向茜茜 綜述，張 曦,楊世杰 審校

(全軍血液病中心/第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院血液科，重慶 400037)

·綜 述·

骨髓基質(zhì)細(xì)胞相關(guān)分子在急性髓系白血癥發(fā)生、發(fā)展中的表達(dá)及意義*

向茜茜 綜述，張 曦△,楊世杰 審校

(全軍血液病中心/第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院血液科，重慶 400037)

白血病，髓細(xì)胞，急性；黏附分子；細(xì)胞外基質(zhì)

造血微環(huán)境是由骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)構(gòu)成,其對(duì)造血干細(xì)胞定居、增殖、分化、發(fā)育和成熟起到重要的支持和調(diào)節(jié)作用[1]。BMSCs是起源于胚胎發(fā)育的間充質(zhì)干細(xì)胞，可分化產(chǎn)生成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等，在造血干/祖細(xì)胞的定居、增殖、分化、發(fā)育、成熟、釋放、遷移、凋亡等生理病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。正常的造血過(guò)程需要造血干細(xì)胞和造血微環(huán)境之間復(fù)雜的雙向相互作用，一旦微環(huán)境的性質(zhì)和功能發(fā)生改變，將會(huì)對(duì)造血干細(xì)胞的性狀和功能產(chǎn)生較大的影響，導(dǎo)致白血病的發(fā)生。急性髓系白血病(acute myelogenous Leukemia，AML)是造血系統(tǒng)的克隆性疾病，源于造血干細(xì)胞的惡性增殖，產(chǎn)生無(wú)效造血，具有較強(qiáng)的植入和侵襲能力。較多的研究指出AML患者的BMSCs出現(xiàn)了重要的性質(zhì)和功能的改變，且其數(shù)量有明顯地減少，對(duì)未成熟的造血細(xì)胞支持能力減弱。BMSCs是造血微環(huán)境的重要組成部分，通過(guò)與白血病細(xì)胞的黏附作用、分泌細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)，在AML的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。

1 BMSCs與急性白血病細(xì)胞的黏附作用

BMSCs 和白血病細(xì)胞表面均表達(dá)多種黏附分子，根據(jù)黏附分子其編碼基因結(jié)構(gòu)的同源性及產(chǎn)物的功能特點(diǎn)，將其分為6個(gè)家族，包括免疫球蛋白家族、鈣黏素家族、選擇素家族、血管附著素家族、整合素家族及CD44等黏附分子家族。這些黏附分子介導(dǎo)了細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的直接接觸，通過(guò)這些黏附作用發(fā)揮各自的作用。正是BMSCs和白血病細(xì)胞間的相互接觸，使BMSCs對(duì)白血病細(xì)胞的存活和增殖發(fā)揮了重要的調(diào)節(jié)作用。

血管細(xì)胞黏附分子1(VCAM1)是免疫球蛋白超家族中的重要成員，表達(dá)于骨髓間質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及一些造血細(xì)胞，主要為BMSCs所分泌。VCAM1是整合素家族B1組VLA-4 的配體，VCAM1與VLA-4共同介導(dǎo)了造血細(xì)胞對(duì)間質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的黏附，在干細(xì)胞的歸巢方面起重要作用。間質(zhì)細(xì)胞表面黏附分子的改變，引起了骨髓龕中造血細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的交互作用，導(dǎo)致機(jī)制信號(hào)的損害，出現(xiàn)腫瘤基因突變和基因的不穩(wěn)定性，從而形成不正常的間質(zhì)微環(huán)境，使造血細(xì)胞分化受阻。國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道顯示，在初診AML骨髓基質(zhì)細(xì)胞中VCAM1呈低水平表達(dá)[2-5]。VCAM-1及VLA-4兩者相互作用后還可能使干細(xì)胞不能接受正常的增殖分化信號(hào)，從而出現(xiàn)白血病干細(xì)胞的無(wú)限增生和分化受阻，促進(jìn)了白血病細(xì)胞的惡性增殖[4,6]。國(guó)內(nèi)李學(xué)剛等[2]研究表明，AML患者復(fù)發(fā)期骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液中VCAM-1的水平高于緩解期，其在有髓外浸潤(rùn)患者中表達(dá)增高，推測(cè)可能與AML的復(fù)發(fā)及髓外浸潤(rùn)具有一定的相關(guān)性。

細(xì)胞間黏附分子1(ICAM-1，CD54)，是目前研究最多的黏附分子，表達(dá)于骨髓造血細(xì)胞和BMSCs，主要表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞上，其配體為L(zhǎng)FA-1(CD11a)。兩者通過(guò)參與BMSCs與腫瘤細(xì)胞的黏附和對(duì)腫瘤細(xì)胞免疫殺傷這兩個(gè)過(guò)程，影響腫瘤細(xì)胞的存活與侵襲力。國(guó)內(nèi)有研究報(bào)道，通過(guò)對(duì)AML基質(zhì)細(xì)胞上ICAM-1分子進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示其陽(yáng)性率高于正常對(duì)照組；且經(jīng)DA方案化療后，ICAM-1陽(yáng)性率高的患者比陽(yáng)性率低的患者療效差[7]。ICMA-1這種黏附特性的增強(qiáng)，有利于白血病細(xì)胞在受損的微環(huán)境下的增殖、侵襲能力增強(qiáng)，白血病細(xì)胞的自我保護(hù)及抗藥性提高，可能使殘留白血病細(xì)胞重新獲得增殖優(yōu)勢(shì)。

黏附分子對(duì)誘導(dǎo)白血病細(xì)胞耐藥和抑制其凋亡產(chǎn)生了重要的作用[8]。已有研究表明，骨髓中神經(jīng)細(xì)胞黏附分子(NCAM，CD56)、ICAM-1、VCAM-1表達(dá)的增高，與白血病細(xì)胞的髓外浸潤(rùn)密切相關(guān)，AML細(xì)胞可能通過(guò)黏附機(jī)制介導(dǎo)其浸潤(rùn)的發(fā)生[9-10]。

鈣黏素是介導(dǎo)Ca2+依賴性細(xì)胞間黏附的一大類黏附分子，屬于跨膜糖蛋白家族,已知一定類別和分化階段的造血細(xì)胞及BMSCs表達(dá)E-鈣黏素、N-鈣黏素、VE-鈣黏素。E-鈣黏蛋白(E-cadherin，CDH1)是黏附分子鈣黏蛋白超家族的重要成員，主要表達(dá)于上皮細(xì)胞，為一種膜糖蛋白，形成關(guān)鍵的細(xì)胞間黏附。有研究報(bào)道E-cadherin在AML的BMSCs中被檢測(cè)到，其mRNA水平增高[11]。近期的研究還發(fā)現(xiàn)E-cadherin也表達(dá)于幼紅細(xì)胞及向下分化的成熟紅細(xì)胞，在紅系白血病中出現(xiàn)特征性表達(dá)[12-13]。在骨髓造血微環(huán)境中，N-鈣黏蛋白(N-cadherin)表達(dá)于正常造血干細(xì)胞龕中的成骨細(xì)胞，同時(shí)也在部分造血干細(xì)胞中表達(dá)，介導(dǎo)成骨細(xì)胞與造血干細(xì)胞間的相互作用[14]。在AML發(fā)生時(shí)，白血病干細(xì)胞定位于骨髓造血干細(xì)胞龕中，并處于靜息狀態(tài)，使得白血病干細(xì)胞能夠耐受化療藥物的殺傷作用，出現(xiàn)抗藥性[15-16]。

CD44屬于黏附分子大家族，是細(xì)胞表面的跨膜糖蛋白，表達(dá)于選擇素E的一種透明質(zhì)酸受體。早期已有研究發(fā)現(xiàn)其通過(guò)與骨髓微環(huán)境中龕內(nèi)的選擇素和透明質(zhì)酸結(jié)合，參與白血病細(xì)胞的歸巢、浸潤(rùn)[17]。近期有研究發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)CD44表達(dá)水平增高的白血病干細(xì)胞具有較強(qiáng)的侵襲力，且與白血病復(fù)發(fā)有關(guān)[18]。另外有研究指出CD44可能通過(guò)與BMSCs的黏附，從而阻止AML細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)白血病細(xì)胞的增殖、存活能力[19]。

選擇素是血管黏附分子大家族中的一大類成員,屬于跨膜糖蛋白家族,為典型的Ⅰ型穿膜糖蛋白。骨髓內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)E-選擇素和P-選擇素,而選擇素配體在造血細(xì)胞表達(dá)。選擇素與其配體結(jié)合，形成BMSCs與造血細(xì)胞的黏附。在Ca2+的參與下，P選擇素介導(dǎo)造血細(xì)胞黏附到內(nèi)皮細(xì)胞的表面，從而在腫瘤的轉(zhuǎn)移中起到的重要作用。有研究報(bào)道E-選擇素、P-選擇素在初診AML患者中活性增高，可能與預(yù)后相關(guān)[8]。

基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1，CXCL12)是趨化因子CXC亞家族成員，由BMSCs及內(nèi)皮細(xì)胞分泌釋放，又名CXCL12，趨化因子受體(CXCR4)為其受體。SDF-1與骨髓基質(zhì)細(xì)胞緊密相連，黏附后為白血病細(xì)胞提供生長(zhǎng)和耐藥的信號(hào)，在白血病發(fā)生和發(fā)展中起了非常重要作用[20]。SDF-1與CXCR4共同介導(dǎo)了AML 細(xì)胞黏附至基質(zhì)細(xì)胞，與白血病干細(xì)胞歸巢、殘留、增殖相關(guān)[21]。兩者的共同作用還保護(hù)AML細(xì)胞免于自身凋亡及藥物誘發(fā)的凋亡[22]。曾東風(fēng)等[23]報(bào)道，CXCR4高表達(dá)于AML細(xì)胞中，其表達(dá)的程度與AML浸潤(rùn)、耐藥等存在相關(guān)性。國(guó)外也有研究報(bào)道，CXCR4的表達(dá)上調(diào)，使BMSCs對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性[24]。

2 BMSCs的ECM與AML細(xì)胞的相互作用

BMSCs有豐富的胞漿，并產(chǎn)生ECM。BMSCs分泌到細(xì)胞表面的ECM部分為一些蛋白多糖和氨基葡聚糖。BMSCs及其ECM多與造血細(xì)胞的黏附有關(guān)。整合素的大部分配體是細(xì)胞外基質(zhì)成分,如纖維連接蛋白、層黏連蛋白及膠原等。

纖維蛋白1(FN1)是一種重要的基質(zhì)蛋白，與細(xì)胞黏附、遷徙及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。有研究報(bào)道與健康人群的BMSCs比較，初診AML的BMSCs中FN1的表達(dá)下調(diào)[25]。細(xì)胞黏附分子緩慢抗原-4(VLA-4)是一種重要的黏附分子，它屬于整合素家族，大量表達(dá)于白血病細(xì)胞。VLA-4通過(guò)與BMSCs表面的FN1相互作用，激活PI3K/AKT/BCL-2信號(hào)通路，提高bcl-2的表達(dá)，從而保護(hù)白血病細(xì)胞免于失巢凋亡及藥物誘導(dǎo)的凋亡，誘導(dǎo)白血病細(xì)胞產(chǎn)生抗藥性[26-27]。

Ⅳ型膠原纖維(collagen Ⅳ)是構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分，而變性的Ⅳ型膠原纖維促進(jìn)了AML細(xì)胞的遷移和黏附[28]?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)有助于ECM的更新，對(duì)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移起了關(guān)鍵作用。MMP-2是降解Ⅳ型膠原的主要酶，屬于鋅離子依賴性內(nèi)肽酶家族成員。Wang等[29]研究證實(shí)MMP-2及其抑制物TIMP-2在AML中出現(xiàn)異常表達(dá)。朱希山等[30]報(bào)道在AML細(xì)胞和BMSCs共培養(yǎng)中，AML細(xì)胞的高侵襲力和MMP-2及TIMP-2高表達(dá)相關(guān)。MMP-7是MMPs家族中重要成員之一，亦稱基質(zhì)溶素，其主要作用底物為層黏連蛋白(LN)、纖維蛋白、蛋白多糖和核心蛋白。MMP-7與腫瘤脈管生成可能有關(guān)[31]。組織金屬蛋白酶抑制因子3(TMP3)能拮抗MMP活性，抑制腫瘤的生長(zhǎng)、血管形成、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。國(guó)內(nèi)有研究報(bào)道正常BMSCs表達(dá)較高水平的TMP3，但在AML的BMSCs中出現(xiàn)其表達(dá)缺失[25]。

死亡關(guān)聯(lián)蛋白激酶1(DAPK1)是一種細(xì)胞凋亡前鈣調(diào)蛋白介導(dǎo)的絲氨酸/蘇氨酸鈣調(diào)蛋白激酶，從細(xì)胞外基質(zhì)中分離出來(lái)，參與數(shù)個(gè)由IFN-γ、IFN-α、活化的Fas蛋白啟動(dòng)的細(xì)胞凋亡途徑[32]。有研究報(bào)道在AML中DAPK1被大量、頻繁地甲基化，從而可能導(dǎo)致在白血病的轉(zhuǎn)化中出現(xiàn)成熟受損及髓外浸潤(rùn)[33]。

3 間隙連接細(xì)胞間通訊(GJIC)及連接蛋白43(Cx43)

Cx43是存在于細(xì)胞膜上的一種連接蛋白，是GJIC的主要成分。Cx43在急性白血病BMSCs間的GJIC表達(dá)是缺失的，可在有效的化療后恢復(fù)。GJIC在白血病BMSCs中，對(duì)細(xì)胞的增殖、細(xì)胞凋亡及共培養(yǎng)白血病細(xì)胞的藥物敏感性等方面起了重要的作用。目前大量的研究表明Cx43表達(dá)的強(qiáng)弱及GJIC功能的高低與腫瘤細(xì)胞的增殖能力成負(fù)相關(guān)。正常BMSCs可通過(guò)GJIC抑制白血病細(xì)胞增殖，且使白血病細(xì)胞停滯在G0期[34]。國(guó)內(nèi)外的研究均表明AML的BMSCs中Cx43的水平較健康對(duì)照組及化療后達(dá)到完全緩解的患者明顯減低，并出現(xiàn)定位異常，其GJIC亦明顯減弱[35-36]。

4 展 望

AML的發(fā)生、發(fā)展與造血微環(huán)境的功能及性質(zhì)的改變密切相關(guān)。BMSCs作為造血微環(huán)境的主要組成部分，通過(guò)與白血病細(xì)胞的黏附作用、分泌細(xì)胞外基質(zhì)，在AML的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。BMSCs作為目前研究的熱點(diǎn)，其功能及作用還有很多尚不明確，本文僅對(duì)其中部分機(jī)制和功能做了綜述。對(duì)其進(jìn)一步的研究有望為急性白血病的治療提供更多科學(xué)依據(jù)及方法。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2015.29.009

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81270569)。

：向茜茜(1985-)，碩士，主治醫(yī)師，主要從事造血微環(huán)境、急性白血病的基礎(chǔ)及臨床研究?！?/p>

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R733.71

A

1671-8348(2015)29-4056-03

2015-04-07

2015-06-15)