吉 利，張 艷

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)一科，遼寧 沈陽 110032

慢性心力衰竭(CHF)是心血管疾病的終末期表現(xiàn)和最主要的死因。心氣虛衰是CHF發(fā)病的始動因素，而血瘀是CHF的中心病理環(huán)節(jié)。根據(jù)CHF的病機(jī)特點，篩選藥物制成益氣通脈飲治療CHF取得了良好的療效，為進(jìn)一步探討益氣通脈飲治療CHF的作用機(jī)理進(jìn)行了動物實驗研究，現(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1 動物 10～12周齡健康雄性Wistar大鼠100只，體質(zhì)量250～300 g，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物使用許可證號：SYXX(遼)2010-0013。

1.2 試劑 益氣通脈飲，藥物組成：黃芪、人參、紅花、丹參、三七、益母草等（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥局提供）；科素亞（杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H20000371，規(guī)格：50 mg/片）；大鼠腫瘤壞死因子 α(TNF-α)、白介素 -6(IL-6)、轉(zhuǎn)化生長因子 -β1(TGF-β1)ELISA試劑盒（上海博研生物工程研究中心，產(chǎn)品編號分別為BYS11721B、BYS11731B、BYS11722B）。

1.3 儀器設(shè)備 DH-140B型小動物呼吸機(jī)(浙江醫(yī)科大學(xué)醫(yī)療實驗儀器廠生產(chǎn))；MS-2000多媒體化心電圖軟件(廣州市龍飛達(dá)科技有限公司生產(chǎn))；SONOS5500分色多普勒超聲心動圖機(jī)(Agilent公司生產(chǎn))。

1.4 方法

1.4.1 造模與分組 參考文獻(xiàn)［1］方法，在無菌操作下，于胸骨左側(cè)第3、4肋間皮膚處橫向切開長約1.5 cm的切口，鈍性分離軟組織，暴露心臟后，于左冠狀動脈前降支起點下2～4mm處用6號絲線結(jié)扎左冠狀動脈主干造成急性心肌梗塞模型。術(shù)后記錄標(biāo)準(zhǔn)肢體導(dǎo)聯(lián)及胸前導(dǎo)聯(lián)(紙速50 mm/s)心電圖，ST段弓背抬高者為造模成功。常規(guī)喂養(yǎng)飼料與水1周后，于第2周將飼料減半，使大鼠處于半饑餓狀態(tài)，常規(guī)喂水；于第3周開始，每天游泳1次，致疲乏無力(約20分鐘)；于第4周由電檢科醫(yī)生做彩色超聲多普勒心電圖，測定左室收縮末期容積(ESV)、左室舒張末期容積(EDV)、左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)、左室每搏輸出量(SV)，進(jìn)而計算左室心指數(shù)(CI)，CI≤180mL/(min/kg)者作為心衰成功模型入選。將造模成功大鼠隨機(jī)分為模型對照組、中藥等效劑量組、中藥大劑量組、西藥對照組，另設(shè)正常對照組，每組8只。

1.4.2 給藥方法 中藥等效劑量組與大劑量組分別按照5.4 g/kg(體質(zhì)量)、16.2 g/kg(體質(zhì)量)予益氣通脈飲煎取液灌胃，即相當(dāng)于臨床成人劑量與3倍成人劑量；西藥對照組予科素亞混懸液，按4.5mg/kg(體質(zhì)量)灌胃，相當(dāng)于臨床成人劑量；模型對照組與正常對照組以同體積生理鹽水灌胃。1次/d，共8周。

1.5 觀察指標(biāo)及檢測方法 心功能檢查：由電檢科醫(yī)生為大鼠做彩色超聲多普勒心動圖，測定左室收縮末期容積(ESV)、左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)、左室舒張末期容積(EDV)、左室每搏輸出量(SV)，各項數(shù)值均經(jīng)計算機(jī)處理后獲得；測定血清TNF-α、IL-6、TGF-β 含量：5%戊巴比妥(2～3mL/kg)腹腔注射麻醉下開胸取左心室腔血2mL，注入試管中，搖勻，4℃3 000 r/min離心10分鐘，取血清-20℃保存。用放射免疫法(ELISA)測定TNF-α、IL-6與 TGF-β1。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行分析，計量資料以(χ±s)表示，組間多重比較采用SNK-q檢驗。檢驗水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般狀態(tài) 除正常對照組外，其余各組大鼠在造模后均出現(xiàn)不同程度的蜷臥、脫毛、消瘦、厭食、便溏等癥狀，未經(jīng)任何治療的模型對照組最重。該組大鼠一般狀態(tài)差，表現(xiàn)為活動度顯著下降，進(jìn)食及飲水量明顯減少，消瘦明顯。各組大鼠治療后一般狀態(tài)普遍有所改善，以中藥等效劑量組最為明顯，表現(xiàn)為體質(zhì)量增加，活動較多，一般狀態(tài)尚可。中藥大劑量組和西藥對照組同模型對照組比較，一般狀態(tài)也有所改善，但不如中藥等效劑量組明顯。

2.2 各組大鼠心功能的變化 模型對照組大鼠ESV、LVEF、EDV、SV同正常對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，同模型對照組比較，中藥等效劑量組以及西藥對照組ESV、LVEF、EDV、SV差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；而中藥大劑量組和西藥對照組之間各項指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

2.3 各組大鼠血清細(xì)胞因子水平比較 與正常對照組相比，模型對照組大鼠血清TNF-α、IL-6、TGF-β1水平顯著增高(P＜0.01)；中藥大劑量組、等效劑量組和西藥對照組血清 TNF-α、IL-6、TGF-β1水平均較模型對照組降低(P＜0.05)；而中藥大劑量組、等效劑量組和西藥對照組之間血清TNF-α、IL-6、TGF-β1水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表 2。

表1 各組大鼠心功能變化情況(χ±s)

表 2 各組大鼠血清 TNF-α、IL-6、TGF-β1水平比較(χ±s)

3 討論

多項研究表明，慢性心力衰竭是一種神經(jīng)激素細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡狀態(tài)［2］。心衰時，多種有生物活性細(xì)胞因子的過度表達(dá)是造成心肌損傷、循環(huán)功能受損的重要原因。TNF-α是一種具有多種生物學(xué)效應(yīng)的細(xì)胞因子。近年研究發(fā)現(xiàn)，充血性心力衰竭時，心肌細(xì)胞會產(chǎn)生大量TNF-αmRNA及表達(dá)TNF-α。而且，血清TNF-α濃度與心力衰竭的嚴(yán)重程度以及臨床特征密切相關(guān)，提示TNF-α是反映心力衰竭程度的一項重要指標(biāo)［3］。IL-6類似于TNF-α，是另一種多功能細(xì)胞因子。除了調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應(yīng)，IL-6還能獨立調(diào)節(jié)心臟功能，發(fā)揮負(fù)性肌力作用和細(xì)胞毒作用。相關(guān)實驗證實衰竭心肌組織可表達(dá)IL-6，并通過自分泌或旁分泌機(jī)制致心肌收縮功能不全［4］。TGF-β1是一種多功能蛋白質(zhì),具有增加細(xì)胞外基質(zhì)沉積的作用。在心臟中,心肌成纖維細(xì)胞是其作用的主要靶點。作為最重要的促纖維性細(xì)胞因子之一，TGF-β1可促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞的生長并調(diào)節(jié)基因的表達(dá)［5］。

CHF屬祖國醫(yī)學(xué)“心悸”“怔忡”“心痹”等范疇［6-8］。本研究認(rèn)為CHF的基本病機(jī)為本虛標(biāo)實，心氣虧虛為本，血瘀為標(biāo)。益氣通脈飲是基于心氣虛衰為CHF發(fā)病的基礎(chǔ)，血瘀是其中心病理環(huán)節(jié)理論認(rèn)識的基礎(chǔ)上，結(jié)合臨床經(jīng)驗組方，由黃芪、人參、紅花、丹參、三七、益母草等組成。本研究表明，益氣通脈飲不僅能改善大鼠的一般狀況、減輕心力衰竭癥狀，還可有效降低血清中TNF-α、IL-6、TGF-β1水平，拮抗這些細(xì)胞因子對心血管的不利影響。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)益氣通脈飲治療慢性心力衰竭的作用與抑制炎性細(xì)胞因子TNF-α與IL-6的活性，降低促纖維性細(xì)胞因子TGF-β1的水平有關(guān),從而在一定程度上達(dá)到改善心衰癥狀，提高生存質(zhì)量的目的，對于預(yù)防和延遲心功能不全的進(jìn)展具有重要意義。

［1］ 王碩仁，趙明鏡，王振濤，等.建立心肌梗死心氣虛血瘀證和心陽虛血瘀證病癥動物模型的研究［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，28(3):245-247.

［2］ 胡大一.心血管內(nèi)科學(xué)高級教程［M］.北京：人民軍醫(yī)出版社，2013：166.

［3］ Cugno M，Mari D，Meroni PL，et al.Haemostatic and inflammatory biomarkers in advanced chronic heart failure:role of oral anticoagulants and successful heart transplantation［J］.Br JHaematol，2004，126(1):85-92.

［4］ Meyer T，Stanske B，Kochen MM，et al.Elevated serum levels of interleukin-10 and tumor necrosis factor α［corrected］are both associated w ith vital exhaustion in patients with cardiovascular risk factors［J］.Psychosomatics，2010，51(3):248-256.

［5］ Martos R，Baugh J，Ledwidge M，et al.Diastolic heart failure:evidence of increased myocardial collagen turnover linked to diastolic dysfunction［J］.Circulation，2007，115(7):888-951.

［6］ 宋吉法.ACEI、ARB聯(lián)合參松養(yǎng)心膠囊治療慢性心力衰竭42例療效觀察［J］.西部中醫(yī)藥，2012，25(7):63-64.

［7］ 鄭軍，劉金玲.中西醫(yī)結(jié)合治療氣虛血瘀型慢性充血性心力衰竭 37 例［J］.西部中醫(yī)藥，2011，24(12):62-64.

［8］ 王強(qiáng)，孟云輝，付達(dá).通腑泄?jié)岱ㄖ委煾瓕嵶C慢性心力衰竭52 例臨床觀察［J］.河北中醫(yī)，2012，34(10):1451-1453.