一測(cè)多評(píng)法測(cè)定牡丹皮中多種指標(biāo)成分的含量

張晨，邱實(shí)，貢濟(jì)宇*

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春 130117)

摘要：目的建立一測(cè)多評(píng)法同步測(cè)定丹參中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ及丹參酮ⅡA的含量，為控制丹參藥材的質(zhì)量提供依據(jù)。方法用超高效液相色譜法對(duì)丹參藥材進(jìn)行分析，計(jì)算其中1個(gè)脂溶性成分“丹參酮IIA”，通過(guò)建立該成分與其他成分的校正因子，同時(shí)計(jì)算3個(gè)脂溶性與3個(gè)水溶性成分的含量。結(jié)果建立的對(duì)丹參藥材的含量測(cè)定方法快速有效，且使用一測(cè)多評(píng)方法僅需要1個(gè)成分的標(biāo)準(zhǔn)品，即可進(jìn)行定量分析。結(jié)論本研究建立了牡丹皮藥材的UHPLC含量測(cè)定方法，從含量測(cè)定方面控制牡丹皮藥材的質(zhì)量。本研究建立的牡丹皮含量測(cè)定方法簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定且成本低廉。

關(guān)鍵詞：一測(cè)多評(píng)法；超高效液相色譜；牡丹皮；含量測(cè)定

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2015.06.015

中圖分類(lèi)號(hào)：R284.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：2095-6258(2015)06-1137-02

基金項(xiàng)目：吉林省科技廳

作者簡(jiǎn)介：張晨(1987-)，女，碩士，主要從事中藥學(xué)研究。

收稿日期:(本欄責(zé)任編輯：張海洋2015-10-21)

*通信作者：貢濟(jì)宇，女，教授，碩士研究生導(dǎo)師，電話-(0431)81672207，電子信箱-67461608@qq.com

Multiple index Components ofCortexMoutanRadicisby SSDMC Method

ZHANG Chen,QIU Shi, GONG Jiyu*

(School of Pharmacy,Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

Abstract：ObjectiveUsing SSDMC methods to simultaneous determination of five major components inCortexMoutanRadicis, providing method to control the quality of medicinal materials ofCortexMoutanRadicis. MethodsThe use of UHPLC technique to establish the method for multiple contents determination ofCortexMoutanRadicis, obtained UHPLC chromatogram and the related data. Using SSDMC Methods to quantitative analysis of five index components ofCortexMoutanRadicis.ResultEstablished the method for determination ofCortexMoutanRadiciscould be simultaneous quantitative analysis five index components in 13 minutes. The SSDMC method only needs one standard reference to quantitative analysis. Methodological study demonstrated that SSDMC method was met with the traditional Chinese medicine quality standards. ConclusionThis study established the UHPLC content determination method to control the quality ofCortexMoutanRadicis, which is simple, rapid, stable and low cost.

Keywords：SSDMC；UHPLC；CortexMoutanRadicis；content determination

牡丹皮為毛茛科植物牡丹PaeoniasuffruticosaAndr.的干燥根皮。具有清熱涼血，活血化瘀的作用[1-2]。近年來(lái)，對(duì)于牡丹皮的質(zhì)量控制方法多為測(cè)定不同產(chǎn)地、不同批次、不同廠家的丹皮酚含量[3]及對(duì)于牡丹皮藥材HPLC指紋圖譜構(gòu)建[4-5]，牡丹皮藥材HPLC特征圖譜研究[6]等，可以看出對(duì)于牡丹皮藥材進(jìn)行全面、深入的質(zhì)量控制研究較少。本研究運(yùn)用超高效液相色譜(UHPLC)，結(jié)合一測(cè)多評(píng)方法，建立牡丹皮藥材多組分同時(shí)測(cè)定的含量測(cè)定方法，為牡丹皮藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供更簡(jiǎn)便有效的方法。

1材料

超高效液相色譜系統(tǒng)：Agilent 1290 美國(guó)安捷倫科技公司；BRANSON B3500S-DTH 超聲波清洗儀，購(gòu)自荷蘭必能信有限公司；牡丹皮藥材：產(chǎn)地為安徽；丹皮酚對(duì)照品 (批號(hào)：110708-200506)，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；芍藥苷對(duì)照品、苯甲酰芍藥苷對(duì)照品、1,2,3,4,6-五沒(méi)食子酰葡萄糖苷對(duì)照品、苯甲酸對(duì)照品均購(gòu)自上海友思生物技術(shù)公司；水：Mili-Q 超純水儀制備。

2方法

2.1色譜條件Agilent Zorbax SB-C18(2. 1 mm×100 mm，1.8 μm)。流動(dòng)相為乙腈-水(含0.1%磷酸),流速0.8 mL/min,柱溫25 ℃ ,檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm。2.2檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇牡丹皮中5種目標(biāo)成分芍藥苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五沒(méi)食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍藥苷的全波長(zhǎng)紫外吸收，其中芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷的最大吸收均為230 nm，且一測(cè)指標(biāo)成分丹皮酚在230 nm下有著第二強(qiáng)的紫外吸收，故選擇230 nm作為本研究的吸收波長(zhǎng)。2.3對(duì)照品溶液的制備2.3.1對(duì)照品貯備液A取芍藥苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五沒(méi)食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL 含0.821 8 mg芍藥苷，0.126 8 mg苯甲酸，1.072 8 mg 1,2,3,4,6-五沒(méi)食子酰葡萄糖苷，1.896 mg丹皮酚，0.282 6 mg苯甲酰芍藥苷的溶液，即得。于4 ℃保存?zhèn)溆谩?.3.2對(duì)照品溶液B精密量取對(duì)照品貯備液0.5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇定容，制成每1 mL含芍藥苷0.041 09 mg，苯甲酸0.006 34 mg，1,2,3,4,6-五沒(méi)食子酰葡萄糖苷0.053 64 mg，丹皮酚0.094 8 mg ,苯甲酰芍藥苷0.014 13 mg的溶液，即得。2.4供試品溶液的制備取本品粉末(過(guò)四十目篩)約0.15 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇30 mL，稱定，準(zhǔn)確至標(biāo)準(zhǔn)差0.01 g，密塞，超聲處理30 min(565 W，80 kHz)，放冷，再稱定重量，用相應(yīng)溶劑補(bǔ)足減失的重量，過(guò)濾，50 mL容量瓶定容，搖勻，取1.5 mL離心，取上清，即得。2.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)供試品溶液在室溫條件下放置 0、4、8、12、24 h后，芍藥苷、苯甲酸、1，2，3，4，6-五沒(méi)食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍藥苷的峰面積RSD分別為0.761%、0.703%、0.874%、1.117%和0.498%。表明處理后的樣品在1 d內(nèi)穩(wěn)定。2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)重復(fù)性采用3個(gè)不同濃度(高、中、低)，每個(gè)濃度各分別制備3 分供試品溶液測(cè)定。芍藥苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五沒(méi)食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍藥苷的平均含量分別為1.265%、0.160%、1.287%、2.247%、0.353%，RSD分別為1.154%、0.437%、1.201%、0.593%、0.716%。2.7校正因子重現(xiàn)性考察采用獨(dú)立3次配制的7 個(gè)系列混合對(duì)照品溶液的峰面積和相應(yīng)濃度計(jì)算一測(cè)多評(píng)法中的校正因子，以3次校正因子測(cè)定結(jié)果的平均值作為一測(cè)多評(píng)法的校正因子。以芍藥苷為內(nèi)參物，校正因子為1，計(jì)算出,苯甲酸、1,2,3,4,6-五沒(méi)食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍藥苷的相對(duì)校正因子依次為0.25、0.53、0.49、0.64。各校正因子的RSD為0.34%、0.16%、0.00%、0.34%。

3結(jié)論

分別稱取30批牡丹皮藥材粉末，按供試品溶液的制備方法制備的供試品溶液各8 μL注入超高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。采用外標(biāo)法和一測(cè)多評(píng)法測(cè)定芍藥苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五沒(méi)食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍藥苷的含量，對(duì)2種含量測(cè)定方法進(jìn)行對(duì)比,結(jié)果顯示2種方法測(cè)得含量的RSD范圍為0.20%~1.86%，表明一測(cè)多評(píng)方法穩(wěn)定，可靠。根據(jù)30批牡丹皮藥材含量情況，建議含量限度為：按干燥品計(jì)芍藥苷不少于0.5%，苯甲酸不少于0.06%，1,2,3,4,6-五沒(méi)食子酰葡萄糖苷不少于0.6%，丹皮酚不少于1.3%，苯甲酰芍藥苷不少于0.2%。

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