沈宏，王曉軍，薛梅，邢啟崇(濟(jì)南市天橋人民醫(yī)院，濟(jì)南5003;山東省千佛山醫(yī)院)

動(dòng)脈粥樣硬化患者主動(dòng)脈組織PTX-3表達(dá)的變化及意義

沈宏1，王曉軍2，薛梅2，邢啟崇2
(1濟(jì)南市天橋人民醫(yī)院，濟(jì)南250031;2山東省千佛山醫(yī)院)

摘要:目的探討動(dòng)脈粥樣硬化(AS)患者主動(dòng)脈組織PTX-3的表達(dá)變化及其與AS主要危險(xiǎn)因素及冠狀動(dòng)脈病變程度的相關(guān)性。方法43例行主動(dòng)脈-冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)患者的主動(dòng)脈打孔廢棄組織為觀察組，12例親屬間腎移植供者的修剪廢棄動(dòng)脈組織為對(duì)照組。觀察組患者術(shù)前測(cè)定血清PTX-3、hs-CRP、LDL-C、TG、TC、HDL-C、脂蛋白(a)、［Lp(a)］，行冠狀動(dòng)脈造影后采用冠狀動(dòng)脈Gensini積分評(píng)價(jià)冠狀動(dòng)脈病變程度。應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)動(dòng)脈組織中PTX-3表達(dá)。結(jié)果與對(duì)照組比較，觀察組血清PTX-3、hs-CRP、LDL-C、TG、TC、LDL-C、Lp(a)高，HDLC低(P均＜0.05)。觀察組冠狀動(dòng)脈Gensini積分平均為(78.21±23.79)分，主動(dòng)脈組織PTX-3表達(dá)量為0.21± 0.05，在吸煙及糖尿病患者中升高(P均＜0.05)，與Gensini積分、血清PTX-3、hs-CRP、TG、TC、LDL-C、HDL-C、Lp(a)呈正相關(guān)(r =0.694，P＜0.05)。對(duì)照組動(dòng)脈組織PTX-3無表達(dá)。結(jié)論AS患者主動(dòng)脈組織中存在PTX-3表達(dá)，其表達(dá)與AS發(fā)生及冠狀動(dòng)脈病變程度相關(guān)。

關(guān)鍵詞:動(dòng)脈粥樣硬化; Pentraxin-3;危險(xiǎn)因素

炎癥學(xué)說是動(dòng)脈粥樣硬化(AS)發(fā)病機(jī)制之一［1］。PTX-3是一個(gè)新近發(fā)現(xiàn)的炎癥時(shí)相反應(yīng)蛋白，屬于hs-CRP超家族成員。PTX-3與冠狀動(dòng)脈病變的程度及斑塊的不穩(wěn)定性的關(guān)系較其他炎癥標(biāo)志物可能更為密切［2，3］。雖然既往研究證實(shí)PTX-3可作為冠心病的危險(xiǎn)因素對(duì)預(yù)后進(jìn)行評(píng)估，但冠心病患者局部動(dòng)脈組織內(nèi)PTX-3的表達(dá)水平尚未見報(bào)道。本研究檢測(cè)主動(dòng)脈組織PTX-3的表達(dá)，并探討其與AS主要危險(xiǎn)因素及冠狀動(dòng)脈病變程度的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取2012年1月～2014年1月在山東省千佛山醫(yī)院行主動(dòng)脈-冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)(CABG)的冠心病患者43例(觀察組)，取其主動(dòng)脈打孔廢棄的組織。男32例、女11例，年齡45～79歲。吸煙者7例，高血壓病18例，糖尿病14例。排除各種急慢性全身或局部感染性疾病、自身免疫性疾病、惡性腫瘤、肝腎功能不全、急性腦血管疾病及周圍血管病等。對(duì)照組為12例親屬間腎移植供體者移植時(shí)修剪廢棄的主動(dòng)脈組織?；颊吣?0例、女2例，年齡37～65歲。供體者入院后均經(jīng)全面體格檢查排除各種器質(zhì)性病變，無冠心病、吸煙史、高血壓病及糖尿病史等。

1.2生化指標(biāo)測(cè)定入選者均于入院后第2天清晨空腹采肘靜脈血6mL，采用終點(diǎn)比色法測(cè)定血清甘油三酯(TG)及總膽固醇(TC)，采用化學(xué)修飾酶法測(cè)定低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，采用免疫比濁法測(cè)定脂蛋白(a)［Lp(a)］。采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清PTX-3，散射比濁法測(cè)定hs-CRP，以上測(cè)定均由羅氏公司MODULAR生化分析系統(tǒng)完成。

1.3冠狀動(dòng)脈狹窄程度及病變嚴(yán)重程度評(píng)定所有患者行冠狀動(dòng)脈造影(CAG)，采用Judkin法［4］，經(jīng)右側(cè)股動(dòng)脈穿刺置入造影導(dǎo)管，取左前斜45°和右前斜30°，以及頭位和足位25°進(jìn)行左右CAG。對(duì)造影結(jié)果進(jìn)行錄像并刻錄光盤，由兩位非知情介入心血管病專家分析圖像。冠狀動(dòng)脈狹窄程度的判定通過目測(cè)法，以百分?jǐn)?shù)表示。應(yīng)用冠狀動(dòng)脈Gensini積分方法評(píng)價(jià)冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度［5］。

1.4主動(dòng)脈組織PTX-3的檢測(cè)獲取主動(dòng)脈組織后，立即儲(chǔ)存于－80℃冰箱或液氮罐內(nèi)備用。標(biāo)本經(jīng)10%甲醛溶液固定、梯度乙醇脫水、二甲苯脫乙醇、石蠟包埋、切片。選擇多聚賴氨酸進(jìn)行載玻片防脫片處理，切片經(jīng)二甲苯脫蠟和梯度乙醇水化，檸檬酸鹽緩沖液高溫高壓抗原修復(fù)，3%雙氧水消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，加入兔抗人PTX-3多克隆抗體(1∶300)，4℃冰箱孵育過夜，加入酶標(biāo)羊抗鼠/兔IgG聚合物，室溫孵育30min，DAB顯色，鏡下控制顯色時(shí)間，蘇木素復(fù)染、分化、返藍(lán)，梯度乙醇脫水、二甲苯脫乙醇，晾干，中性樹脂封片。免疫組化染色切片經(jīng)全自動(dòng)顯微圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)，每張切片隨機(jī)選取6個(gè)高倍視野，測(cè)定每個(gè)視野中陽性信號(hào)的平均光密度值(OD)，取其平均值即為PTX-3表達(dá)量。

2　結(jié)果

2.1兩組血清各指標(biāo)比較見表1。

表1　兩組血清各指標(biāo)比較

2.2主動(dòng)脈組織PTX-3表達(dá)情況觀察組PTX-3陽性表達(dá)著色主要分布于內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞的胞質(zhì)，表現(xiàn)為棕褐色或棕黃色，染色分布不均勻，呈顆粒狀、片狀、簇狀或條狀。對(duì)照組主動(dòng)脈組織PTX-3無表達(dá)，著色表現(xiàn)為淺藍(lán)色。觀察組主動(dòng)脈組織PTX-3表達(dá)量為0.12～0.40(0.21±0.05)。

2.3觀察組主動(dòng)脈組織PTX-3表達(dá)量與AS主要危險(xiǎn)因素的關(guān)系觀察組主動(dòng)脈組織PTX-3表達(dá)量男性與女性間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.20± 0.04比0.22±0.08，P＞0.05)，吸煙者與非吸煙者、糖尿病患者與非糖尿病患者間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.25±0.04比0.20±0.05; 0.24±0.07 比0.18±0.03，P＜0.05)。

2.4觀察組主動(dòng)脈組織PTX-3表達(dá)量與血清PTX-3、血脂及hs-CRP、冠狀動(dòng)脈Gensini積分相關(guān)性分析主動(dòng)脈組織PTX-3表達(dá)量與血清PTX-3、hs-CRP、TG、TC、LDL-C、LP(a)呈正相關(guān)，與HDL-C、冠狀動(dòng)脈Gensini積分呈負(fù)相關(guān)(r分別為0.702、0.690、0.400、0.469、0.435、－0.453、0.506、0.694，P分別為0.002、0.012、0.016、0.004、0.008、0.014、0.002、0.001)。

3　討論

AS是多因素協(xié)同作用的結(jié)果，而炎癥學(xué)說是目前AS公認(rèn)的最重要機(jī)制。PTX-3作為hs-CRP超家族成員，在AS發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用［6］。PTX-3在炎性因子(IL-1、TNF-α)等誘導(dǎo)下，由血管內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等分泌。有學(xué)者推測(cè)PTX-3水平與hs-CRP比較，其和血管的炎癥狀態(tài)的相關(guān)性可能更好，更能直接反映AS程度。研究［7］也發(fā)現(xiàn)，PTX-3在AS進(jìn)展期斑塊中有高表達(dá)，而在沒有AS病變的切片中未發(fā)現(xiàn)PTX-3表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組血清和主動(dòng)脈組織中PTX-3均明顯升高，這與前期研究結(jié)果相一致。提示PTX-3水平升高可促進(jìn)AS的形成。

既往研究證實(shí)，ox-LDL可通過NF-κB增加內(nèi)皮細(xì)胞及巨噬細(xì)胞PTX-3的表達(dá)［8，9］，而釋放的PTX-3促進(jìn)氧自由基形成，加速LDL的氧化。低水平的HDL-C使動(dòng)脈硬化部位抗氧化應(yīng)激等能力下降和不能及時(shí)從動(dòng)脈內(nèi)膜轉(zhuǎn)運(yùn)出侵入的大量脂質(zhì)，以至血脂不斷沉積，進(jìn)而導(dǎo)致AS進(jìn)展。PTX-3與HDLC呈負(fù)相關(guān)性，兩者相互作用的機(jī)制目前尚不明確，可能與HDL-C通過磷脂酰肌醇信號(hào)通路，調(diào)節(jié)PTX-3mRNA表達(dá)有關(guān)［10］。此外，PTX-3可引起膜促凝磷脂釋放，血小板反應(yīng)性增強(qiáng)，加重炎癥反應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)主動(dòng)脈組織PTX-3表達(dá)量與血清hs-CRP、TG、TC、LDL-C、Lp(a)表達(dá)量呈正相關(guān)，與HDL-C呈負(fù)相關(guān)。提示PTX-3水平升高造成脂代謝紊亂從而促進(jìn)AS形成。

本研究中觀察組部分主動(dòng)脈組織肉眼可見黃色脂質(zhì)，所有主動(dòng)脈組織均有不同程度的PTX-3表達(dá)，PTX-3表達(dá)量平均為0.21±0.05。對(duì)照組動(dòng)脈組織PTX-3無表達(dá)。提示組織PTX的表達(dá)與AS相關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，吸煙者主動(dòng)脈組織PTX-3表達(dá)量較不吸煙者高，說明吸煙對(duì)PTX-3有誘導(dǎo)作用。糖尿病作為冠心病等危癥，與AS有相同病理基礎(chǔ)，PTX-3參與炎癥反應(yīng)，炎癥細(xì)胞在病變局部聚集，刺激微血管增生。本研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者主動(dòng)脈PTX-3表達(dá)量較非糖尿病患者高，提示PTX水平升高可能在糖尿病患者的AS進(jìn)展中起作用。

冠狀動(dòng)脈Gensini積分是一種有效評(píng)估冠狀動(dòng)脈病變程度的方法，冠狀動(dòng)脈病變程度越嚴(yán)重，Gensini積分越高。本研究顯示，觀察組患者主動(dòng)脈組織PTX-3表達(dá)量隨Gensini積分增加而增加，說明PTX-3表達(dá)的增高可促進(jìn)AS的形成及進(jìn)展，導(dǎo)致復(fù)雜病變形成，對(duì)易損斑塊形成及不穩(wěn)定可能起到促進(jìn)作用。

本研究取材于行CABG的AS患者主動(dòng)脈打孔時(shí)廢棄的動(dòng)脈組織［11］，為活體全層動(dòng)脈壁，包括內(nèi)膜、中膜及外膜組織，其研究結(jié)果提高了科學(xué)性、準(zhǔn)確性及可信度，為研究AS發(fā)病機(jī)制增加了新的途徑。本研究發(fā)現(xiàn)AS患者主動(dòng)脈組織中存在PTX-3表達(dá)，其表達(dá)與AS發(fā)生相關(guān)，可作為預(yù)測(cè)冠狀動(dòng)脈病變程度的指標(biāo)及治療靶點(diǎn)。

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收稿日期:( 2015-07-02)

通信作者:邢啟崇

基金項(xiàng)目:山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(Y2007C066)。

文章編號(hào):1002-266X(2015)37-0075-03

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

中圖分類號(hào):R541.1

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.37.030