秦霄雯，李鳳霞，胡方崢

（山東省計量科學研究院，山東濟南250014）

大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）質(zhì)量控制程序

秦霄雯，李鳳霞，胡方崢

（山東省計量科學研究院，山東濟南250014）

浮游菌和沉降菌是醫(yī)院潔凈手術(shù)部和臨床實驗室的空氣質(zhì)量控制指標之一。為了細化浮游菌和沉降菌的測試方法，加強對微生物培養(yǎng)基的質(zhì)量控制，避免誤操作引起的生物污染，保障檢測過程中的人員健康，本文給出了大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基的質(zhì)量控制程序，希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。

大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基；檢測；質(zhì)量控制

GB 50333-2013《醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范》和GB 50591-2010《潔凈室施工及驗收規(guī)范》中均要求檢測空氣中的浮游菌和沉降菌的含量，作為判定合格與否的指標之一。標準中雖然給出了浮游菌和沉降菌的檢測方法，但過程不甚細致，尤其是對毫無微生物基礎的檢測人員而言，往往無法完成對該項指標的測試。為了加強對微生物培養(yǎng)基的質(zhì)量控制，避免因不適當操作而引起的生物污染，保障檢測過程中工作人員的健康，本文詳細給出了大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）制備過程中使用的儀器設備﹑材料和制備程序，與廣大檢測工作者共享。

1 質(zhì)量控制程序

1.1 儀器和設備

高壓消毒鍋：使用時應嚴格按照儀器說明書操作；電子天平：必須經(jīng)過計量檢定合格；容量瓶: 必須經(jīng)過計量檢定合格；恒溫培養(yǎng)箱：必須經(jīng)過計量校準合格；培養(yǎng)皿：一般采用90 mm×15 mm的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。

1.2 大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）培養(yǎng)基配方

酪蛋白胰酶消化物 15 g；大豆粉木瓜蛋白酶消化物 5 g；氯化鈉 5 g；瓊脂 15 g；蒸餾水或離子交換水1000 ml。因自來水或井水中含有鈣和鎂，會與蛋白胨或牛肉浸膏中的磷酸鹽發(fā)生反應，生成磷酸鈣和磷酸鎂等沉淀，影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。

1.3 制備方法

1.3.1 稱量

按培養(yǎng)基配方比例依次推確地稱取酪蛋白胰酶消化物﹑大豆粉木瓜蛋白酶消化物﹑氯化鈉﹑瓊脂放人燒杯中。

1.3.2 溶化

在上述燒杯中先加入少量純化水，用玻棒攪勻，然后在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解，將完全溶解后，補充水至1000 ml。在溶化過程中，應控制火力，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出容器。同時，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦。配制培養(yǎng)基時，不可用銅或鐵鍋加熱溶化，以免離子進入培養(yǎng)基中，影晌細菌生長。

1.3.3 調(diào) pH

在未調(diào) pH前，先用精密 pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入NaOH，邊加邊攪拌，并隨時用 pH試紙測其 pH，直至 pH達7.3±0.2。反之，用HCL調(diào)節(jié)。

1.3.4 分裝

將培養(yǎng)基分裝至三角瓶內(nèi)，瓶內(nèi)分裝量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。

1.3.5 加塞

培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角烷瓶口上塞上棉塞，加塞時的棉塞的總長度的 3/5應在口內(nèi)，2/5在口外。

1.3.6 包扎

加塞后，將全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱﹑組別﹑配制日期。

1.3.7 滅菌

將上述培養(yǎng)基以 0.103 MPa，121 ℃，20 min高壓蒸汽滅菌。

1.3.8 無菌操作下倒平板

同時預先將潔凈工作臺﹑酒精燈﹑噴壺﹑封口膜﹑平面皿等采取紫外線滅菌30 min。待滅菌后的培養(yǎng)基冷至60℃后，開啟潔凈工作臺，點燃酒精燈，用酒精燈擦拭雙手，將三角瓶口端捆在玻棒或其他合適高度的器具上，將培養(yǎng)基倒入無菌平皿，每個培養(yǎng)皿約20 ml培養(yǎng)基。

1.3.9 無菌撿查

將滅菌后培養(yǎng)基平皿放人 37 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

24～48 h，檢查滅菌是否徹底。若無微生物生長，則培養(yǎng)基制備合格，否則應廢棄重新配置。制備好的培養(yǎng)基平皿宜在2～8 ℃保存，使用期限一般以一周為宜。

2 討論

在做培養(yǎng)基的滅菌檢查時，如果培養(yǎng)基的容器較大，需相應延長滅菌時間。對有特殊需求的培養(yǎng)基，應嚴格按

TQ460.8+2

C

1002-2376（2015）12-0033-02

2015-11-06