沈紅仙

桐廬縣第一人民醫(yī)院中藥房，浙江 桐廬 311500

千里光消除大腸埃希菌R質(zhì)粒的實驗研究

沈紅仙

桐廬縣第一人民醫(yī)院中藥房，浙江 桐廬 311500

目的：評價千里光消除大腸埃希菌R質(zhì)粒的效果。方法：對從本院尿路感染患者尿液中分離出的大腸埃希菌R質(zhì)粒進行檢測，隨機選取60只小鼠，采用隨機數(shù)字表法分為2組，對照組采取空白對照，小鼠經(jīng)口感染大腸埃希菌，實驗組小鼠經(jīng)口感染大腸埃希菌后口服千里光濃縮液，觀察并比較從2組小鼠大腸分離出的大腸埃希菌對抗生素的耐藥性情況，與大腸埃希菌R質(zhì)粒消除率。結(jié)果：實驗組在含有四環(huán)素、氨芐青霉素、鏈霉素的藥物平板上的消除大腸埃希菌R質(zhì)粒菌落數(shù)均多于對照組（P＜0.05）。實驗組大腸埃希菌R質(zhì)粒消除率高于對照組（P＜0.01）。結(jié)論：中藥千里光在消除大腸埃希菌R質(zhì)粒方面具有良好的效果，在含有四環(huán)素、鏈霉素、氨芐青霉素的抗生素藥物平板上仍可有效清除大腸埃希菌R質(zhì)粒，安全、有效。

大腸埃希菌；R質(zhì)粒；尿路感染；千里光；動物實驗

大腸埃希菌是醫(yī)院感染的主要致病菌群之一[1]。過去臨床上通常采用高溫培養(yǎng)、紫外線照射和溴化乙錠消除大腸埃希菌R質(zhì)粒，但是大量臨床資料顯示這些方法存在毒副作用，對機體傷害較大[2]。近幾年來，臨床學(xué)者不斷尋求更加安全、有效的方法消除大腸埃希菌R質(zhì)粒。中藥具有純天然、無刺激的優(yōu)點，適合臨床應(yīng)用于消除大腸埃希菌R質(zhì)粒[3]。為進一步評價中藥消除大腸埃希菌R質(zhì)粒的臨床效果，筆者對尿路感染患者尿液中分離出的大腸埃希菌R質(zhì)粒進行檢測，對其進行分析后報道如下。

1 材料

1.1 菌株 所選取的菌株為大腸埃希菌，均從本院尿路感染患者的尿液中分離所得，并經(jīng)鑒定確定為大腸埃希菌。

1.2 實驗動物 60只清潔級ICR健康小鼠，均由本院動物實驗中心提供，常規(guī)實驗室飼養(yǎng)，自然晝夜，實驗均于白天進行。雌性小鼠30只，雄性小鼠30只，6～8周齡，體重18～20 g。采用隨機數(shù)字表法將小鼠分成實驗組和對照組各30只。實驗組雌性小鼠15只，雄性小鼠15只；6～8周齡，平均(7.31±2.38)周；體重18～20 g，平均(19.02±6.12)g。對照組雌性小鼠15只，雄性小鼠15只；6～8周齡，平均(7.45± 2.29)周；體重18～20 g，平均(18.98±6.54)g。2組實驗動物一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.3 藥材 千里光購于桐廬縣某藥房，培養(yǎng)基以及四環(huán)素、鏈霉素和氨芐霉素均屬于國產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)品。

2 實驗方法

2.1 對照組 空白對照，小鼠經(jīng)口感染大腸埃希菌，每天給予2 mL生理鹽水后不采取任何措施。

2.2 實驗組 采用中藥消除大腸埃希菌R質(zhì)粒，具體方法如下：對小鼠進行灌腸，以達到腸道清潔的目的，經(jīng)口感染大腸埃希菌，然后給予中藥溶液。取干燥千里光50 g，用適量水煮沸后過濾，將過濾藥渣再用適量水煮沸，過濾，將2次千里光濾液合并后，濃縮為50 mL浸液，儲存?zhèn)溆?。每只小鼠每天給予2 mL中藥溶液，連續(xù)給藥3天。

3 觀察指標(biāo)與統(tǒng)計學(xué)方法

3.1 觀察指標(biāo) 3天后處死小鼠，分離培養(yǎng)細菌，計算消除大腸埃希菌R質(zhì)粒的數(shù)量，通過抽提瓊脂糖凝膠電泳進行測算。挑選在無藥平板上生長的菌落，而在有藥平板上不生長的菌落，即初步確定為R質(zhì)粒消除子。將消除子與原菌液同時快速抽離質(zhì)粒DNA，0.7%瓊脂糖凝膠電泳，以監(jiān)測R質(zhì)粒帶的消失情況。將小鼠大腸分離液接種于10塊4%瓊脂培養(yǎng)基上，在37℃培養(yǎng)1天，直至瓊脂板長出菌落，挑選1000個菌落，采用影印培養(yǎng)法，依次轉(zhuǎn)接到含有四環(huán)素、鏈霉素、氨芐青霉素的藥物平板上，在相同溫度環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)1天，觀察并記錄實驗結(jié)果。比較2組大腸埃希菌對抗生素的耐藥情況，應(yīng)用的抗生素主要有四環(huán)素、鏈霉素、氨芐青霉素，比較四環(huán)素、鏈霉素、氨芐青霉素藥物平板上消除大腸埃希菌R質(zhì)粒的菌落數(shù)，菌落數(shù)越少，說明清除效果越好。比較2組大腸埃希菌R質(zhì)粒消除率，消除率＝有藥平板上不生長的菌落數(shù)/無藥平板上生長的菌落數(shù)×100%。

3.2 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件分析數(shù)據(jù)。計量資料以(±s)表示，采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗。

4 實驗結(jié)果

4.1 2組消除大腸埃希菌R質(zhì)粒菌落數(shù)情況 見表1。實驗組在含有四環(huán)素、氨芐青霉素、鏈霉素的藥物平板上的消除大腸埃希菌R質(zhì)粒菌落數(shù)均多于對照組(P＜0.05)。

表1 2組消除大腸埃希菌R質(zhì)粒菌落數(shù)情況 個(%)

4.2 2組大腸埃希菌R質(zhì)粒消除率比較 見表2。實驗組大腸埃希菌R質(zhì)粒消除率高于對照組(P＜0.01)。

表2 2組大腸埃希菌R質(zhì)粒消除率比較 個

5 討論

大腸埃希菌俗稱大腸桿菌，是哺乳動物大腸內(nèi)的正常菌群之一，不僅能夠合成維生素B和維生素K供機體利用，還能有效控制腐敗菌、病原菌、真菌的過度繁殖，但是大腸埃希菌過度繁殖時會引起感染、急性腸炎等疾病[4]。近幾年來，這種由R質(zhì)粒介導(dǎo)耐藥性的嚴重性，在臨床和流行病學(xué)上引起極大重視?？股氐膽?yīng)用，促使攜帶R質(zhì)粒的菌株出現(xiàn)與迅速播散。這種質(zhì)粒介導(dǎo)的多重耐藥性菌株不但治療困難，亦難控制其流行，常常引起醫(yī)院內(nèi)感染的早發(fā)流行[5]。大量臨床資料顯示，醫(yī)院感染中R質(zhì)粒的檢出率高達50%以上，嚴重危及住院患者的健康[6]。大腸埃希菌的耐藥性主要由染色體或耐藥質(zhì)粒，即R質(zhì)粒介導(dǎo)，隨著大腸埃希菌R質(zhì)粒的傳播和耐藥性的逐漸增強，大腸埃希菌對抗菌藥物的敏感性明顯降低，給臨床治療帶來了很大的困難。

R質(zhì)粒被消除后，細菌的耐藥性也消失了。臨床上所應(yīng)用的部分抗生素對機體存在一定的毒副作用，不便于臨床的廣泛應(yīng)用，長期使用，效果明顯降低[7]。因此在消除R質(zhì)粒方面，醫(yī)療界一直在尋找安全、有效的措施。中醫(yī)方法溫和，毒副作用較少，對抗藥物耐藥性具有良好的應(yīng)用價值[8]。本研究選用的中藥千里光，性寒、味苦，具有清熱解毒、明目、止癢等功效，還具有抗菌作用，多用于治療風(fēng)熱感冒、目赤腫痛、泄瀉痢疾、皮膚濕疹瘡癤。大量資料顯示千里光消除大腸埃希菌R質(zhì)粒具有良好的效果[9]，作用機制主要是該中藥激發(fā)和增強了機體抵抗力和防御功能，消除腸道菌群耐藥質(zhì)粒，其中主要為質(zhì)粒R清除，提高菌群對藥物的敏感性，降低菌群的耐藥性[10]。雖然千里光在消除大腸埃希菌R質(zhì)粒的能力不如十二烷基硫酸鈉，但是大量實驗已經(jīng)充分證明了千里光的有效性，為深入研究千里光抗耐藥菌株的作用提供了強有力的支持。在檢測大腸埃希菌R質(zhì)粒清除率中，采用抽提瓊脂糖凝膠電泳，該方法能夠有效反映中藥及其代謝產(chǎn)物的藥理作用，避免中藥直接體外用藥的一些誤差，能夠使大腸埃希菌R質(zhì)粒清除率更加準(zhǔn)確，科學(xué)地反映千里光的效果[11]。

本研究結(jié)果顯示，千里光在消除大腸埃希菌R質(zhì)粒方面具有良好的應(yīng)用效果，在含有四環(huán)素、鏈霉素、氨芐青霉素的藥物平板上仍可有效清除大腸埃希菌R質(zhì)粒，安全、有效，可在臨床上廣泛應(yīng)用。

[1]李延鴻，朱懷軍．中藥單方或復(fù)方對大腸埃希菌R質(zhì)粒消除作用的研究[J]．實用藥物與臨床，2013，16(12)：1147-1150.

[2]黃依玲，馮潔，楊秋燕．抗大腸埃希菌的藥物研究進展[J].廣西醫(yī)學(xué)，2013，35(10)：1394-1397.

[3]楊帆，楊玉榮，趙振升，等．中草藥消除細菌耐藥性質(zhì)粒研究進展[J]．動物醫(yī)學(xué)進展，2013，34(12)：160-164.

[4]何明，吳崢嶸，李淵，等．雙黃連、清開靈對耐藥大腸埃希菌R質(zhì)粒及β-內(nèi)酰胺酶的影響[J]．北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012，35(2)：105-108.

[5]杭永付，薛曉燕，方蕓，等．中藥抗菌和逆轉(zhuǎn)耐藥作用機制研究進展[J]．中國藥房，2011，22(47)：4504-4507.

[6]舒剛，馬馳，黃春，等．4種中藥復(fù)方對大腸桿菌、沙門氏菌R質(zhì)粒的消除作用[J]．河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，42 (11)：149-153.

[7]云云，汪長中．中藥抗耐藥大腸埃希菌研究進展[J]．中國微生態(tài)學(xué)雜志，2013，25(2)：238-241.

[8]桂勇，黃俐華，胡小洋，等．10種中藥對產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的體外抑菌活性[J]．中國現(xiàn)代醫(yī)生，2013，51 (31)：65-67.

[9]許韋，邵志偉，李小東，等．黃芩等10種中藥對大腸埃希菌的體外抑菌試驗觀察[J]．安徽醫(yī)藥，2013，17(5)：846-848.

[10]李娟，李曉東，楊麗霞，等．單味中藥體外抑菌活性的研究進展[J]．中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17(11)：283-286.

[11]李延鴻，張慧華．痰熱清逆轉(zhuǎn)大腸埃希菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的研究[J]．抗感染藥學(xué)，2013，10(1)：40-42.

（責(zé)任編輯：劉淑婷，吳凌）

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0256-7415（2015）05-0276-02

10.13457/j.cnki.jncm.2015.05.130

2015-01-15

浙江省杭州市衛(wèi)生發(fā)展基金項目 (hz2917223)

沈紅仙（1971-），女，副主任中藥師，主要從事中醫(yī)藥的臨床研究。