張愛(ài)麗，孫蕾娜，張丹丹，王文普(天津港口醫(yī)院，天津300456;天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院)

原發(fā)性肺腺癌組織中COX-2、EGFR、PDGFR 和nm23的表達(dá)變化及意義

張愛(ài)麗1，孫蕾娜2，張丹丹1，王文普1
(1天津港口醫(yī)院，天津300456;2天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院)

摘要:目的觀察環(huán)氧合酶2(COX-2)、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、血小板衍生生長(zhǎng)因子受體(PDGFR)和轉(zhuǎn)移抑制基因23(nm23)蛋白在原發(fā)性肺腺癌中的表達(dá)變化，探討其與臨床病理因素的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組化S-P法檢測(cè)COX-2、EGFR、PDGFR和nm23蛋白在109例原發(fā)性肺腺癌組織和30例正常肺組織中的表達(dá)。結(jié)果COX-2、EGFR、PDGFR蛋白在肺腺癌組織中的陽(yáng)性率分別為78.0%、58.7%、74.3%，均顯著高于正常肺組織(P均＜0.05)。nm23蛋白在肺腺癌組織中的陽(yáng)性率為60.6%，顯著低于正常肺組織(P＜0.05)。COX-2蛋白的表達(dá)與肺腺癌患者的年齡相關(guān)(P＜0.05); EGFR蛋白的表達(dá)與患者的年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān)(P均＜0.05); nm23蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān)(P均＜0.05)。肺腺癌組織EGFR和nm23、PDGFR和nm23的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)(r =－0.448，P＜0.05; r =－0.432，P＜0.05)，EGFR和PDGFR的表達(dá)呈正相關(guān)性(r = 0.403，P＜0.05)。結(jié)論在肺腺癌組織中，COX-2、EGFR、PDGFR表達(dá)升高，nm23蛋白表達(dá)降低，綜合檢測(cè)上述指標(biāo)在判斷腫瘤的惡性程度、估計(jì)預(yù)后等方面具有一定價(jià)值。

關(guān)鍵詞:肺腫瘤;環(huán)氧合酶2;表皮生長(zhǎng)因子受體;血小板衍生生長(zhǎng)因子受體;轉(zhuǎn)移抑制基因23doi: 10.3969/j.issn.1002-266X.2015.37.022

原發(fā)性肺癌的發(fā)病率在全球?qū)嶓w腫瘤中排名第一，亦居癌癥相關(guān)死亡的首位［1］。肺腺癌約占原發(fā)性肺癌的45%，其起病隱匿、侵襲性強(qiáng)、預(yù)后差。隨著分子生物學(xué)研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)肺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移是一個(gè)多階段、多步驟、漸進(jìn)演化的過(guò)程，這一過(guò)程與癌基因及其產(chǎn)物緊密聯(lián)系。我們檢測(cè)了表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、環(huán)氧合酶2(COX-2)、血小板衍生生長(zhǎng)因子受體(PDGFR)和轉(zhuǎn)移抑制基因23(nm23)在肺腺癌組織中的表達(dá)，探討其與原發(fā)性肺腺癌臨床病理因素之間的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1臨床資料收集天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2010年8月～2013年12月手術(shù)切除的109例肺腺癌患者的標(biāo)本，其中患者男45例、女64例，年齡32～87歲、中位年齡62歲;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者41例，無(wú)轉(zhuǎn)移者68例。按照國(guó)際抗癌聯(lián)盟2009年肺癌分期標(biāo)準(zhǔn)分期，Ⅰ期34例、Ⅱ期39例、Ⅲ期36例?；颊咝g(shù)前均未接受任何抗腫瘤治療。取遠(yuǎn)離腫瘤的正常肺組織30份作為對(duì)照。

1.2組織COX-2、EGFR、PDGFR和nm23的檢測(cè)采用免疫組化S-P法。所有標(biāo)本經(jīng)10 %中性

甲醛固定，常規(guī)脫水后石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，HE常規(guī)染色和免疫組化染色。采用主要試劑有COX-2、EGFR、PDGFR和nm23，均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，免疫組織化染色方法和步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，分別用PBS代替一抗作空白對(duì)照，已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，光鏡下觀察HE染色切片和免疫組化染色切片。

1.3結(jié)果判定COX-2和nm23陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞質(zhì)，EGFR和PDGFR陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)。根據(jù)其陽(yáng)性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞評(píng)分:腫瘤細(xì)胞無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜25%為1分，25%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分;上述2項(xiàng)得分相乘得出總分:0分為－，1～4分為+，5～8分為+ +，9～12分為+ + +。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)以百分比表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性檢驗(yàn)應(yīng)用Spearman相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1肺腺癌組織及正常肺組織COX-2、EGFR、PDGFR和nm23蛋白表達(dá)比較COX-2和nm23陽(yáng)性著色在細(xì)胞質(zhì)，EGFR和PDGFR陽(yáng)性著色在細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)。COX-2、EGFR、PDGFR蛋白在肺腺癌組織中的陽(yáng)性率分別為78.0%(85/109)、58.7%(64/ 109)、74.3%(81/109)，在正常肺組織中的表達(dá)分別為16.7%(5/30)、26.7%(8/30)、53.3%(16/30)，兩組織各指標(biāo)比較，P均＜0.05。nm23蛋白在肺腺癌組織中的陽(yáng)性率為60.6%(66/109)，顯著低于正常肺組織93.3%(28/30)(P＜0.05)。

2.2肺腺癌組織COX-2、EGFR、PDGFR和nm23蛋白的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系見(jiàn)表1。

表1　肺腺癌組織COX-2、EGFR、PEGFR、nm23蛋白的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

2.3肺腺癌組織中COX-2、EGFR、PDGFR和nm23蛋白表達(dá)的相關(guān)性肺腺癌組織中EGFR和nm23、PDGFR和nm23蛋白的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)性(r分別為－0.448、－0.432，P均＜0.05)，EGFR和PDGFR蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(r =0.403，P＜0.05)。COX-2蛋白的表達(dá)和EGFR、nm23、PDGFR之間均無(wú)相關(guān)性(r分別為－0.086、0.069、0.042，P均＞0.05)。

3　討論

COX-2是前列腺素合成過(guò)程的重要限速酶，為誘導(dǎo)性酶，在大多數(shù)細(xì)胞中不表達(dá)或少量表達(dá)。當(dāng)細(xì)胞受到細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子和致癌物等刺激時(shí)，表達(dá)上調(diào)，并參與炎癥和腫瘤的形成和發(fā)展。據(jù)文獻(xiàn)［2、3］報(bào)道，COX-2蛋白在肺腺癌組織中的陽(yáng)性率為31.3%～55%。Turk等［3］對(duì)非小細(xì)胞肺癌的研究發(fā)現(xiàn)，COX-2蛋白在肺癌中的表達(dá)與肺癌分期、組織學(xué)類型、預(yù)后無(wú)關(guān)，COX-2不是肺癌的一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素。本研究發(fā)現(xiàn)，COX-2蛋白在肺腺癌組織中的陽(yáng)性率為78.0%，顯著高于正常肺組織中的表達(dá)，且僅與肺腺癌患者的年齡相關(guān)，與患者的性別、腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期無(wú)關(guān)，提示COX-2可能參與肺腺癌發(fā)生的早期階段，而與肺腺癌的轉(zhuǎn)移和預(yù)后無(wú)關(guān)。

EGFR是一種細(xì)胞膜表面的糖蛋白受體，具有酪氨酸激酶活性，在多種上皮性腫瘤高表達(dá)。在正常肺組織中EGFR蛋白的陽(yáng)性率很低，在肺腺癌組織中的陽(yáng)性率為68.4%～88.2%［4～6］。Liang等［5］對(duì)133例肺腺癌標(biāo)本的免疫組化研究表明，EGFR蛋白的表達(dá)與患者的性別、年齡、吸煙狀況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否以及分期無(wú)關(guān)。而時(shí)衍同等［6］認(rèn)為，EGFR蛋白高表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤高分期有關(guān)。本研究中，EGFR蛋白在肺腺癌組織中的陽(yáng)性率為58.7%，顯著高于正常肺組織，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和高分期相關(guān)，表明EGFR蛋白的表達(dá)上調(diào)可能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移，EGFR蛋白的陽(yáng)性表達(dá)提示預(yù)后不良。

PDGFR是酪氨酸蛋白激酶家族成員，是一種跨膜糖蛋白，能夠促進(jìn)血管生成和細(xì)胞的分裂與增殖，在機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育、創(chuàng)傷修復(fù)等生理過(guò)程中起著極其重要的作用。Donnem等［7］研究結(jié)果表明PDGFR蛋白在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)預(yù)示著預(yù)后不良，而在間質(zhì)細(xì)胞中高表達(dá)預(yù)示著較好的預(yù)后，認(rèn)為PDGFR抑制劑用于非小細(xì)胞肺癌的治療時(shí)應(yīng)綜合考慮各種因素。本研究中，PDGFR蛋白在肺腺癌組織中的陽(yáng)性率為74.3%，顯著高于正常肺組織中的表達(dá)，而與患者的性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期均無(wú)相關(guān)性，表明PDGFR可能參與肺腺癌發(fā)生的早期階段，但與肺腺癌的預(yù)后無(wú)直接關(guān)系。

nm23基因是目前研究較多的轉(zhuǎn)移抑制基因，該基因缺失、突變或功能喪失會(huì)促進(jìn)腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移。Liu等［8］通過(guò)對(duì)452例Ⅰ期非小細(xì)胞肺癌組織進(jìn)行免疫組化染色，發(fā)現(xiàn)nm23蛋白的陽(yáng)性率為70.8%，認(rèn)為nm23是估計(jì)預(yù)后的一個(gè)重要且獨(dú)立的生物學(xué)指標(biāo)。Goncharuk等［9］對(duì)53例肺腺癌和51例肺鱗癌進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)nm23-H1蛋白的表達(dá)缺失與非小細(xì)胞肺癌的高分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。本研究結(jié)果顯示，nm23蛋白在肺腺癌組織中的陽(yáng)性率為60.6%，顯著低于正常肺組織，且與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和低分期相關(guān)，表明nm23可能抑制肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移，可以作為肺腺癌患者預(yù)后較好的一個(gè)指標(biāo)。

本研究發(fā)現(xiàn)，肺腺癌組織中EGFR和nm23、 PDGFR和nm23的陽(yáng)性表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)性，提示EGFR、PDGFR與轉(zhuǎn)移抑制基因nm23之間的表達(dá)失平衡是原發(fā)性肺腺癌發(fā)生、發(fā)展的原因之一。EGFR 和PDGFR的表達(dá)呈正相關(guān)性，表明EGFR、PDGFR在肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起協(xié)同作用。

腫瘤的發(fā)生、侵襲及轉(zhuǎn)移是多個(gè)因素相互作用的復(fù)雜過(guò)程，多個(gè)因素相互促進(jìn)，共同增強(qiáng)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。本研究表明，COX-2、EGFR、PDGFR 和nm23均與原發(fā)性肺腺癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，并具有協(xié)同作用，它們的綜合檢測(cè)在判斷腫瘤的惡性程度、估計(jì)預(yù)后及指導(dǎo)臨床治療等方面具有一定價(jià)值。

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收稿日期:( 2015-06-30)

文章編號(hào):1002-266X(2015)37-0057-03

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

中圖分類號(hào):R734.2