謝招娣

(海南省海口市第四人民醫(yī)院，海南 海口 571100)

子宮內(nèi)膜異位癥異位內(nèi)膜神經(jīng)纖維分布與患者疼痛的關系

謝招娣

(海南省?？谑械谒娜嗣襻t(yī)院，海南 ?？?571100)

目的探討子宮內(nèi)膜異位癥(EMT)異位內(nèi)膜神經(jīng)纖維分布與患者疼痛的關系。方法選取經(jīng)手術子宮切除患者46例，經(jīng)視覺模擬評分(VAS)將患者分為EMT無痛組(23例)和EMT 疼痛組(23例)。應用免疫組織化學法檢測EMT異位內(nèi)膜神經(jīng)纖維在子宮內(nèi)膜組織中的分布，分別采用兔抗人抗蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP9.5)抗體與神經(jīng)突觸生長標記物生長相關蛋白-43(GAP-43)抗體檢測有髓和無髓神經(jīng)纖維的分布。結果通過PGP9.5染色標記，發(fā)現(xiàn)EMT疼痛組患者異位內(nèi)膜功能層、子宮肌層以及異位病灶(卵巢、腹膜、深部浸潤部位等)均有神經(jīng)纖維的異常增多，而在EMT無痛組中僅在子宮內(nèi)膜基底層有神經(jīng)纖維分布。通過GAP-43標記物，發(fā)現(xiàn)感覺神經(jīng)纖維未出現(xiàn)在內(nèi)異灶內(nèi)形成成熟血管的基質(zhì)內(nèi)，僅和未成熟的血管相伴出現(xiàn)。結論EMT疼痛組患者有異位內(nèi)膜神經(jīng)纖維的異常分布情況。EMT中神經(jīng)纖維的表達與疼痛嚴重程度有關，EMT患者疼痛的原因之一可能是神經(jīng)纖維的異常高表達。

子宮內(nèi)膜異位癥；神經(jīng)纖維；免疫組織化學；疼痛

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMT)是指在女性體內(nèi)除子宮腔被覆黏膜以外的其他部位，有活性的子宮內(nèi)膜的組織(包括腺體和間質(zhì))出現(xiàn)并種植生長，簡稱內(nèi)異癥，是臨床上育齡期婦女常見的婦科病[1]。疼痛為該病的主要癥狀，有多種表現(xiàn)形式的疼痛，如痛經(jīng)、性交痛、慢性盆腔痛 (chronic pelvic pain，CCP)和經(jīng)期肛門墜痛等，其中以痛經(jīng)最為明顯[2-3]。EMT患者表現(xiàn)出來嚴重程度不一的疼痛癥狀，持續(xù)時間長或反復發(fā)作，對婦女的心理和生理健康構成了嚴重影響，同時也給患者帶來了嚴重的經(jīng)濟壓力[2]。對于其發(fā)病機制目前尚未有明確解釋，有研究表明經(jīng)免疫組織化學檢測有較多神經(jīng)纖維出現(xiàn)在子宮內(nèi)膜功能層的EMT患者大多臨床上表現(xiàn)主要為疼痛，提示EMT患者疼痛的一個可能原因是神經(jīng)纖維異常分布[4-5]?，F(xiàn)通過檢測EMT患者異位內(nèi)膜中的神經(jīng)纖維蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP9.5)和神經(jīng)生長因子(NGF)的分布情況，探討其與疼痛的關系。

1 臨床資料

1.1一般資料 選取2011年2月—2013年8月我院收治的EMT患者40例(EMT組)，經(jīng)視覺模擬評分(VAS)分為EMT無痛組23例(VAS評分為0)和EMT疼痛組23例(VAS評分>0)。EMT疼痛組中痛經(jīng)18例、慢性盆腔痛3例、性交痛1例和經(jīng)期肛門墜痛1例；其重度疼痛(VAS≥7分)14例，中度疼痛(4≤VAS<7分)7例，輕度疼痛(VAS<4分)2例。同時術前3 個月內(nèi)所有納入統(tǒng)計資料的患者均未服用過激素類藥物，排除盆腔炎、子宮腺肌病、子宮肌瘤及其他引起盆腔疼痛疾病的患者，2組年齡、孕產(chǎn)次、月經(jīng)周期和受教育程度比較差異無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。

1.2方法 縱行剖開切除的子宮，得到子宮全層。根據(jù)文獻子宮內(nèi)膜基底層定義為距離子宮內(nèi)膜-肌層交界≤300 μm，子宮內(nèi)膜基底層與子宮內(nèi)膜上皮層的部分定義為功能層[6]。采用石蠟包埋、10%福爾馬林固定子宮內(nèi)膜標本，標本進行連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟進行免疫組化染色，一抗為兔抗人NGF多克隆抗體(上海工碩生物技術有限公司)，兔抗人PGP9.5多克隆抗體和兔抗人SP多克隆抗體(購于北京中杉金橋生物技術有限公司)。磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗作為陰性對照，已知陽性片為陽性對照。

1.3結果判定標準 在400倍高倍視野下隨機選取5個具有代表性的視野，圖像分析利用Image-pro Plus圖像分析系統(tǒng)進行，取各自測量的灰度平均值作為該切片的灰度，反映陽性程度。NGF細胞以細胞質(zhì)或細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。神經(jīng)纖維密度判定：在低倍鏡下選取神經(jīng)纖維高密度區(qū)，再轉(zhuǎn)換成高倍鏡，每高倍視野下有一面積為1 mm×1 mm的正方形網(wǎng)格，共計數(shù)5個網(wǎng)格中神經(jīng)纖維的數(shù)量，取平均值作為該石蠟切片的神經(jīng)纖維密度。

2 結 果

2.1異位子宮內(nèi)膜基底層PGP9.5及GAP-43標記神經(jīng)纖維數(shù)目比較 EMT疼痛組PGP 9.5標記神經(jīng)纖維在異位子宮內(nèi)膜功能層和基底層均有表達，EMT無痛組PGP 9.5標記神經(jīng)纖維僅在異位子宮內(nèi)膜基底層表達，GAP-43標記感覺神經(jīng)纖維在EMT疼痛組和EMT無痛組患者異位子宮內(nèi)膜功能層均無表達，僅在子宮內(nèi)膜功能層淺層與子宮內(nèi)膜腺體和血管相伴出現(xiàn)。經(jīng)t檢驗，2組異位子宮內(nèi)膜功能層PGP 9.5標記神經(jīng)纖維數(shù)目比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 異位子宮內(nèi)膜不同部位EMT疼痛組和EMT無痛組神經(jīng)纖維數(shù)目

注：①與EMT疼痛組比較，P<0.001 3。

2.2NGF、GAP-43在內(nèi)異癥疼痛組內(nèi)膜的表達與其疼痛程度的關系 NGF、GAP-43在內(nèi)異癥重度疼痛組陽性灰度值最高，而在輕度疼痛組組織陽性灰度值最低，3組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2及圖1～2。

表2 NGF、GAP-43在內(nèi)異癥疼痛組內(nèi)的表達

圖1 NGF在內(nèi)異癥不同疼痛組內(nèi)表達直方圖

圖2 GAP-43在內(nèi)異癥不同疼痛組內(nèi)表達直方圖

3 討 論

EMT是臨床上生育年齡婦女常見的多發(fā)婦科疾病，為探討該病的發(fā)病機制，多年來國內(nèi)外學者進行了大量的研究工作，但目前為止尚未明確其發(fā)病病因[7]。Berkley等[8]在EMT小白鼠中觀察到了神經(jīng)纖維的形成。Tokushige等[9]研究發(fā)現(xiàn)在育齡女性EMT患者的在位和異位子宮內(nèi)膜存在與新生血管相伴的神經(jīng)纖維分布，并且認為EMT 的發(fā)病可能與這種神經(jīng)纖維參與有關。本次研究亦發(fā)現(xiàn)EMT患者組織中有神經(jīng)纖維分布，同時對所得數(shù)據(jù)結果進行分析發(fā)現(xiàn)，EMT的疼痛與子宮內(nèi)膜神經(jīng)纖維分布有一定的關聯(lián)性。PGP9.5作為神經(jīng)軸突標記物，是一種具有神經(jīng)纖維中高度特異性的物質(zhì)，任何有髓或無髓的神經(jīng)纖維都可以與抗PGP9.5抗體結合。SP是感覺神經(jīng)的肽能物質(zhì)，它同時還調(diào)節(jié)者神經(jīng)源性炎癥反應和免疫，可以傳遞痛覺和達到鎮(zhèn)痛[10]。有文獻報道指出女性子宮內(nèi)膜組織中的神經(jīng)纖維可能從子宮內(nèi)膜功能層起源，高表達的相關物質(zhì)導致了部分的神經(jīng)纖維浸潤生長，從而引發(fā)異位癥[11]。最近研究發(fā)現(xiàn)，EMT患者的子宮內(nèi)膜出現(xiàn)和健康女性子宮內(nèi)膜的神經(jīng)纖維分布存在差異性，并且認為差異與EMT的疼痛發(fā)病有直接或間接的關系[12-13]。

本研究以兔PGP9.5抗體與GAP-43抗體檢測神經(jīng)纖維的分布，結果發(fā)現(xiàn)，EMT疼痛組患者子宮內(nèi)膜中有PGP 9.5、GAP-43的表達，而EMT無痛組在子宮內(nèi)膜基底層表達，并且EMT疼痛組中PGP 9.5的密度高于EMT無痛組(P<0.05)，說明EMT疼痛組患者出現(xiàn)異位內(nèi)膜神經(jīng)纖維的異常分布情況。EMT中神經(jīng)纖維的表達與疼痛的嚴重程度有關。本研究結果有力地說明了神經(jīng)纖維的分布導致患者疼痛，但是本研究還存在一定的不足，沒有說明神經(jīng)纖維是如何導致患者疼痛的，另外VAS評分也可能造成主觀誤差。這些問題需要今后更細致的、更大樣本量的研究和探討。

[1] 賴曉嵐,華興,陳燕輝. 子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜中神經(jīng)纖維的表達[J]. 山東大學學報：醫(yī)學版,2011,49(1):107-109

[2] 史精華,冷金華,郎景和. 子宮腺肌病神經(jīng)纖維的分布及其臨床意義[J]. 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展,2011,20(5):385-391

[3] 高慧. 縮宮素受體、神經(jīng)生長因子在子宮內(nèi)膜異位癥的表達及與疼痛的關系[J]. 中國婦產(chǎn)科臨床雜志,2011,12(5):376-378

[4] 劉芳. 神經(jīng)及其他因子在子宮內(nèi)膜異位性疾病疼痛中作用的研究進展[J]. 復旦學報：醫(yī)學版,2014,41(2):274-277

[5] Arnold J,Barcena de Arellano ML,Ruster C,et al. Imbalance between sympathetic and sensory innervation in peritoneal endometriosis[J]. Brain Behav Immun,2012,26(1):132-141

[6] 劉莉娜,姜盟,王廣蘭,等. 子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜神經(jīng)纖維分布與疼痛關系的研究[J]. 實用婦產(chǎn)科雜志,2012,28(8):654-656

[7] 閆瑞玲,新羅. 子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜神經(jīng)纖維分布與疼痛關系的研究[J]. 中國醫(yī)學工程,2013,21(6):18-19；21

[8] Berkley KJ,Dmitrieva N,Curtis KS,et al. Innervation of ectopic endometrium in a rat model of endometriosis[J]. PNAS,2004,101(30):11094-11098

[9] Tokushige N,Markham R,Russell P,et al. High density of small nerve fibers in the functional layer of the endometrium in women with endometriosis[J]. Hum Reprod,2006,21(3):782-787

[10] 郎景和，冷金花，周應芳，等. 子宮內(nèi)膜異位癥[J]. 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展,2006,15(3):161-172

[11] Maytham GD,Dowson HM,Levy B,et al. Laparoscopic excision of rectovaginal endometriosis:report of a prospective study and review of the literature[J]. Colorectal Dis,2010,12(11):1105-1112

[12] Nabll H,Tuller E，Sharpe-Timms KL. Haptoglobin expression endometrioid adenocarcinoma of the uterus[J]. Reprod Sci,2010,17(1):47-55

[13] 廉玉玲,王莉. 子宮內(nèi)膜異位癥相關性疼痛的發(fā)病機制[J]. 中國婦幼保健,2012,27(26):4159-4163

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.32.031

R711.71

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1008-8849(2015)32-3616-02

2014-11-20