徐宏峰，楊全偉，劉新國(guó)，余南才，張耕

(武漢市第一醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430022)

加權(quán)評(píng)分正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選益胃即型凝膠提取工藝

徐宏峰，楊全偉，劉新國(guó)，余南才，張耕

(武漢市第一醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430022)

目的 優(yōu)選益胃即型凝膠中丹酚酸B的水回流提取工藝條件。方法 在單因素考察基礎(chǔ)上，以君藥丹參中水溶性成分丹酚酸B提取量和干膏得率進(jìn)行加權(quán)評(píng)分，作為綜合考察指標(biāo)，采用高效液相色譜法測(cè)定丹酚酸B的含量，優(yōu)選其正交實(shí)驗(yàn)提取條件。結(jié)果 優(yōu)選工藝為加10倍水浸泡1 h，回流提取2次，每次1 h。結(jié)論 優(yōu)選工藝所得丹酚酸B含量和干膏得率較高，工藝穩(wěn)定可行。

益胃即型凝膠；丹酚酸B；正交實(shí)驗(yàn)；提取工藝；色譜法，高效液相

益胃即型凝膠為武漢市第一醫(yī)院國(guó)家級(jí)重點(diǎn)?？破⑽覆】频呐R床處方，是在四君子湯合左金丸基礎(chǔ)上化裁而來(lái)，主要用于益氣和胃，活血止痛，治療脾胃虛弱、血瘀胃痛、體倦神疲、噯腐吞酸、纏綿反復(fù)?？商岣邼冇腺|(zhì)量，與三聯(lián)療法合用，提高幽門(mén)螺桿菌根除率。該方主要由丹參、太子參、姜黃連、大黃等中藥組成，具有益氣和胃之功，結(jié)合胃中的內(nèi)環(huán)境呈酸性，故制備成pH敏感型凝膠，藥物直達(dá)病灶，能更好發(fā)揮其治療作用。為了優(yōu)選其最佳提取工藝條件，以方中君藥丹參中水溶性成分丹酚酸B的提取量和干膏提取率進(jìn)行加權(quán)評(píng)分，作為綜合考察指標(biāo)，采用高效液相色譜法測(cè)定其含量，結(jié)合提取的干膏得率，以加水量、提取時(shí)間、浸泡時(shí)間、提取次數(shù)分別進(jìn)行單因素考察，確定其提取因素水平，以L9(34)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters e2695系列高效液相色譜儀(美國(guó))；電子天平：Sartorius ME215S(Max210 g，感量：0.01mg)；丹酚酸B對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110715-201016)；丹參、太子參、白術(shù)、茯苓、姜黃連、大黃、仙鶴草、炙甘草、制吳茱萸(湖北天濟(jì)醫(yī)藥有限公司提供)；甲醇、乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：HYPERSIL-C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相：乙腈-甲醇-水-甲酸(7：25：67：1)，流速1.0 mL·min-1，波長(zhǎng)286 nm，柱溫30 ℃

2.2 溶液的制備

2.2.1 丹酚酸B對(duì)照品溶液的制備 精密稱取丹酚酸B對(duì)照品13.94 mg，置50 mL量瓶中，加75%甲醇溶解并定容，制成每毫升含丹酚酸B 0.278 8 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 按處方比例稱取藥材121.5 g，用10倍量的水，浸泡1 h，回流提取2次，每次提取1 h，水回流提取，收集所得藥液，濃縮至一定程度，加苯甲酸鈉0.6 g，調(diào)整全量至200 mL，搖勻，即得樣品。精密量取2 mL，置50 mL量瓶中，加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

2.2.3 丹參藥材溶液的制備 精密稱取丹參粉末(過(guò)三號(hào)篩)0.247 3 g，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用75%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得[1]。

2.2.4 丹參陰性對(duì)照溶液的制備 按處方量稱取不含丹參的其余藥材，用10倍量的水，浸泡1 h，回流提取2次，每次提取1 h，收集所得藥液，濃縮至一定程度，加苯甲酸鈉0.6 g，調(diào)整全量至200 mL，搖勻，按丹參藥材溶液制法即得。

2.3 方法專屬性 吸取對(duì)照品溶液、丹參藥材溶液、供試品溶液、丹參陰性對(duì)照溶液各10 μL，進(jìn)樣，檢測(cè)，丹酚酸B對(duì)照品、丹參藥材溶液、供試品在約18 min出現(xiàn)丹酚酸B色譜峰，丹參陰性對(duì)照無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

A.丹參陰性對(duì)照溶液；B.丹酚酸B對(duì)照品溶液；C.丹參藥材溶液；D.供試品溶液；1.丹酚酸B

圖1 4種溶液的HPLC圖

2.4 線性關(guān)系考察 取上述對(duì)照品溶液，精密量取2，3，4，5，10，20 mL，分別至20 mL量瓶中，加75%甲醇定容，搖勻，即得。分別在上述色譜條件下進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)、對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)線性回歸，得回歸方程：Y=11 143X-23 229，r=0.999 9；表明丹酚酸B在27.88～278.80 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液10 mL至20 mL量瓶中，加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。進(jìn)樣10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄丹酚酸B峰面積，峰面積RSD=1.02%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)供試品溶液，分別于0，1，2，4，8，12 h進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算丹酚酸B峰面積RSD=0.49%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取本品，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法平行制備6份供試品溶液，測(cè)定丹酚酸B的含量，結(jié)果平均含量為1.966 4 mg·mL-1，RSD為0.83%，表明本法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的供試品溶液6份，搖勻，精密量取1 mL，分別置50 mL量瓶中，各精密加入適量的丹酚酸B對(duì)照品，加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定并計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為97.74%(RSD=1.38%)，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 正交實(shí)驗(yàn) 在查閱文獻(xiàn)和單因素考察基礎(chǔ)上，針對(duì)加水量，提取時(shí)間，浸泡時(shí)間，提取次數(shù)4個(gè)影響因素，以丹酚酸B含量和干膏得率進(jìn)行加權(quán)評(píng)分，權(quán)重系數(shù)按丹酚酸B、出膏率所占比例75：25來(lái)確定(綜合評(píng)分=丹酚酸B總量/最大丹酚酸B提取總量×75% +出膏得率/最大出膏得率×25%)，以L9(34)表進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2～4。

正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：通過(guò)直觀分析，4個(gè)因素對(duì)丹酚酸B提取量、干膏得率，綜合評(píng)分的影響次序不同，丹酚酸B提取量為D>A>C>B，最佳工藝為A3B3C2D2；干膏得率為D>A>B>C，最佳工藝為A3B3C1D3；綜合評(píng)分為D>A>C>B，最佳工藝為A3B3C2D2。以綜合評(píng)分為指標(biāo)所考察的4個(gè)因素中，加水量和提取次數(shù)對(duì)提取工藝的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜合考慮，最終確定最佳工藝為A3B1C2D2，即浸泡1 h，加10倍量水，提取2次，每次1 h。

根據(jù)確定的工藝條件，進(jìn)行3批小試、中試驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表5，6。按照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅨH項(xiàng)水分測(cè)定法第一法(烘干法)測(cè)定，測(cè)得丹參藥材含水量12.69%，丹參藥材中含丹酚酸B平均量為42.742 9 mg·g-1。

A.加水量；B.提取時(shí)間；C.浸泡時(shí)間；D.提取次數(shù)；丹酚酸B含量為丹參22.5 g提取量

3 討論

2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》收載丹參含量測(cè)定成分指標(biāo)為脂溶性成分丹參酮ⅡA和水溶性成分丹酚酸B，本實(shí)驗(yàn)為水回流提取，故選擇丹酚酸B含量作為考察指標(biāo)[2]，也有選擇對(duì)丹參中水溶性成分丹參素鈉和原兒茶醛進(jìn)行測(cè)定[3]。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定丹酚酸B含量，分離效果好，操作簡(jiǎn)便，穩(wěn)定性好。

通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選提取條件，通過(guò)對(duì)3批小試及3批中試生產(chǎn)樣品中丹酚酸B進(jìn)行含量測(cè)定，丹酚酸B提取率較高，含量穩(wěn)定，可以為益胃即型凝膠進(jìn)行工業(yè)化大生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

A.加水量；B.提取時(shí)間；C.浸泡時(shí)間；D.提取次數(shù)；F0.05(2，2)=19.00

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：70-71.

[2] 張昀，劉路，李欽.丹參中丹酚酸B的提取工藝研究[J].中草藥，2007，38(8)：1193-1194.

[3] 薛繼雄，周暉，劉萌.高效液相色譜法測(cè)定消炎灌腸液中丹參水溶性成分的含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2005，24(1)：66-67.

DOI 10.3870/yydb.2015.06.029

2014-05-20

2014-08-29

徐宏峰(1979-)，男，湖北黃陂人，主管中藥師，碩士，主要從事中藥新制劑新劑型研究。電話：(0)15327269593，E-mail：282215830@qq.com。

張耕(1965-)，男，湖北仙桃人，主任藥師，主要從事藥物制劑工作。電話：(0)13607167162，E-mail：zhanggeng888@126.com。

R286；TQ460.6

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1004-0781(2015)06-0808-03