高 野 閆立強(qiáng) 寇 瑾 徐秀明 孫 雪（遼寧警察學(xué)院 遼寧 大連 116033）

幾種載體上血跡的定性檢驗(yàn)

高 野 閆立強(qiáng) 寇 瑾 徐秀明 孫 雪
（遼寧警察學(xué)院 遼寧 大連 116033）

建立一種不同載體上血跡定性分析的無(wú)損檢驗(yàn)方法。采取健康成年人耳靜脈血，分別制成玻璃等 8種帶血跡樣本，使用 UV-2450型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，附反射附件 ISR-240A積分球，采取兩種方式測(cè)定不同載體上血跡的反射光譜。

血跡 定性 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)

命案中血跡可以為確定第一現(xiàn)場(chǎng)和被害人身份等提供重要線索，血跡可能存在不同載體上，由于人為的或自然的等原因，血跡的顏色等可能發(fā)生變化，肉眼無(wú)法辨認(rèn)是否為血跡，這時(shí)就需要對(duì)疑似血跡進(jìn)行定性。經(jīng)典的方法需要經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)后再進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn)，幾乎所有的血跡預(yù)備實(shí)驗(yàn)和確證實(shí)驗(yàn)都會(huì)對(duì)檢驗(yàn)對(duì)象產(chǎn)生不可逆的破壞，并且對(duì)檢驗(yàn)對(duì)象及操作要求嚴(yán)苛，一般較陳舊血跡就無(wú)法得到正確結(jié)果，實(shí)驗(yàn)操作稍有不慎，即使是血跡也可能出現(xiàn)陰性結(jié)果。積分球是具有高反射性內(nèi)表面的空心球體。它主要用來(lái)對(duì)處于球內(nèi)或放在球外并靠近某個(gè)窗口處的試樣對(duì)光的散射或發(fā)射，或是光源本身發(fā)出的光進(jìn)行收集的一種高效率器件，積分球一般作為一個(gè)理想的漫射光源或是勻光器來(lái)使用，從而消除由于光源自身特性而造成的出射光束不均勻或者帶有偏振方向。而利用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)積分球附件確證不同載體上的血跡，檢測(cè)簡(jiǎn)單易操作，對(duì)樣本不會(huì)有損壞，不影響下一步檢測(cè)，因此在血跡無(wú)損定性中應(yīng)用前景廣闊。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

制備帶血樣本。采取健康同一成年女性 （1人）耳靜脈血，分別將新鮮血液兩滴滴在載玻片（帆船CAT.NO.7101）上，用另一塊載玻片寬邊側(cè)面快速均勻推動(dòng)血滴，使血液均勻涂開(kāi)，制成帶血跡玻璃樣本。同樣方法制作帶血食品保鮮袋塑料（多美滋100型）、鋁片（天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心KERMEL分析純）、脫脂紗布 （長(zhǎng)春市衛(wèi)生材料廠字2003第2640010）、濾紙（杭州特種紙業(yè)有限公司中速定性ASTME832-81）、銅片（天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心KERMEL分析純）、泡沫板（方正科技FD980-WT顯示器包裝）、電腦包裝褐色紙殼 （方正科技FD980-WT顯示器包裝）樣本。自然干燥后檢驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

UV-2450型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本，島津公司)，附反射附件 ISR-240A積分球，BaSO4標(biāo)準(zhǔn)參比粉末。掃描波長(zhǎng)范圍：190～800nm；掃描速度：中速；采樣間隔：0.5；狹縫寬：1.0nm；光源轉(zhuǎn)換波長(zhǎng)：360nm。

（1） 以 BaSO4白板調(diào)整基線，然后分別以 BaSO4標(biāo)準(zhǔn)白板作參比，將帶血不同載體平整地固定在樣本板后將其插入積分球樣品光束，測(cè)定其反射光譜。

（2） 以 BaSO4白板調(diào)整基線，然后分別以不帶血跡的空白載體作參比，測(cè)定其反射光譜。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

同樣方法實(shí)驗(yàn)，間隔不同時(shí)間進(jìn)行了 5次。

2.1 以BaSO4標(biāo)準(zhǔn)白板作參比的結(jié)果

帶血塑料、濾紙、紗布、鋁片的光譜波峰波谷位置與數(shù)量一致，均有5個(gè)波峰5個(gè)波谷，波峰分別位于 250nm、310nm、372nm、510nm、560nm處，波谷分別位于 229nm、280nm、 414nm、 540nm與576nm處。帶血包裝紙殼從800nm到600nm之間光譜曲線急劇下降，反射率從幾乎100%降到接近5%左右，只在 576nm附近有一個(gè)不明顯的波谷。帶血玻璃的光譜有3個(gè)波峰3個(gè)波谷，波峰分別位于365nm附近、510nm與560nm處，波谷分別位于540nm與576nm處，在410nm～420nm呈現(xiàn)較兩側(cè)低且平緩的曲線。帶血泡沫的光譜有 3個(gè)波峰 2個(gè)波谷，波峰分別位于310nm、510nm與560nm處，波谷分別位于540nm與576nm處，在410nm～420nm呈現(xiàn)較兩側(cè)低且平緩的曲線。帶血銅片的光譜有2個(gè)波峰 3個(gè)波谷，波峰分別位于 510nm與 560nm處，波谷分別位于540nm、576nm與630nm處，均不是非常明顯，見(jiàn)圖1。兩側(cè)低且平緩的曲線。帶血銅片的光譜有4個(gè)波峰3個(gè)波谷，波峰分別位于303nm、369nm、510nm與560nm處，波谷分別位于 260nm、540nm、576nm與630nm處。

圖 1 BaSO4白板作參比的幾種帶血載體光譜

2.3 8種載體兩種方法的結(jié)果比較

以白板做參比，在630nm處帶血紙殼的反射波谷不明顯，以空白載體做參比的情況下，帶血紙殼與帶血銅片在630nm處都可見(jiàn)波谷；以空白載體做參比，紙殼540nm、630nm清晰可見(jiàn)，帶血銅片在303nm與369nm處出現(xiàn)2個(gè)波峰。兩種方法帶血玻璃的波峰波谷數(shù)量位置未變，但以空白玻璃做參比，在350nm至190nm范圍反射急劇升高。以空白泡沫做參比，帶血泡沫的波峰波谷數(shù)量增加，波峰增加2個(gè)，在260nm與372nm處，波谷增加3個(gè)，在240nm、290nm與 410nm-420nm處，見(jiàn)圖 2。

圖2 不同載體兩種方法的結(jié)果

2.2 以空白載體作參比的結(jié)果

帶血塑料、濾紙、紗布、鋁片的光譜波峰波谷位置與數(shù)量一致，均有 5個(gè)波峰 6個(gè)波谷，波峰分別位于 250nm、310nm、372nm、510nm、560nm處，波谷分別位 于 229nm、280nm、 414nm、540nm、576nm與 630nm處。帶血包裝紙殼從800nm到600nm之間光譜曲線急劇下降，反射率從幾乎 100%降到接近5%左右，在560nm附近有一個(gè)波峰，在540nm、576nm與630nm附近各有一個(gè)不明顯的波谷，在540nm到190nm之間光譜曲線明顯升高。帶血玻璃的光譜有 3個(gè)波峰 4個(gè)波谷，波峰分別位于365nm附近、510nm與560nm處，波谷分別位于540nm、576nm與630nm處，在410nm～420nm呈現(xiàn)較兩側(cè)低且平緩的曲線。帶血泡沫的光譜有 5個(gè)波峰6個(gè)波谷，波峰分別位于 260nm、310nm、372nm、510nm與560nm處，波谷分別位于240nm、290nm、540nm、576nm與630nm處，410nm～420nm呈現(xiàn)較

2.4 不同載體上陳舊血跡的結(jié)果

分別使用兩種方法考察了實(shí)驗(yàn)室條件下紡織陳舊42天血跡的反射光譜，與新鮮血跡的結(jié)果基本一致。以紗布載體為例，見(jiàn)圖3。有5個(gè)波峰6個(gè)波谷，波峰分別位于250nm、310nm、372nm、510nm、560nm處，波谷分別位于229nm、280nm、414nm、533nm、576nm與 630nm處。

圖3 兩種方法采集的陳舊 42天紗布血跡的反射光譜

3 討論

3.1 不同載體上血跡定性的依據(jù)

我們使用兩種方法均表明，帶血塑料、濾紙、紗布、鋁片的反射光譜曲線在 280nm、414nm、540nm、576nm與630nm處存在波谷。與閆立強(qiáng)的研究結(jié)果一致。[1]帶血玻璃與帶血泡沫波谷分別位于540nm、576nm與630nm處，在410nm～420nm呈現(xiàn)較兩側(cè)低且平緩的曲線。謝濟(jì)運(yùn)等人的研究表明，血液中的血紅蛋白的吸收峰分別位于412nm、540nm與575nm處，血漿蛋白的吸收峰在280nm處。[2]反射光譜在280nm的波谷是血漿蛋白的貢獻(xiàn)，540nm、576nm的波谷是血紅蛋白的貢獻(xiàn)，630nm處的波谷是高鐵血紅蛋白的貢獻(xiàn)，在血液在體時(shí)，血液處在人體正常生理環(huán)境下，高鐵血紅蛋白數(shù)量處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，約為1%，血液離體后，被氧化生成較多的高鐵血紅蛋白，[3-4]因此干燥血跡中高鐵血紅蛋白含量較高，波谷明顯。

3.2 兩種方法不同帶血載體光譜異同的討論

以相應(yīng)的空白作參比，較以BaSO4白板作參比，所有載體的光譜曲線波峰波谷數(shù)量不變或增加。塑料、濾紙、紗布與鋁片作為載體的血跡光譜波峰波谷數(shù)量與位置，在兩種方法上一致，可能與這幾種載體本身在 190nm～800nm范圍內(nèi)的反射率與 BaSO4相似有關(guān)。

兩種方法帶血玻璃的波峰波谷數(shù)量位置未變，但以空白玻璃做參比，在350nm至190nm范圍反射急劇升高。可能是玻璃的主要成分二氧化硅的影響，二氧化硅在紫外區(qū)域具有明顯的吸收。[5]泡沫與銅片都有波峰波谷的增加，增加的波峰波谷位置與紗布一致或接近，說(shuō)明以空白做參比，可以扣除相應(yīng)載體的一些影響，對(duì)結(jié)果的呈現(xiàn)更科學(xué)。如果在提取檢材時(shí)，有條件又提取到了空白對(duì)照，建議實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)時(shí)以空白載體作參比。

3.3 關(guān)于陳舊血跡與新鮮血跡光譜差異的討論

隨著時(shí)間的增長(zhǎng)，血跡中的一些物質(zhì)發(fā)生了變化，如氧合血紅蛋白分解甚至變性為高鐵血紅蛋白。物質(zhì)結(jié)構(gòu)不同對(duì)某一波長(zhǎng)的光的吸收或反射可能不同，于是就產(chǎn)生了波峰波谷位置的變化。藍(lán)移速度與程度的影響因素有哪些，如何進(jìn)行影響的，有待于進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

利用紫外可見(jiàn)反射光譜儀的反射功能可以實(shí)現(xiàn)對(duì)幾種不同載體上血跡的定性分析。檢驗(yàn)對(duì)檢材沒(méi)有特殊要求，不需要進(jìn)行任何處理，保證了檢材的完整性，不影響后續(xù)檢驗(yàn)，并且檢驗(yàn)快速。

[1]閆立強(qiáng)．紫外可見(jiàn)漫反射光譜法無(wú)損確證血痕的研究．刑事技術(shù)[J]，2014，（5）：30～32．

[2]謝濟(jì)運(yùn)，蔣治良，鐘福新，等．血細(xì)胞的光譜特性研究[J]．分析測(cè)試技術(shù)與儀器，2000，6(3): 178～181．

[3]郭世 珺，曾長(zhǎng)春，李麗君，聶廣，劉頌豪．亞硝酸鈉化高鐵血紅蛋白的拉曼光譜量化檢測(cè)研究．光譜學(xué)與光譜分析，2013，33（7）：1805～1809．

[4]闞雪梅，尤國(guó)興，趙蓮，周虹．高鐵血紅蛋白含量測(cè)定方法研究進(jìn)展．軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2010，34（4）：385～388．

[5]謝康，周永恒，趙修建，顧真安．多孔玻璃的制備及光譜研究．功能材料，2001，10（25）：548～550．

（責(zé)任編輯：于 萍）

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2095-7939(2015)03-0068-03

2015-01-28

高野 （1968-），男，遼寧遼陽(yáng)人，遼寧警察學(xué)院刑事科學(xué)技術(shù)系副教授，學(xué)士，主要從事刑事物證檢驗(yàn)研究。