劉慧

(浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬湖州市中醫(yī)院中藥房，湖州 313000)

止咳片的質(zhì)量控制

劉慧

(浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬湖州市中醫(yī)院中藥房，湖州 313000)

目的 制定止咳片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 對止咳片中苦杏仁進行薄層色譜鑒別；采用高效液相色譜法同時測定白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量。色譜柱為C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以甲醇-水(75：25)系統(tǒng)為流動相；檢測波長為321 nm，流速1 mL·min-1。結(jié)果 薄層色譜鑒別中，供試品在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點，斑點清晰，分離度好，陰性未見干擾。白花前胡甲素在61.98～619.84 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程Y=1.156 5X+13.452 7，r=0.999 8；白花前胡乙素在32.11～321.13 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程Y=1.438 6X-0.305 4，r=0.999 8。白花前胡甲素低、中、高加樣回收率分別為96.19%，98.87%，97.60%，RSD分別為2.13%，1.52%，0.73%(n=3)；白花前胡乙素低、中、高加樣回收率分別為96.97%，99.60%，96.74%，RSD分別為1.55%，2.28%，0.47%(n=3)。結(jié)論 該方法結(jié)果準(zhǔn)確、專屬性強，重復(fù)性好，能有效控制止咳片的質(zhì)量。

止咳片；白花前胡甲素；白花前胡乙素；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；色譜法，薄層；色譜法，高效液相

止咳片為百部、前胡、苦杏仁3味藥材組成的復(fù)方中藥制劑，具有潤肺定喘、祛痰止咳的功效。臨床上一般用于治療咳嗽、痰多、氣喘、小兒百日咳、急慢性氣管炎等[1]。該制劑現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》(第四冊)，標(biāo)準(zhǔn)僅包括性狀、百部的化學(xué)鑒別項、前胡的薄層鑒別項與常規(guī)檢查項，缺少對苦杏仁的質(zhì)控項目并缺少含量測定項。因此，筆者采用薄層色譜(TLC)法對苦杏仁進行鑒別，采用高效液相色譜法測定止咳片中的白花前胡甲素和白花前胡乙素兩種成分。結(jié)果表明該方法簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，專屬性強，完善質(zhì)控指標(biāo)，對全面控制本品的質(zhì)量具有重要意義。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1260系列高效液相色譜儀，包括四元泵(DEAB704165)，自動進樣器(DEAEC09523)、柱溫箱(DEACN12074)、DAD檢測器(DEAA302930)；色譜儀工作站采用Chemistation工作站；4020P超聲儀(JAC公司)；CPA225D天平(METTLER TOLEDO公司，感量：0.01 mg)。

1.2 試藥 白花前胡甲素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111711-200602，含量測定用)；白花前胡乙素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111904-201203，含量98.0%)；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他均為分析純。止咳片(批號：1127262，1127263，1127264)均購自北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠，取批號1127264止咳片進行方法學(xué)實驗。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別 取本品10片，除去糖衣，研細，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，放冷，濾過，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液。另取苦杏仁苷對照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)10 ℃以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，噴以含1%磷鉬酸的15%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果供試品與對照品相對應(yīng)的色譜位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性樣品無干擾，見圖1。

2.2 白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量測定

2.2.1 色譜條件 Agilent XDB C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(75：25)；流速1 mL·min-1；檢測波長321 nm；進樣體積10 μL；理論板數(shù)以白花前胡甲素峰計不低于3 000。

2.2.2 對照品溶液的制備 取白花前胡甲素和白花前胡乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含白花前胡甲素30.99 μg、白花前胡乙素16.06 μg的混合溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品20片，除去包衣，研細，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備 按處方量配制不含前胡的陰性樣品，照供試品溶液的制備方法制備，即得。

2.2.5 系統(tǒng)適用性與專屬性實驗 按上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μL，進樣，記錄色譜圖，結(jié)果待測峰與鄰近峰分離度符合要求，陰性供試品溶液在白花前胡甲素和白花前胡乙素對照品出峰位置均無干擾見圖2。

2.2.6 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2.2”項下對照品溶液2，5，10，15，20 μL，分別注入液相色譜儀，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別得到白花前胡甲素回歸方程，Y=1.156 5X+13.452 7，r=0.999 8；白花前胡乙素回歸方程，Y=1.438 6X-0.305 4，r=0.999 8。結(jié)果表明白花前胡甲素進樣量在61.98～619.84 ng 范圍內(nèi)，白花前胡乙素進樣量在32.11～321.13 ng 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.7 精密度實驗 精密吸取對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣5次，測定峰面積積分值，結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素峰面積RSD分別為1.52%，1.39%，精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性實驗 取樣品6份，按供試品溶液制備方法制備，進樣分析，結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素的平均含量分別為6.02，3.23 mg·g-1，RSD分別為1.89%，2.07%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.9 穩(wěn)定性實驗 分別精密吸取同一供試品溶液10 μL，在0，4，8，12，24 h注入液相色譜儀，測定白花前胡甲素和白花前胡乙素峰面積，結(jié)果RSD分別為1.78%，1.81%，表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.10 加樣回收率實驗 取樣品9份，每份0.25 g，精密稱定，每3份為一組，分別精密加入低、中、高3個梯度水平對照品(相當(dāng)于含量的50%，100%，150%)，按“2.2.3”項供試品溶液制備方法進行制備并測定，結(jié)果見表1。從表1中可見，回收率符合要求。

2.2.11 樣品含量測定 用上述方法對收集的3批樣品進行測定，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 質(zhì)量控制指標(biāo)的選擇 百部、前胡、苦杏仁三者均具有化痰、降氣、止咳的療效。君藥百部尚未尋找到合適的薄層、液相質(zhì)量控制方法，故保留原標(biāo)準(zhǔn)中的化學(xué)鑒別方法對百部進行質(zhì)量控制。原標(biāo)準(zhǔn)中缺少苦杏仁的質(zhì)量控制項目，故選擇薄層鑒別方法對苦杏仁進行質(zhì)量控制。原標(biāo)準(zhǔn)中已有前胡的薄層鑒別方法，故另選擇前胡中的指標(biāo)性成分白花前胡甲素與白花前胡乙素進行定量測定，控制產(chǎn)品質(zhì)量。

3.2 苦杏仁的鑒別 苦杏仁的薄層鑒別方法在許多研究文獻中需要脫脂步驟[2-4]。經(jīng)考察，本品供試品溶液的制備過程是否采用脫脂步驟對斑點的影響不大，原因可能為苦杏仁為提取后進行制劑，直接采用甲醇超聲已能對樣品中的苦杏仁苷滲透、提取完全，故采用甲醇超聲提取制備供試品，操作簡便，縮短操作時間。方法靈敏度高，專屬性強，斑點清晰，分離度好。

表2 3批止咳片中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量

3.3 前胡的含量測定 2010年版《中華人民共和國藥典》等[5-6]采用三氯甲烷提取，用甲醇轉(zhuǎn)溶的方法制備供試品，方法稍嫌繁瑣。筆者在比較提取溶劑、提取方法、提取時間的基礎(chǔ)上，選擇本研究確定的供試品溶液制備方法，優(yōu)化提取溶劑，增大提取溶劑的體積比，取消蒸干、轉(zhuǎn)溶等步驟，在簡化操作的基礎(chǔ)上又保證提取完全。

實驗另比較甲醇-水系統(tǒng)[5-6]、乙腈-水梯度系統(tǒng)[7]和甲醇-0.5%磷酸系統(tǒng)，認(rèn)為甲醇-水系統(tǒng)已完全能滿足分析要求，操作簡單，故選擇甲醇-水系統(tǒng)。

本方法完善了止咳片的質(zhì)量控制項目，為更全面地控制本品的質(zhì)量提供了可靠、有效的方法保證。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第四冊[S].WS3-B-0776-90.

[2] 楊爽，何妍茜，楊潔，等.感冒軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高的研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2013，24(8)：1930-1932.

[3] 倪亞娜，趙俊華，趙俊秋.桂靈丸鑒別方法的研究[J].中國醫(yī)藥指南，2012，10(33)：80-81.

[4] 胡英婕.小兒肺熱咳喘顆粒的薄層色譜鑒別研究[J].遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，32(4)：352-355.

[5] 吳文玲，陳佳佳，劉守金，等.HPLC同時測定前胡中3種香豆素成分的含量[J].中國中藥雜志，2009，34(9)：1121-1123.

[6] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：248.

[7] 趙迪，周悌強，馮素香，等.HPLC-ELSD-UV法同時測定氨酚那敏三味浸膏膠囊中長梗冬青苷、白花前胡甲素、白花前胡乙素[J].中成藥，2012，34(10)：1908-1912.

DOI 10.3870/yydb.2015.06.030

2014-02-28

2014-05-20

劉慧(1986 -)，女，浙江湖州人，主管中藥師，在讀碩士，研究方向：臨床中藥學(xué)。電話：(0)13757281873，E-mail：109353194@qq.com。

R286；R927.2

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1004-0781(2015)06-0811-03