金玲莉，涂 娟，王彥波，曾 明，杜玉標(biāo)

（江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 園藝研究所，江西 南昌 330200）

柑橘拮抗內(nèi)生細(xì)菌的抑菌活性及生物學(xué)性狀分析

金玲莉，涂 娟，王彥波，曾 明，杜玉標(biāo)

（江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 園藝研究所，江西 南昌 330200）

從南豐蜜桔葉片和洋蔥的健康植物組織提取液中篩選出 3 株對(duì)柑橘潰瘍病[Xanthomonas campestris pv．Citri（Hasse）Dye]有拮抗作用的內(nèi)生菌株Bb1、Bb2和YC1，通過拮抗菌株的抑菌活性試驗(yàn)得出3株菌株對(duì)柑橘潰瘍病均有較好的抑制效果，并對(duì)其生物學(xué)性狀進(jìn)行研究分析。

拮抗；內(nèi)生細(xì)菌；抑菌活性；形態(tài)特征；生物學(xué)性狀

植物內(nèi)生菌是指其生活史的某一階段或全部階段能在健康植物組織內(nèi)棲居而對(duì)植物不造成實(shí)質(zhì)性危害并與植物建立了和諧聯(lián)合關(guān)系的微生物，主要包括真菌、細(xì)菌和放線菌，能有效地抑制病原菌的侵染或提高宿主植物的抗病性 [1] 。

內(nèi)生細(xì)菌是植物各種組織和器官的細(xì)胞間隙或細(xì)胞內(nèi)的天然宿居者，在其部分或整個(gè)生活周期寄居在植物組織，特別是營(yíng)養(yǎng)繁殖的組織中生存、繁衍、傳播 [2] 。由于植物內(nèi)生細(xì)菌與宿主協(xié)同進(jìn)化，在演化過程中形成了明顯的互惠共生關(guān)系。有研究 [3] 表明，植物內(nèi)生細(xì)菌對(duì)宿主具有抗病促生作用，顯示了其在生物農(nóng)藥開發(fā)和促進(jìn)植物生長(zhǎng)等方面有著良好的應(yīng)用前景。

1 材料與方法

本研究采用研磨分離法從南豐蜜桔健康組織葉片和洋蔥提取液中篩選出 3 株對(duì)柑橘潰瘍病有拮抗作用的內(nèi)生菌株，用抑菌圈法測(cè)定其抑菌效果，并對(duì)其生物學(xué)性狀進(jìn)行分析研究。

南豐蜜桔葉片取自江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所的柑橘資源圃內(nèi)，洋蔥來自超市購買的新鮮無病蟲害洋蔥。在園藝研究所3 000 m 2 的南豐蜜桔資源圃內(nèi)，采用5點(diǎn)取樣法，選取生長(zhǎng)性狀良好，無病害癥狀的健康植株20株，在每株樹中采取健康葉片5片，采集后立即放入無菌樣品袋中，帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行內(nèi)生細(xì)菌的分離。將初步篩選出的拮抗菌接柑橘潰瘍病菌，于生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，用抑菌圈法測(cè)定其抑菌效果，利用公式計(jì)算抑菌率。

NA培養(yǎng)基：牛肉膏 3 g，蛋白胨 5 g，葡萄糖 2.5 g，瓊脂 17 g，水 1 000 mL，pH7.2。

2 結(jié)果與分析

2.1 拮抗內(nèi)生菌抑菌活性

圖 1 拮抗菌株抑菌效果

表 1 分離的內(nèi)生細(xì)菌性狀描述

從圖 1 和表1 看出： 從南豐蜜桔葉片中提取的內(nèi)生菌Bb1、 Bb2 和從洋蔥提取液中篩選的內(nèi)生菌YC1對(duì)柑橘潰瘍病有明顯的抑制作用。而從蔥中提取的內(nèi)生菌 C1、C2 對(duì)柑橘潰瘍病有較弱的抑制作用，其它內(nèi)生菌均沒有抑制作用。從抑菌圈直徑看，YC1 最大，其次為 Bb1，Bb2比 Bb1 相對(duì)較弱，從洋蔥提取液中提取的內(nèi)生菌YC1 抑菌圈直徑很小，其它都為零。

從表 2 可以看出：3 株拮抗菌中，YC1 的抑菌率最大，拮抗作用最強(qiáng)，其次是 Bb1，最小的是 Bb2。

表 2 3 株拮抗菌懸浮液對(duì)柑橘潰瘍病的抑制效果

2.2 拮抗菌株生物學(xué)性狀分析

2.2.1 個(gè)體形態(tài)性狀 Bb1 菌體：桿狀，營(yíng)養(yǎng)體大小為 3.1 μL×1.0 μL，芽孢大小為 1.9 μL×0.8 μL，周生鞭毛，芽孢位于菌體中間，革蘭氏陽性。

Bb2 菌體：桿狀，大小為 3.1 μL×0.7 μL，芽孢中生，芽孢大小為 1.6 μL×0.6 μL，周生鞭毛，革蘭氏陽性。

YC1 菌體：桿狀，大小為 2.83 μL×0.71 μL，極生鞭毛 1～2 根；革蘭氏染色陽性，無芽孢，無莢膜。

2.2.2 菌落形態(tài)性狀 Bb1 菌落：菌落培養(yǎng)時(shí)中央隆起，直徑為 0.3 cm，表面光滑，整齊，不透明，圓形，顏色為黃色。

Bb2菌落：菌落培養(yǎng)時(shí)為隆起狀，直徑為0.5 cm，表面光滑，整齊，不透明，近圓形，顏色為淺黃色。

YC1 菌落：菌落培養(yǎng)時(shí)為不規(guī)則堆狀，邊緣呈波浪形，表面光滑，不整齊，不透明，顏色為乳白色。

圖 2 菌落形態(tài)

3 結(jié) 論

從南豐蜜桔葉片和洋蔥的健康植物組織提取液中篩選出 3 株對(duì)柑橘潰瘍病[Xanthomonas campestris pv．Citri（Hasse）Dye]有拮抗作用的內(nèi)生菌株 Bb1、Bb2 和 YC1，通過拮抗菌株的抑菌活性試驗(yàn)得出 3株菌株對(duì)柑橘潰瘍病均有較好的抑制效果。

[1] 史應(yīng)武, 婁愷. 植物內(nèi)生菌在生物防治中的應(yīng)用[J]. 微生物學(xué)雜志,2009,29(6):61-64.

[2] 張穎, 王剛, 郭建偉, 等. 利用小麥內(nèi)生細(xì)菌防治小麥全蝕病的初步研究[J]. 植物病理學(xué)報(bào),2007,37(1):105-108.

[3] 高增貴, 莊敬華, 陳捷, 等. 玉米根系內(nèi)生細(xì)菌種群及動(dòng)態(tài)分析[J]. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2004,15(8):1344-1348.

Analysis of Antimicrobial Activities and Biological Characters of CitrusAntagonism Endophytic Bacteria

JIN Ling li, TU Juan, WANG Yan bo, ZENG Ming, DU Yu biao

(Horticulture Institute, Jiangxi Academy of Agricultural Sciences, Nangchang 330200, China)

From Nanfeng orange leaves and healthy onion’s plant tissue extracts, 3 endophytic strains with antagonism against citrus bacterial canker disease [Xanthomonas campestris pv. Citri (Hasse) Dye] were screened as strains Bb1, Bb2 and YC1. Through antimicrobial activity tests of antagonistic strains, it was obtained that 3 strains had very good inhibitory effects on citrus canker, and finally, their biological characters were studied.

antagonism? endophytic bacteria? antimicrobial activity? features? biological characters

金玲莉, 涂娟, 王彥波, 等. 柑橘拮抗內(nèi)生細(xì)菌的抑菌活性及生物學(xué)性狀分析[J]. 生物災(zāi)害科學(xué), 2015, 38(1):16-18.

2015-01-20

江西省科技廳支撐計(jì)劃項(xiàng)目(20132BBF60029)

金玲莉，女，副研究員，主要從事病蟲害防治研究，E-mail:jinlinglilove@163.com。

S436.66

A

2095-3704（2015）01-0016-03