艾 維，楊云華，阮穎新，趙連玉，焦軍東

?

·論著·

鐵超負(fù)荷與腎間質(zhì)纖維化的關(guān)系

艾 維，楊云華，阮穎新，趙連玉，焦軍東

目的 探討鐵超負(fù)荷與腎間質(zhì)纖維化(RIF)的關(guān)系。方法 2012年2月—2013年1月，選取同批清潔級(jí)健康Wister雄性大鼠84只，按體質(zhì)量分層后隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、模型+右旋糖酐鐵組(右旋糖酐鐵500 mg/kg)、模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組(右旋糖酐鐵500 mg/kg+去鐵敏150 mg·kg-1·d-1)、模型+右旋糖酐鐵+N-乙酰半胱氨酸(NAC)組(右旋糖酐鐵500 mg/kg+NAC 50 mg·kg-1·d-1)、模型+右旋糖酐鐵+維生素E組(右旋糖酐鐵500 mg/kg+維生素E 50 mg·kg-1·d-1)，每組14只；根據(jù)術(shù)后觀察時(shí)間的不同，將每組大鼠采用簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣法進(jìn)行均分并分別于術(shù)后7 d及術(shù)后10 d進(jìn)行觀察。除假手術(shù)組外，其余5組均采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎模型。術(shù)后第7、10天分別取大鼠左側(cè)腎臟組織制成切片，進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色、馬松染色(Masson染色)及普魯士蘭染色于光鏡下觀察，比較各組RIF程度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。結(jié)果 HE染色：模型組第7天腎間質(zhì)有少量炎性細(xì)胞，腎小管上皮細(xì)胞變矮、腫脹、細(xì)胞核變長(zhǎng)，出現(xiàn)顆粒和空泡變性；第10天腎間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、充血，腎小管擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞萎縮、壞死、部分脫失，基底膜出現(xiàn)斷裂、潰解，腎間質(zhì)出現(xiàn)輕度增寬，腎小球無(wú)明顯病變。模型+右旋糖酐鐵組病變較模型組明顯，模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組、模型+右旋糖酐鐵+NAC組、模型+右旋糖酐鐵+維生素E組病變較模型組輕，假手術(shù)組未見(jiàn)明顯變化。Masson染色：第7天模型組腎間質(zhì)僅有少量膠原纖維,模型+右旋糖酐鐵組可見(jiàn)大量膠原纖維增生；第10天模型組可見(jiàn)少量膠原纖維，模型+右旋糖酐鐵組可見(jiàn)明顯膠原纖維增生、腎間質(zhì)增寬，擴(kuò)張的腎小管基底膜旁膠原纖維增生，腎小球周圍可見(jiàn)明顯膠原纖維，腎小球中無(wú)膠原纖維增生，假手術(shù)組腎小管及腎間質(zhì)無(wú)明顯改變。6組大鼠第7天及第10天RIF程度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型+右旋糖酐鐵組RIF程度重于模型組，模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組、模型+右旋糖酐鐵+NAC組、模型+右旋糖酐鐵+維生素E組RIF程度輕于模型+右旋糖酐鐵組(P<0.05)；各組第10天RIF程度重于第7天(P<0.05)。普魯士蘭染色：第7天模型+右旋糖酐鐵組腎小管及腎間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)較多藍(lán)色顆粒，模型+右旋糖酐鐵+維生素E組腎小管及腎間質(zhì)可見(jiàn)少量藍(lán)色顆粒，其余組未見(jiàn)藍(lán)色顆粒；第10天各組均未見(jiàn)藍(lán)色顆粒。第7天模型+右旋糖酐鐵組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)高于模型+右旋糖酐鐵+維生素E組(t=5.85,P=0.000 1)。結(jié)論 右旋糖酐鐵會(huì)加重RIF，但去鐵敏和抗氧化劑(NAC和維生素E)可減輕由于鐵超負(fù)荷導(dǎo)致的RIF；鐵超負(fù)荷加重RIF可能與其氧化應(yīng)激的過(guò)程有關(guān)。

鐵超負(fù)荷；腎間質(zhì)纖維化；氧化性應(yīng)激 ；抗氧化劑

艾維，楊云華，阮穎新，等.鐵超負(fù)荷與腎間質(zhì)纖維化的關(guān)系[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2015，18(21)：2520-2525.[www.chinagp.net]

Ai W,Yang YH,Ruan YX,et al.Relationship between iron overload and renal interstitial fibrosis[J].Chinese General Practice，2015，18(21)：2520-2525.

腎間質(zhì)纖維化(renal interstitial fibrosis，RIF)是各種腎臟疾病進(jìn)展至終末期腎病的共同途徑和主要病理基礎(chǔ)，因此對(duì)于防治終末期腎衰竭，早期防治RIF有重要意義[1]。臨床上，鐵劑是治療慢性腎衰竭的重要部分，血漿中存在具有催化活性的游離鐵時(shí)，其可能通過(guò)Fenton反應(yīng)產(chǎn)生活性氧(ROS)，而其中的ROS族是纖維化的重要促進(jìn)因素[2]，從而加重慢性腎衰竭。因此，本研究擬通過(guò)分析鐵超負(fù)荷與RIF間的關(guān)系，以對(duì)臨床合理應(yīng)用鐵劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2012年2月—2013年1月，選取同批清潔級(jí)健康Wister雄性大鼠84只，3月齡，體質(zhì)量160～200 g，購(gòu)自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物研究所(許可證號(hào)：黑動(dòng)字第80050/009)。

1.2 試劑 注射用右旋糖酐鐵、去鐵敏、N-乙酰半胱氨酸(NAC)及口服維生素E由Sigma公司提供；鹽酸、亞鐵氰化鉀、蘇木素-伊紅(HE)、麗春紅、冰醋酸及苯胺藍(lán)等病理染色試劑、戊巴比妥鈉和甲醛由哈爾濱化工試劑廠提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 分組及手術(shù)方法 大鼠飼養(yǎng)在自然晝夜光線下相對(duì)濕度為60%～70%的哈爾濱醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物室，保持空氣流通。實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由飲水、進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料(其中粗蛋白質(zhì)含量為19.4%)，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d。將大鼠按體質(zhì)量分層后隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、模型+右旋糖酐鐵組、模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組、模型+右旋糖酐鐵+NAC組、模型+右旋糖酐鐵+維生素E組，每組14只；根據(jù)術(shù)后觀察時(shí)間的不同，將每組大鼠采用簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣法進(jìn)行均分并分別于術(shù)后7 d及術(shù)后10 d進(jìn)行觀察。除假手術(shù)組外，其余5組均采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎模型(unilateral ureteral obstruction model，UUO)[3]，將5組大鼠左側(cè)輸尿管結(jié)扎，按30 mg/kg使用1%戊巴比妥鈉麻醉大鼠；麻醉大鼠后，在無(wú)菌條件下，取長(zhǎng)約3 cm的腹部切口；將皮膚各層腹肌及腹膜依次剪開(kāi)，拉開(kāi)皮膚、肌肉，找到兩側(cè)輸尿管并進(jìn)行分離，在位于左腎下極下1 cm處，采用4號(hào)絲線對(duì)左側(cè)輸尿管進(jìn)行雙重結(jié)扎，在兩條結(jié)扎線間，將輸尿管剪斷，然后用0.9%氯化鈉溶液及慶大霉素注射液進(jìn)行腹腔灌洗，之后將腹膜、肌肉和皮膚依次剪斷縫合。假手術(shù)組只切開(kāi)腹部后縫合切口。

1.3.2 給藥方法 除假手術(shù)組及模型組外，其余各組在術(shù)后即刻一次性腹腔注射500 mg/kg右旋糖酐鐵[4]，模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組、模型+右旋糖酐鐵+NAC組于術(shù)前1 d分別腹腔注射150 mg·kg-1·d-1去鐵敏[4]和50 mg·kg-1·d-1NAC[5]，模型+右旋糖酐鐵+維生素E組于術(shù)前1 d以灌胃給藥的方式給予50 mg·kg-1·d-1維生素E[6]。

1.3.3 取材方法 術(shù)后第7、10天分別取大鼠左側(cè)腎臟組織：以1%戊巴比妥鈉麻醉大鼠后，依次切開(kāi)皮膚、腹肌、腹膜，使用0.9%氯化鈉溶液灌洗腹腔，切取腎臟組織后迅速去除包膜，正中縱向剖開(kāi)為兩半，一半迅速放入10%中性甲醛溶液中浸泡24 h，后放置4 ℃冰箱保存；另一部分迅速放入-80 ℃冰箱保存。將腎臟組織進(jìn)行浸蠟和包埋制成蠟塊，切片后，進(jìn)行HE染色、馬松染色(Masson染色)及普魯士蘭染色以備光鏡下觀察。

1.3.4 觀察指標(biāo)

1.3.4.1 大體觀察 與假手術(shù)組比較其余各組大鼠腎臟大小、顏色、腎盂及腎盞的變化，皮質(zhì)、髓質(zhì)界限。

1.3.4.2 病理檢查 (1)HE染色：每張切片隨機(jī)取6個(gè)光鏡視野觀察第7天和第10天腎小管上皮細(xì)胞、腎間質(zhì)、腎小管形態(tài)變化以及細(xì)胞浸潤(rùn)情況。(2)Masson染色[7]：第7天和第10天于高倍鏡(×400)下不含腎小球區(qū)隨機(jī)選取6個(gè)不重疊光鏡視野觀察RIF面積和同視野腎小管間質(zhì)總面積，計(jì)算RIF程度=(RIF面積/同視野腎小管間質(zhì)總面積)×100%。(3)普魯士蘭染色[8]：第7天和第10天鏡下觀察細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞含鐵血黃素呈藍(lán)色,細(xì)胞核呈紅色；根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞分布情況,每張切片拍攝6個(gè)高倍鏡(×400)陽(yáng)性視野，計(jì)算每個(gè)視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 大體觀察 與假手術(shù)組比較，模型組左側(cè)腎臟輕度腫大，顏色變淺；模型+右旋糖酐鐵組、模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組、模型+右旋糖酐鐵+NAC組、模型+右旋糖酐鐵+維生素E組左側(cè)腎臟明顯腫大?？v向剖開(kāi)腎臟后見(jiàn)腎盂、腎盞明顯擴(kuò)張，充滿混濁褐色尿液，腎乳頭變平乃至消失，皮質(zhì)、髓質(zhì)界限模糊，腎實(shí)質(zhì)明顯變薄。

2.2 HE染色 光鏡下可見(jiàn)模型組第7天腎間質(zhì)有少量炎性細(xì)胞，腎小管上皮細(xì)胞變矮、腫脹、細(xì)胞核變長(zhǎng)，出現(xiàn)顆粒和空泡變性。模型組第10天腎間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、充血，腎小管擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞萎縮、壞死、部分脫失，基底膜出現(xiàn)斷裂、潰解，腎間質(zhì)出現(xiàn)輕度增寬，腎小球無(wú)明顯病變；模型+右旋糖酐鐵組病變較模型組明顯，模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組、模型+右旋糖酐鐵+NAC組、模型+右旋糖酐鐵+維生素E組病變較模型組輕，假手術(shù)組未見(jiàn)明顯變化(見(jiàn)圖1)。

注：A為假手術(shù)組，B為模型組，C為模型+右旋糖酐鐵組，D為模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組，E為模型+右旋糖酐鐵+NAC組，F(xiàn)為模型+右旋糖酐鐵+維生素E組

圖1 第10天各組腎組織HE染色光鏡下結(jié)果(×400)

Figure 1 Kidney tissue lesions of HE staining in the tenth day in each group

2.3 Masson染色 光鏡下第7天模型組可見(jiàn)腎間質(zhì)僅有少量膠原纖維,模型+右旋糖酐鐵組可見(jiàn)大量膠原纖維增生(見(jiàn)圖2)。第10天模型組可見(jiàn)少量膠原纖維，模型+右旋糖酐鐵組可見(jiàn)明顯膠原纖維增生、腎間質(zhì)增寬，擴(kuò)張的腎小管基底膜旁膠原纖維增生，腎小球周圍可見(jiàn)明顯膠原纖維，腎小球中無(wú)膠原纖維增生；假手術(shù)組腎小管及腎間質(zhì)無(wú)明顯改變(見(jiàn)圖3)。6組大鼠第7天、第10天RIF程度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型+右旋糖酐鐵組RIF程度重于模型組，模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組、模型+右旋糖酐鐵+NAC組、模型+右旋糖酐鐵+維生素E組RIF程度輕于模型+右旋糖酐鐵組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；6組大鼠第10天RIF程度較第7天重，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表1)。

注：A為假手術(shù)組，B為模型組，C為模型+右旋糖酐鐵組，D為模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組，E為模型+右旋糖酐鐵+NAC組，F(xiàn)為模型+右旋糖酐鐵+維生素E組

圖2 第7天各組大鼠腎組織Masson 染色光鏡下結(jié)果(×400)

Figure 2 Kidney tissue lesions of Masson staining in the seventh day in each group

注：A為假手術(shù)組，B為模型組，C為模型+右旋糖酐鐵組，D為模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組，E為模型+右旋糖酐鐵+NAC組，F(xiàn)為模型+右旋糖酐鐵+維生素E組

圖3 第10天各組大鼠腎組織Masson 染色光鏡下結(jié)果(×400)

Figure 3 Kidney tissue lesions of Masson staining in the tenth day in each group

Table 1 Comparison of the renal interstitial fibrosis degree in 6 groups at different time

組別只數(shù)第7天第10天假手術(shù)組70.61±0.190.71±0.12d模型組73.49±0.27a7.85±0.66ad模型+右旋糖酐鐵組715.35±1.81ab20.67±2.28abcd模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組78.53±0.92abc13.58±1.32abcd模型+右旋糖酐鐵+NAC組77.78±0.79abc12.18±0.96abcd模型+右旋糖酐鐵+維生素E組78.21±1.03abc14.64±1.11abcdF值179.80201.03P值<0.001<0.001

注：與假手術(shù)組比較，aP<0.01；與模型組比較，bP<0.01；與模型+右旋糖酐鐵組比較，cP<0.01；與第7天比較，dP<0.01

2.4 普魯士蘭染色 光鏡下第7天模型+右旋糖酐鐵組腎小管及腎間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)較多藍(lán)色顆粒，模型+右旋糖酐鐵+維生素E組腎小管及腎間質(zhì)可見(jiàn)少量藍(lán)色顆粒，其余組未見(jiàn)藍(lán)色顆粒(見(jiàn)圖4)；第10天各組均未見(jiàn)藍(lán)色顆粒。第7天模型+右旋糖酐鐵組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為(103.3±21.2)個(gè)，高于模型+右旋糖酐鐵+維生素E組的(42.0±17.8)個(gè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.85,P=0.000 1)。

注：A為模型+右旋糖酐鐵組，B為模型+右旋糖酐鐵+維生素E組

圖4 第7天腎組織普魯士蘭染色光鏡下結(jié)果(×400)

Figure 4 Kidney tissue lesions of prussian blue staining in the seventh day

3 討論

鐵在超負(fù)荷情況下在體內(nèi)過(guò)度沉積造成許多實(shí)質(zhì)器官的損害,有研究表明，鐵超負(fù)荷可引起肝細(xì)胞損害,加重肝纖維化[9]。然而，鐵超負(fù)荷對(duì)腎間質(zhì)的損傷作用機(jī)制還不十分清楚,RIF是一種慢性進(jìn)行性的病理改變，這一變化涉及多方面的機(jī)制，如炎性遞質(zhì)的參與、腎臟固有細(xì)胞的活化、細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解失衡等。慢性RIF病理上表現(xiàn)為單核巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)堆積和腎小管萎縮。目前的研究表明,炎性細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞對(duì)RIF的起始和進(jìn)展是必須的，這些細(xì)胞產(chǎn)生和釋放各種生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、血管活性物質(zhì)，從而激活ROS系統(tǒng)，這些因素使成纖維細(xì)胞發(fā)生表型轉(zhuǎn)化，使細(xì)胞外基質(zhì)合成增加、降解減少,從而發(fā)生RIF。

隨著對(duì)RIF機(jī)制的研究，ROS族導(dǎo)致的腎臟損傷和腎小管損傷日益受到重視。氧化應(yīng)激和氧化應(yīng)激過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)量ROS是RIF的重要影響因素，在氧化應(yīng)激過(guò)程中鐵離子起著關(guān)鍵作用，鐵可以作為一種強(qiáng)力催化劑通過(guò)Fenton反應(yīng)及Haber -Wiss反應(yīng)促進(jìn)氧自由基的產(chǎn)生[10]。在臨床上慢性腎衰竭時(shí)，鐵劑治療是很重要的一部分，給鐵方式包括口服及靜脈注射。但大量補(bǔ)鐵可使血清鐵水平超過(guò)轉(zhuǎn)鐵蛋白的結(jié)合能力，從而使血漿中可存在具有催化活性的游離鐵，這些游離鐵就可能通過(guò)Fenton反應(yīng)催化氧化應(yīng)激過(guò)程產(chǎn)生ROS，而氧化應(yīng)激和氧化應(yīng)激過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)量ROS是纖維化的一個(gè)重要促進(jìn)因素，從而使慢性腎衰竭的損傷加重。因此，明確鐵負(fù)荷增加與RIF的關(guān)系對(duì)指導(dǎo)臨床鐵劑治療、減少鐵劑的應(yīng)用、減輕鐵劑對(duì)腎臟的損傷、延緩慢性腎衰竭的進(jìn)程有重要意義。

為研究鐵超負(fù)荷與RIF之間的關(guān)系，本研究制作單側(cè)輸尿管結(jié)扎的大鼠模型后，一次性腹腔注射500 mg/kg右旋糖酐鐵，已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該劑量鐵劑足以導(dǎo)致大鼠體內(nèi)鐵超負(fù)荷[4]。本研究在注射鐵劑基礎(chǔ)上予以去鐵敏和抗氧化劑NAC、維生素E，光鏡下觀察大鼠腎組織纖維化和鐵沉積情況發(fā)現(xiàn)，第7天模型組RIF程度高于假手術(shù)組，有利于判斷RIF模型的成功建立；6組大鼠第7天與第10天RIF程度比較也有差異，表明RIF程度隨著時(shí)間變化逐漸加重；模型+右旋糖酐鐵組RIF程度較模型組加重，表明右旋糖酐鐵會(huì)加重RIF；模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組、模型+右旋糖酐鐵+NAC組、模型+右旋糖酐鐵+維生素E組RIF程度較模型+右旋糖酐鐵組減輕，表明去鐵敏、NAC和維生素E可以減輕由于鐵超負(fù)荷而加重的RIF；模型+右旋糖酐鐵+NAC組與模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組RIF程度無(wú)差異，且模型+右旋糖酐鐵+維生素E組與模型+右旋糖酐鐵+NAC組RIF程度亦無(wú)差異，說(shuō)明去鐵敏、NAC及維生素E在減輕鐵超負(fù)荷所加重的RIF上無(wú)明顯差別。

研究發(fā)現(xiàn)，去鐵敏可以與三價(jià)鐵離子結(jié)合清除鐵、減少鐵沉積，能明顯降低鐵離子引發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，且其是一種抗氧化劑[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，第7天和第10天在模型+右旋糖酐鐵+去鐵敏組、模型+右旋糖酐鐵+NAC組均未見(jiàn)腎小管和腎間質(zhì)藍(lán)色顆粒，提示兩組無(wú)鐵沉積，考慮鐵劑可能完全被去鐵敏和NAC清除；第7天模型+右旋糖酐鐵組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)高于模型+右旋糖酐鐵+維生素E組，說(shuō)明維生素E能明顯減少鐵的沉積。本研究還發(fā)現(xiàn)，給予鐵劑后只是在第7天可見(jiàn)鐵沉積，在第10天鐵并無(wú)鐵沉積，而第10天RIF程度較明顯，考慮可能為鐵劑在第10天被機(jī)體代謝排出體外，而鐵劑啟動(dòng)的氧化應(yīng)激過(guò)程、炎性反應(yīng)、細(xì)胞因子等致纖維化因素仍然存在，從而繼續(xù)加重纖維化程度，但其具體機(jī)制仍有待于進(jìn)一步研究。

總之，本研究提示鐵劑能夠在腎臟組織沉積，鐵超負(fù)荷能夠加重RIF，使用兩種不同的抗氧化劑(NAC、維生素E)均可明顯減輕鐵超負(fù)荷所致的RIF程度，說(shuō)明鐵劑可能通過(guò)激活氧化應(yīng)激過(guò)程而引起RIF。但其具體機(jī)制尚不明確，目前認(rèn)為可能與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)β的表達(dá)增加有關(guān)，還有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的證實(shí)。

[1]Farris AB,Adams CD,Brousaides N,et al.Morphometric and visual evaluation:of fibrosis in renal biopsies[J].J Am Soc Nephrol,2011，22(1)：176-186.

[2]Li CY，Huang M. Relationship between iron metabolism and diabetes[J].Hainan Medical Journal，2012,23(22):125-127.(in Chinese) 李春蕓,黃猛.鐵代謝與糖尿病關(guān)系的研究進(jìn)展[J].海南醫(yī)學(xué),2012,23(22):125-127.

[3]Ma YY,Sun D,Li J,et al.Transplantation of endothelial progenitor celle alleriates renal interstitial fibrosis in a mouse model of unilateral ureteral obstruction [J].Life Sci，2010,86(21/22):798-807.

[4]Zhuang JJ，Zhang YC，Zhang WL，et al. Effect of iron overload on experimental immunological liver injury in rats and the role of angiotensin[J].Journal of Hygiene Research,2010,39(1):101-104.(in Chinese) 莊甲舉,張亞超,張維立,等.鐵過(guò)度負(fù)荷對(duì)大鼠免疫性肝損傷的影響及血管緊張素的作用[J].衛(wèi)生研究,2010,39(1):101-104.

[5]Zheng JY，Ji CM. Eeffect of N-acetylcysteine on brain ischemia/reperfusion-induced gastric mucosa injury in rats[J].Acta Academiae Medicinae Xuzhou,2010,30(10):658-660.(in Chinese) 鄭金玉,嵇春妹.NAC對(duì)大鼠腦缺血再灌注引起胃黏膜損傷的影響[J].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,30(10):658-660.

[6]Zhang GR，Lin ZF，Yang XP，et al. Effect of 1,25 dihydroxyvitamin D3on E-cadherin in rats with unilateral ureteral obstruction in rats[J].Journal of Chinese Practical Diagnosis and Therapy,2012,26(5):456-458.(in Chinese) 張國(guó)銳,林智峰,楊曉萍，等.1,25-二羥維生素D3對(duì)單側(cè)輸尿管梗阻模型大鼠E-鈣黏素表達(dá)的影響[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志,2012,26(5):456-458.

[7]Cui LP，Zhou Y，Zhou Q. Effect of intermedin on renal interstitial fibrosis of unilateral ureteral obstruction rats[J].Chinese Journal of Nephrology,2012,28(1):58-62.(in Chinese) 崔潞萍,周蕓,周芩.intermedin對(duì)單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響[J].中華腎臟病雜志,2012,28(1):58-62.

[8]Leng HM，Luo XM，Zhu H. The establishment of iron-overload mouse model and observation of the related indexes[J].Medical Journal of Qilu,2008,23(4):331-334.(in Chinese) 冷慧敏,駱新民,朱航.小鼠鐵過(guò)量模型建立及相關(guān)指標(biāo)的觀察研究[J].齊魯醫(yī)學(xué)雜志,2008,23(4):331-334.

[9]宋曉麗，趙俊功，程英升. MRI評(píng)價(jià)肝臟鐵過(guò)載的應(yīng)用進(jìn)展[J].世界華人消化雜志，2012，20(21)：1933-1938.

[10]Hakim FA,Pflueger A. Role of oxidative stress in diabetic kidney disease [J].Med Sci Monit,2010,16(2):RA37-48.

[11]Huang WX，Zhang MN，Lin HX. Effects of desferrioxamine on myocardial neovascularization and VEGF expression in acute myocardial infarction rats[J].The Journal of Practical Medicine,2012,28(15):2510-2512.(in Chinese) 黃文新,張敏娜,林海星.去鐵胺對(duì)急性心肌缺血大鼠心肌血管新生及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(15):2510-2512.

(本文編輯：李婷婷)

Relationship Between Iron Overload and Renal Interstitial Fibrosis

AIWei,YANGYun-hua,RUANYing-xin,etal.

DepartmentofNephrology,theFourthCenterHospitalofTianjin,Tianjin300140,China

Objective To investigate the relationship between iron overload and renal interstitial fibrosis(RIF).Methods A total of 84 clean-grade healthy Wister male rats of the same patch were selected. According to the body mass of the included rats,we divided them into six groups:sham operation group,model group,model+iron dextran group(500 mg/kg iron dextran),model+iron dextran+DFO group(500 mg/kg iron dextran+150 mg·kg-1·d-1DFO),model+iron dextran+NAC group(500 mg/kg iron dextran+50 mg·kg-1·d-1NAC) and model+iron dextran+vitamin E group(500 mg/kg iron dextran+50 mg·kg-1·d-1vitamin E).Each group included 14 rats. According to different postoperative observation time,the 14 rats in each group were further divided into 7 d group and 10 d group,with each group 7 rats. Apart from the sham operation group,the rest five groups were all administrated with unilateral ureteral ligation. On day 7 and day 10 after operation,left kidney tissues of the rats were sampled and sliced. And the kidney slices were dyed with HE,Masson and Prussian blue and were observed under light microscope to compare the RIF degree and the number of positive cells. Results HE dyeing:for model group,on day 7,a small amount of renal interstitial inflammatory cells were noted,renal tubular epithelial cells became shortened and swollen,and lengthened cell nucleus,particles and vacuolar degeneration were also observed in renal tubular epithelial cells;on day 10,cellular infiltration and congestion occurred in renal interstitial inflammatory cells,the kidney tubules expanded,cellular atrophy,necrosis and partial attrition were found in renal tubular epithelial cells,the breakage and burst of basilar membrane occurred,slight broadening was noted in renal interstitium,and no obvious lesion occurred in glomerulus and kidney tubules;compared with model group,model+iron dextran group had more serious lesion,and model+iron dextran+DFO group,model+iron dextran+NAC group and model+iron dextran+vitamin E group had less serious lesion,while no obvious lesion occurred in sham operation group. Masson dyeing:for model group,on day 7,only a small amount of collagenous fiber was noted in renal interstitium,while a large amount of collagenous fiber was noted in model+iron dextran group;on day 10,collagenous fiber was still of a small amount in model group,while obvious hyperplasia of collagenous fiber and the broadening of renal interstitium were observed in model+iron dextran group,hyperplasia of collagenous fiber beside the basilar membrane of expanded kidney tubules was noted,obvious collagenous fiber around glomerulus occurred,no hyperplasia of collagenous fiber occurred within glomerulus,and no obvious change in kidney tubules and renal interstitium was observed in sham operation group;the rats had significantly different(P<0.05) RIF degrees between day 7 and day 10;model+iron dextran group had higher(P<0.05) RIF degree than model group,and model+iron dextran+DFO group,model+iron dextran+NAC group and model+iron dextran+vitamin E group had lower(P<0.05) RIF degrees than model+iron dextran group;the six groups had higher RIF degrees on day 10 than on day 7. Prussian blue:on day 7,many blue particles were found in kidney tubules and renal interstitium within model+iron dextran group,while only a few blue particles were found in kidney tubules and renal interstitium in model+iron dextran+vitamin E group,and no blue particles were found in the other groups;on day 10,no blue particles were found in any group;on day 7,model+iron dextran group was higher than model+iron dextran+vitamin E group in the number of positive cells(t=5.85,P=0.000 1). Conclusion Iron dextran could aggravate the RIF. NAC and Vitamin E could alleviate RIF induced by iron overload. That RIF iron overload could aggravate RIF may be related with the process of oxidative stress.

Iron overload；Renal interstitial fibrosis；Oxidative stress；Antioxidants

國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金資助項(xiàng)目(30800259)

300140天津市第四中心醫(yī)院腎內(nèi)科(艾維，楊云華，趙連玉)；天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院腎內(nèi)科(阮穎新)；哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院腎內(nèi)科(焦軍東)

楊云華，300140天津市第四中心醫(yī)院腎內(nèi)科；E-mail：yangyunhua163@163.com

R 692.5

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2015.21.007

2015-01-21；

2015-04-13)