒治療1周后抽血復(fù)查血小板計數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 兩組兒童ANA檢測結(jié)果比較 ITP組患兒ANA陽性16例，陰性51例，陽性率為23.9%，其中顆粒型12例，胞質(zhì)型3例，核仁型1例；對照組兒童ANA均為陰性，ITP組患兒ANA陽性率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=13.714，P<0.01)。

2.2 兩組ENA多肽抗體譜檢測結(jié)果比較 ITP組患兒抗ENA抗體陽性19例(包括抗nRNP陽性2例、抗Sm陽性2例、抗SS-A陽性15例、抗SS-B陽性2例、抗CENP-B陽性2例)，陰性48例，陽性率為28.4%；對照組兒童抗ENA抗體均為陰性，ITP組患兒抗ENA抗體陽性率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=16.783，P<0.01)；在16例ANA陽性ITP患兒中抗ENA抗體陽性者13例，陽性率為81.3%，主要以抗SSA為主。

2.3 ANA陽性與陰性ITP患兒治療前、后血小板計數(shù)比較 ANA陽性ITP患兒治療前、后血小板計數(shù)及增值均低于ANA陰性患兒，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表1)。

Table 1 Comparison of blood platelet count between ITP children with positive or negative ANA

ANA例數(shù)治療前治療后增值陽性1614 43±7 91 71 125±39 80 56 69±38 05陰性5122 23±15 17119 13±74 3196 90±72 75t值-2 686-2 467-2 115P值0 0100 0160 038

注：ANA=抗核抗體

2.4 ANA陽性與陰性ITP患兒臨床療效比較 ANA陰性ITP患兒臨床療效優(yōu)于ANA陽性患兒，差異有統(tǒng)計學意義(u=-2.081,P=0.037，見表2)。

表2 ANA陽性與陰性ITP患兒臨床療效比較(例)

Table 2 Comparison of clinical effect between ITP children with positive or negative ANA

ANA例數(shù)CRPRMRNR陽性165254陰性5131866

注：CR=完全反應(yīng)，PR=部分反應(yīng)，MR=微小反應(yīng)，NR=無反應(yīng)

3 討論

ITP是一種免疫介導(dǎo)的血小板減少綜合征，目前研究認為抗體介導(dǎo)的胞吞作用是ITP血小板破壞的主要機制，主要抗原是血小板糖蛋白(giycoproteins,GP)[3]，但導(dǎo)致ITP免疫異常的確切機制尚不清楚。ANA自身抗體的靶抗原為多種細胞核成分，被認為是SLE、幼年類風濕關(guān)節(jié)炎及其他自身免疫性疾病的最好篩選指標，有研究顯示如果血小板與機體其他細胞的細胞核存在交叉抗原，則ANA有可能是造成血小板減少的一種自身抗體[4]。研究表明，20%～30%的ITP患者會伴有ANA陽性，且多數(shù)ANA陽性患者沒有系統(tǒng)性自身免疫性疾病表現(xiàn)，而目前關(guān)于ANA陽性ITP患者日后發(fā)展為SLE或其他結(jié)締組織病的風險性結(jié)論不一[5-6]。本研究結(jié)果顯示，67例ITP患兒ANA陽性率為23.9%，抗ENA抗體陽性率為28.4%，且以抗SSA陽性為主，與以往報道的成人ITP患者ANA及抗ENA抗體陽性率相近[6]。呂迎霞等[7]研究報道，ITP患兒ANA陽性率為54%，抗ENA抗體陽性率為94%。

目前，關(guān)于ANA、SSA等是否與ITP病情、療效及預(yù)后有關(guān)的研究結(jié)論不一。Li等[8]研究認為，ANA陽性ITP患者對糖皮質(zhì)激素的反應(yīng)與陰性ITP患者相似,但ANA陽性ITP患者在脾切除之后緩解期明顯縮短；Abbasi等[6]研究顯示，ANA陽性成人ITP患者較ANA陰性者對傳統(tǒng)激素治療的反應(yīng)性差，且抗SSA抗體是成人ITP進展為SLE的危險因素。本研究結(jié)果顯示，ANA陽性ITP患兒治療前后血小板計數(shù)及增值均低于ANA陰性患兒，ANA陰性患兒臨床療效優(yōu)于ANA陽性患兒。因此，檢測ANA可反映ITP患兒對治療的反應(yīng)，而ANA陽性患兒在選擇治療方案時，尤其是需要快速提升血小板計數(shù)至較高水平時應(yīng)慎重選擇合理有效的治療措施，并密切監(jiān)測患兒病情變化。

本研究結(jié)果還顯示，ITP組患兒ANA及抗ENA抗體陽性率均高于對照組，提示ANA、抗SSA抗體等可能與ITP的發(fā)病存在一定關(guān)系；而ANA陽性患者起病時病情較重，對激素治療的反應(yīng)較ANA陰性患者差，提示ANA可能與ITP病情進展有關(guān)，但其作用機制尚需進一步研究。而本研究納入的ITP患兒數(shù)量較少，觀察時間較短，今后尚需擴大樣本量進行更長時間的觀察。

[1]宋善俊.血液系統(tǒng)疾病[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:659-662.

[2]秦平,陳峰,侯明,等.大劑量地塞米松治療特發(fā)性血小板減少性紫癜的療效觀察[J].中華內(nèi)科雜志,2005,44(6):451-452.

[3]Stasi R,Evangeiista ML,Stipa E,et al.Idiopathic thrombocytopenic purpura: current concepts in pathophysioiogy and management[J].Thromb Haemost,2008,99(1):4-13.

[4]李一榮,姜偉超,邢輝，等.慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜患者ANA和ACA檢測及臨床意義[J].臨床血液學雜志,2003,16(6):287.

[5]Altintas A,Ozel A,Okur N,et al.Prevalence and clinical significance of elevated antinuclear antibody test in children and adult patients with idiopathic thrombocytopenic purpura[J].J Thromb Thrombolysis,2007,24(2):163-168.

[6]Abbasi SY,Milhem M,Zaru L,et al.A positive antinuclear antibody test predicts for a poor response to initial steroid therapy in adults with idiopathic thrombocytopenic purpura[J].Ann Hematol,2008,87(6):459-462.

[7]呂迎霞,黃慶華.50例兒童特發(fā)性血小板減少性紫癜自身抗體檢測結(jié)果分析[J].中國保健營養(yǎng),2013,24(3):1568-1569.

[8]Li HQ,Zhang L,Zhao H,et al.Chronic idiopathic thrombocytopenic purpura in adult Chinese patients: a retrospective single-centered analysis of 1791 cases[J].Chin Med J，2005,118(1):34-37.

(本文編輯：崔沙沙)

Characteristics of ANA and ENA Polypeptide Antibody Spectrum of Children with Idiopathic Thrombocytopenic Purpura

ZHENGHao,GUXiao-qiong,GAOFei,etal.DepartmentofClinicalLaboratory，WomenandChildren′sMedicalCenterofGuangzhou，Guangzhou510623，China

Objective To analyze the characteristics of ANA and ENA polypeptide antibody spectrum of children with idiopathic thrombocytopenic purpura(ITP).Methods From January 2013 to October 2014，a total of 67 children with ITP were selected as case group in the Department of Hematology and Rheumatology，Women and Children′s Medical Center of Guangzhou，and 50 healthy children were selected as control group at the same time.Indirect immunofluorescence technique and western blot was used to detect ANA and ENA polypeptide antibody spectrum，respectively.Results The positive rate of ANA and ENA polypeptide antibody of case group were statistically significantly higher than those of control group(P<0.01).The platelet count of children with positive ANA was statistically significantly lower than that of children with negative ANA in case group before and after treatment，respectively，and so was the appreciation(P<0.05)；clinical effect of children with negative ANA was statistically significantly betterer than that of children with positive ANA in case group(P<0.05).Conclusion The detection of ANA can reflect the response to treatment of children with ITP，ANA and anti-SSA antibody may be related to the onset and development of ITP.

Thrombocytopenia;Child;Antibodies,antinuclear;ENA polypeptide antibody spectrum

510623廣東省廣州市婦女兒童醫(yī)療中心檢驗科

鄭浩，顧曉瓊，高飛，等.特發(fā)性血小板減少癥患兒抗核抗體及可提取性核抗原多肽抗體譜特點分析[J].實用心腦肺血管病雜志，2015，23(5)：137-139.[www.syxnf.net]

R 725.582

B

10.3969/j.issn.1008-5971.2015.05.047

2015-01-20；

2015-03-20)

Zheng H,Gu XQ,Gao F,et al.Characteristics of ANA and ENA polypeptide antibody spectrum of children with idiopathic thrombocytopenic purpura[J].Practical Journal of Cardiac Cerebral Pneumal and Vascular Disease，2015，23(5)：137-139.