舒金富，羅紅梅

衢州市食品藥品檢驗所，浙江 衢州 324000

丹參酮ⅡA原料藥中有機溶劑殘留量氣相色譜法測定

舒金富，羅紅梅

衢州市食品藥品檢驗所，浙江 衢州 324000

目的：采用氣相色譜法測定丹參酮ⅡA原料藥中乙醇、乙酸乙酯和二氯甲烷的殘留量。方法：采用Agilent DB-624毛細管色譜柱，以DMF作為溶劑，程序升溫測定3種有機溶劑的殘留量。結果：乙醇、乙酸乙酯和二氯甲烷的檢測濃度線性范圍分別2.0～400.0 μg/mL（γ=0.9998），2.0～390.0 μg/mL（γ=0.9993），2.0～50.0 μg/mL（γ=0.9992）；平均回收率分別為100.1%，98.1%，97.7%；檢測限分別為0.3 μg/mL、0.32 μg/mL、0.56 μg/mL，定量限為0.64 μg/mL、0.656 μg/mL、1.67 μg/mL。結論：氣相色譜法簡便、專屬性強，能準確可靠地檢測出丹參酮ⅡA原料藥中乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三種有機溶劑的殘留量，適合用于丹參酮ⅡA原料藥中溶劑殘留量的測定。

丹參酮ⅡA；殘留溶劑；氣相色譜法

丹參酮ⅡA為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根莖，具有擴張冠狀動脈、增加冠脈血流量、改善心肌收縮力、促進心肌再生、抑制內源性膽固醇的合成等作用，臨床常用于治療冠心病、心絞痛、心律過速等［1］。藥物生產過程中往往會使用有機溶劑，其殘留量對人體均具有不同程度的毒性且會影響藥物的穩(wěn)定性［2］。丹參酮ⅡA原料藥在生產時往往會使用乙醇、乙酸乙酯及二氯甲烷等有機溶劑，在《中華人民共和國藥典》2010年版中這些有機溶劑均為需檢查種類。為了保證用藥安全，控制產品的質量，本研究采用氣相色譜對上述3種有機溶劑的殘留量進行了檢測，現報道如下。

1　材料與方法

1.1材料與試劑實驗儀器為Agilent7890A氣相色譜儀、氫火焰離子化檢測器（FID）；Mettler XP205型電子天平。丹參酮ⅡA（TanⅡA，自制）；N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為色譜純；其余試劑為分析純。

1.2色譜條件色譜柱：Agilent DB-624毛細管柱（30 m× 0.324 mm×1.80 μm）；柱溫：初始溫度為40℃，以5℃/min的速度升至80℃，保持1 min后，再以50℃/min的速度升溫至220℃，保持2 min；進樣口溫度：200℃；檢測器溫度：250℃；載氣：氮氣；流速：1.0 mL/min；進樣量：2 mL；分流比：12∶1。

1.3溶液的制備對照品溶液：精密稱取異丙醇適量，加入DMF溶解并稀釋成為濃度為2000 μg/mL的內標溶液；精密稱取乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷適量，加入DMF分別制成4000 μg/mL、4000 μg/mL、2000 μg/mL的對照品貯備液。精密移取貯備液適量于20 mL量瓶中，加入內標溶液1 mL，以DMF將乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷濃度分別稀釋成為250 μg/mL、250 μg/mL、30 μg/mL的混合對照品樣品溶液；精密稱取丹參酮ⅡA0.5 g，置于10 mL量瓶中，加內標溶液1 mL，再用DMF稀釋至刻度，放至室溫，加DMF進行定容，得到50000 μg/mL的混懸液，過濾取上清即為樣品溶液。

2　結果

2.1系統(tǒng)適用性試驗見圖1。移取對照品溶液按上述色譜條件進行測定，記錄色譜圖。結果表明，各相鄰色譜峰的分離度均大于2，理論板數均不低于11000，系統(tǒng)適用性較好。

2.2線性關系試驗見表1。精密移取乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷對照品混合溶液各2 mL進樣，測得峰面積，以對照品峰面積/內標峰面積（y）對對照品溶液濃度（x）進行線性回歸。結果顯示，乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷在相應的線性范圍內線性關系良好。

2.3精密度試驗取混合對照品溶液2 mL，重復檢測6次，計算可得出乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷峰面積的相對標準偏差（RSD）分別為1.5%、2.2%及2.6%，各溶劑峰面積的RSD均小于5%（n=6），表明精密度較好。

2.4檢測限和定量限試驗分別取乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷對照貯備液，用DMF稀釋溶解后進樣，以S/N=3計算檢測限，以S/N=10計算定量限。結果乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷的檢測限分別為0.3 μg/mL、0.32 μg/mL、0.56 μg/mL，定量限分別為0.64 μg/mL、0.656 μg/mL、1.67 μg/mL。

2.5回收率試驗見表2。稱取已知溶劑殘留量的樣品0.25 g，置于10 mL量瓶中，精密移取對照品貯備液，分別加入高、中、低3種濃度的對照品貯備液（相當于各溶劑限度80%、100%、120%）各3份，加入1 mL內標液，用DMF稀釋，根據峰面積計算回收率及RSD。測得3種溶劑的平均回收率為97.7%～100.1%；RSD為0.67%～1.29%，均小于5%（n=3）。

2.6穩(wěn)定性試驗取對照品溶液，室溫下放置0、2、4、8、12 h后分別進樣檢測，測得乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷在12 h的峰面積RSD分別為3.4%、2.1%、3.2%（n=3），表明本溶液在室溫放置12 h內穩(wěn)定性良好。

2.7樣品的測定精密量取混合對照品溶液和樣品溶液各2 mL，記錄色譜圖，以峰面積計算樣品中殘留溶劑的含量，樣品中未檢出乙醇，乙酸乙酯的殘留量分別為0.020%、0.022%、0.021%，二氯甲烷的殘留量分別為 0.011%、0.008%、0.012%，殘留量均＜0.03%。

3　討論

3.1溶劑的選擇氣相色譜的常用溶劑有水、DMF、乙醇、DMSO（二甲基亞砜）等，丹參酮ⅡA易溶于氯仿，在其他常見的有機溶劑中溶解度較差［3］。但選用氯仿作為溶劑，其溶劑峰會對二氯甲烷的檢出造成干擾；以DMF作用溶劑，大部分樣品均可溶解，且不干擾其他組分的檢出，同時采用超聲的方式釋放出殘留溶劑，過濾后取濾液作為檢測液［4］。對濾渣進行二次處理，試驗結果顯示經二次處理后，有機溶劑殘留量均低于檢出限，說明采用DMF作為溶劑測定效果良好。

3.2內標物的選擇采用內標法有機溶劑的含量進行測定，可有效減少各種誤差（包括儀器誤差及操作誤差）的出現［5］。內標物應滿足以下要求：試樣中不含有該物質；與被測組分性質比較接近；不會與試樣發(fā)生化學反應；出峰位置位于被沒組分附近，且無組分峰影響［6～7］。本實驗中選擇異丙醇作為內標物，可以和3種待測溶劑進行有效分離，且在分析中無峰出現，不造成干擾，經驗證效果滿意。

3.3色譜柱的選擇由于乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三種溶劑的極性存在不同程度的差異，在最初采用DB-5MS氣相色譜柱時，分離度較低，峰型并不理想；在嘗試用中等極性的色譜柱Agilent DB-624時，3種有機溶劑和內標液間分離度均大于2，且峰型較好，表明采用該色譜柱能將3種有機溶劑進行有效分離。

3.4溫度的選擇由于乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三種溶劑和DMF之間沸點存在較大差異，對于寬沸程樣品應采用程序升溫［8］。使柱溫按照一定的程序進行升溫，低沸點的組分在較低溫度下分離，高沸點組分在較高溫度下分離，能較快地去除溶劑DMF，縮短分析時間，峰形理想，達到最佳的分離效果。

3.5進樣方式的選擇本研究采用頂空進樣法測定3種有機溶劑的殘留量。頂空氣相色譜法（HS-GC）又稱液上氣相色譜分析，是一種聯合操作技術。頂空色譜進樣器可與國內外各種氣相色譜儀相連接，它將液體或固體樣品中的揮發(fā)性組分直接導入氣相色譜儀進行分離和檢測［9］。相比于經典氣相色譜法，頂空進樣法可以有效避免樣品對色譜柱的污染以及樣品基質對檢測結果的干擾［10］。

丹參酮ⅡA原料藥是一種廣泛應用于治療心血管病的中成藥制劑，但關于其殘留溶劑的實驗研究，國內外則少有報道。本研究根據人用藥品注冊技術規(guī)范國際協(xié)調會（ICH）的要求以及2010年版《中華人民共和國藥典》中的相關規(guī)定，選用DMF作為試驗的溶解介質，對樣品有很好的溶解性，且對待測組分無干擾；采用氣相色譜法對丹參酮ⅡA原料藥中的乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三種有機溶劑的殘留量進行了測定。經驗證，此實驗方法在線性、定量限、檢測限、精密度、穩(wěn)定性、回收率等系統(tǒng)適用性方面均表現良好，且具有方法簡便、專屬性強等優(yōu)點。因此頂空氣相色譜法能夠準確可靠地檢測出丹參酮ⅡA原料藥中乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷三種有機溶劑的殘留量，為修訂藥品質量標準提供依據，對于用藥安全和藥品質量保障都具有重要意義。

［1］張兆穎，儲婷，馬偉從，等.丹參酮ⅡA脂質體的制備及對HepG2/ADR細胞增殖的抑制作用［J］.華西藥學雜志，2014，2（1）：33-35.

［2］劉付建，沈宏林，李衍春，等.氣相色譜法測定溶劑型木器涂料中13種有機溶劑含量［J］.中南林業(yè)科技大學學報，2014，8（8）：94-96，119.

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［4］王英瑛，李俊.毛細管氣相色譜法測定舒必利中有機溶劑殘留量［J］.中國藥師，2014，14（6）：934-936.

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［6］楊玉琴，李俊.頂空毛細管氣相色譜法測定醋酸可的松中6種有機溶劑殘留量［J］.中國藥師，2014，12（6）：937-939.

［7］孫晉瑞，伊星璐，張昊然，等.氣相色譜法測定左西孟旦原料藥中6種有機溶劑殘留量［J］.中國藥房，2014，41（21）：1995-1997.

［8］謝穎，戴丹，謝春燕.氣相色譜法測定丹參酮ⅡA原料藥中有機溶劑殘留量［J］.華西藥學雜志，2014，3（1）：84-86.

［9］劉蟬.氣相色譜法測定維生素E軟膠囊中8種有機溶劑殘留量［J］.安徽醫(yī)藥，2014，8（4）：624-626.

［10］劉薇芝，胡漢昆，鄭保根，等.氣相色譜法測定磷酸二甲啡烷中有機溶劑殘留［J］.中國藥師，2014，8（4）：563-565.

（責任編輯：駱歡歡）

R284.2

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0256-7415（2015）03-0239-03

10.13457/j.cnki.jncm.2015.03.115

2014-10-05

舒金富（1969-），男，主管藥師，主要從事藥品檢驗工作。