胡煊，熊兵紅，馬利(眉山市人民醫(yī)院，四川眉山6000;昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院; 四川省綿陽市第三人民醫(yī)院)

結(jié)直腸癌患者血清miR-31的表達變化及意義

胡煊1，熊兵紅2，馬利3
(1眉山市人民醫(yī)院，四川眉山620010;2昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院; 3四川省綿陽市第三人民醫(yī)院)

摘要:目的探討結(jié)直腸癌(CRC)患者血清微小RNA-31(miR-31)的表達變化及意義。方法利用實時定量RT-PCR檢測60例CRC患者血清中miR-31的表達量，并以20例健康體檢者作為對照組，通過受試者工作特征曲線(ROC曲線)下面積計算miR-31診斷CRC的敏感度和特異度。結(jié)果CRC患者血清miR-31顯著高于對照組(P ＜0.05)。血清中miR-31的相對表達量與CRC的TNM分期、浸潤深度、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。血清miR-31診斷CRC的靈敏度和特異度分別為75.3%和60.2%，ROC曲線下面積為0.75。結(jié)論CRC患者血清miR-31升高，后者與腫瘤進展有關(guān);miR-31水平檢測對診斷CRC具有良好的特異度和敏感度。

關(guān)鍵詞:結(jié)直腸腫瘤;miR-31;腫瘤標志物

結(jié)直腸癌(CRC)是世界上常見的惡性腫瘤，是腫瘤死亡的第二大原因［1］。其發(fā)生發(fā)展機制未完全闡明，因此，發(fā)現(xiàn)CRC有關(guān)新的診斷、發(fā)展、轉(zhuǎn)移標志物非常重要。微小RNAs已被證實和腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其參與腫瘤的生物學(xué)過程，如細胞生長、增殖、發(fā)育、凋亡、分化、侵襲和轉(zhuǎn)移［2，3］。研究發(fā)現(xiàn)，微小RNA-31(miR-31)在CRC中表達明顯升高，充當(dāng)致癌因子發(fā)揮作用［4～6］。本研究檢測CRC患者外周血清中miR-31水平，探討其與腫瘤發(fā)展的關(guān)系及其診斷CRC的價值。

1　資料與方法

1.1臨床資料收集2010年10月～2013年10月住院治療的60例CRC患者(CRC組)外周血標本，均經(jīng)病理學(xué)證實。患者入院前均未進行過化、放療。男46例、女14例，年齡30～78歲。CRC的TNM分期按照國際抗癌聯(lián)盟和美國癌癥聯(lián)合會2010年版進行分期?；颊呔蠧RC根治手術(shù)。另選擇正常健康體檢者20例作為對照組，男10例、女10例，年齡20～70歲。

1.2血清miR-31的檢測采用實時定量RT-PCR法?；颊呔谑中g(shù)前抽取靜脈血5mL，EDTA抗凝。低溫高速離心機離心，用1.5mL無RNase的離心管分裝血清和血細胞，隨即放入－80℃冰箱保存?zhèn)溆谩irVana PARIS試劑盒(Ambion，USA)說明書抽提總RNA，用紫外分光光度儀檢測RNA溶液D260/D280，計算RNA濃度和純度，D260/D280在1.8～

2.1者用于進一步實驗檢測RNA的完整性。使用一步法逆轉(zhuǎn)錄miRNA，miRNA反轉(zhuǎn)錄引物由美國ABI公司合成，U6作為內(nèi)參。反應(yīng)條件: 42℃、60min，70℃、5min，4℃儲存，qRT-PCR反應(yīng)體系，PCR擴增反應(yīng)條件: 95℃、10min，95℃、15 s，60℃、1min(50個循環(huán))。實驗結(jié)果采用定量PCR中的相對定量法進行分析，以2－ΔΔCT表示腫瘤組織miR-31表達量相對于對照組表達量的變化倍數(shù)，其中ΔCT =(CTmiR-31－CTU6)腫瘤－(CTmiR-31－CTU6)

正常對照。

2　結(jié)果

2.1兩組血清miR-31相對表達量比較CRC組患者血清中miR-31相對表達量(2－ΔΔCT)為9.50± 7.45，明顯高于對照組(2.45±2.65)(P＜0.01)。

2.2 CRC患者血清中miR-31相對表達量與臨床病理因素的關(guān)系見表1。

2.3血清miR-31在CRC中的診斷價值曲線下面積為0.75(95%CI: 0.65～0.87)，臨界值取2.34時，其靈敏度和特異度分別為75.3%和60.2%。見圖1。

3　討論

表1　CRC患者血清中miR-31相對表達量與臨床病理因素的關(guān)系

圖1　miR-圖31檢測診斷CRC的ROC曲線

miRNAs是一類小的含有19～24個核苷酸的非編碼RNA，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。最近研究已證實，miRNAs能在血清、血漿中穩(wěn)定地檢測到，循環(huán)miRNAs可作為新的潛在腫瘤標志物［7，8］。許多研究表明，miR-31作為致癌因子，可調(diào)控腫瘤的生長、凋亡、轉(zhuǎn)移和化療耐藥［9，10］。miR-31在CRC組織和細胞中明顯升高，和腫瘤的發(fā)生發(fā)展預(yù)后相關(guān)［11，12］。

本研究發(fā)現(xiàn)，CRC外周血中miR-31水平明顯高于對照組。隨著腫瘤的發(fā)展，腫瘤TNM分期增加，外周血中miR-31的表達量也呈現(xiàn)上升趨勢;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)增加，外周血中miR-31的表達量也隨之增加，提示miR-31水平升高與CRC腫瘤的進展有關(guān)。血清中miR-31診斷CRC的靈敏度和特異度分別為75.3%和60.2%，ROC曲線下面積為0.75，對于CRC的診斷準確性良好:提示血清miR-31可作為診斷CRC的一個新的標志物，并且具有較好的敏感性和特異性。

綜上所述，血清miR-31水平升高與CRC的進展相關(guān)。血清miR-31是一個較好的診斷CRC的非侵入性腫瘤標志物，具有較好的敏感度和特異度。但需要更多大樣本多中心前瞻性試驗來證實其臨床應(yīng)用價值。

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收稿日期:( 2015-06-22)

通信作者:熊兵紅

文章編號:1002-266X(2015)37-0060-02

文獻標志碼:B

中圖分類號:R735.3

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.37.023