董秀娟，邢寶恒，曹亞磊，李 芹

(河北省滄州市中心醫(yī)院,河北 滄州 061001)

論 著

白藜蘆醇對妊娠期糖尿病大鼠血糖、血脂和相關炎癥因子影響的研究

董秀娟，邢寶恒，曹亞磊，李 芹

(河北省滄州市中心醫(yī)院,河北 滄州 061001)

目的研究白藜蘆醇(Resveratrol，Res)對妊娠期糖尿病大鼠血糖、血脂和相關炎癥因子的影響。方法取60只妊娠5 d SD大鼠，通過一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)35 mg/kg制備妊娠期糖尿病大鼠模型，隨機分為模型組、白藜蘆醇60 mg/kg組、白藜蘆醇120 mg/kg組、白藜蘆醇240 mg/kg組和鹽酸二甲雙胍(200 mg/kg)組，每組12只；另取12只妊娠5 d SD大鼠作為正常妊娠組，12只非妊娠雌性大鼠作為對照組。分別于給藥前和給藥第7,14天檢測空腹血糖和胰島素水平。給藥滿2周后，測量各組大鼠體質量；通過全自動生化檢測儀測定總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)及C反應蛋白(CRP)水平，采用ELISA法測定血漿中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白細胞介素-6(IL-6)水平。結果正常妊娠組和對照組空腹血糖和胰島素水平、體質量、TC、TG、LDL-C、HDL-C、CRP、TNF-α和IL-6水平比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。與正常妊娠組相比，模型組胰島素水平顯著降低，空腹血糖水平顯著升高，體質量明顯增加，血清TC、TG、LDL-C水平顯著升高，血清HDL-C水平顯著降低，血漿CRP、TNF-α、IL-6水平顯著升高，差異均有統計學意義(P均<0.05)。與模型組相比，白藜蘆醇120 mg/kg組、白藜蘆醇240 mg/kg組胰島素水平顯著升高，血糖水平，體質量，血清TC、TG、LDL-C水平及血漿CRP、TNF-α、IL-6水平均顯著降低，差異均有統計學意義(P均<0.05)；白藜蘆醇240 mg/kg組血清HDL-C水平顯著升高(P<0.05)。與鹽酸二甲雙胍組相比，白藜蘆醇240 mg/kg組胰島素水平顯著升高，血清TC、TG、LDL-C水平及血漿CRP、TNF-α、IL-6水平均顯著降低，差異均有統計學意義(P均<0.05)。結論白藜蘆醇對妊娠期糖尿病大鼠具有劑量依賴性的提高胰島素分泌、降低血糖和體質量、調節(jié)血脂和炎癥因子水平的作用，并且改善胰島素分泌及調節(jié)血脂和炎癥因子水平的作用強于鹽酸二甲雙胍。

白藜蘆醇；妊娠期糖尿??；血脂；炎癥因子

妊娠期糖尿病(Gestational Diabetes Mellitus,GDM)是指在妊娠期發(fā)生或首次發(fā)現的糖尿病或糖耐量異常，能夠明顯增加先兆性子癇、胎膜早破、早產的危險性，胎兒畸形的發(fā)生率是正常對照的3～4倍，嚴重危害著母體及胎兒的健康[1-2]。隨著研究的深入，發(fā)現肥胖、脂質代謝紊亂以及炎癥反應在妊娠期糖尿病的發(fā)病機制中具有非常關鍵的作用[3-6]。白藜蘆醇是一種廣泛存在于葡萄、虎杖、花生等植物或其果實中的天然多酚類化合物，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抗血小板聚集等多種藥理學作用[7-8]。本實驗采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)的方法制備妊娠期糖尿病大鼠模型，旨在研究白藜蘆醇對妊娠期糖尿病大鼠血糖、血脂和炎癥因子水平的影響。

1 實驗資料

1.1試驗藥物 白藜蘆醇(陜西慧科植物開發(fā)有限公司，批號：120917，于我院制劑室分析檢測，純度≥98%)，白藜蘆醇對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：107948-305021，含量99.4%)，鹽酸二甲雙胍(北京中惠藥業(yè)有限公司，批號：20130524)。

1.2動物 清潔級雌、雄性SD大鼠，體質量180～220 g，購于河北省實驗動物中心，許可證號：冀醫(yī)動字第 1308026 號。在我院實驗樓動物房飼養(yǎng)并進行模型的制備，飼養(yǎng)環(huán)境：溫度23～25 ℃，相對濕度65%～70%，光照周期12 h∶12 h。

1.3試劑 總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、C反應蛋白(CRP)檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)，胰島素ELISA檢測試劑盒以及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)ELISA檢測試劑盒(美國密理博公司)，STZ(美國Sigma公司)，烏拉坦(北京化學試劑公司)，其余試劑均為分析純。

1.4儀器 卓越310型全自動生化分析儀(武漢精誠偉業(yè)醫(yī)療設備有限公司)，酶標儀(瑞士TECAN公司)，TDL-50C低速離心機(上海圣科儀器設備有限公司)，AL104電子天平(Mettler- Toledo公司)，血糖儀(羅氏)。

1.5方法

1.5.1動物分組與模型制備 參照莊璟怡等[9]報道的試驗方法制備妊娠期糖尿病大鼠模型：實驗用雌性大鼠給予高脂飲食飼養(yǎng)8周后，將處于動情前期的雌鼠按1∶2的比例與雄鼠合籠過夜，次日鏡檢陰道物涂片，觀察到精子的認定為孕鼠，為妊娠第1天。妊娠5 d后，一次性腹腔注射STZ 35 mg/kg制作妊娠期糖尿病大鼠模型，72 h后測定空腹血糖穩(wěn)定在13.5 mmol/L以上即認定為造模成功。選取60只妊娠期糖尿病大鼠,然后隨機分為模型組、白藜蘆醇60 mg/kg組、白藜蘆醇120 mg/kg組、白藜蘆醇240 mg/kg組和鹽酸二甲雙胍(200 mg/kg)組，每組12只；另取12只妊娠5 d SD大鼠作為正常妊娠組；12只非妊娠雌性大鼠作為對照組。對照組、正常妊娠組和模型組分別給予等體積的生理鹽水，其余組連續(xù)給予相應藥物2周，每天1次。

1.5.2血糖和胰島素水平檢測 給藥前和給藥第7天、第14天分別通過血糖儀測定各組空腹血糖水平，并按胰島素 ELISA 檢測試劑盒操作步驟測定各組血漿胰島素水平。

1.5.3體質量的測量 給藥滿2周后，通過電子天平分別測量各組大鼠體質量并記錄。

1.5.4血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平檢測 給藥滿2周后，腹腔注射烏拉坦實施麻醉，經腹主動脈取血，2 000 r/min離心5 min后取上層血清，通過全自動生化檢測儀測定各組血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。

1.5.5血漿TNF-α、IL-6、CRP水平檢測 給藥滿2周后，腹腔注射烏拉坦實施麻醉，經腹主動脈取血，肝素抗凝，按照ELISA試劑盒操作方法步驟測定血漿TNF-α、IL-6、CRP水平。

2 結 果

2.1各組空腹血糖和胰島素水平比較 正常妊娠組與對照組胰島素和空腹血糖水平比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。模型組較正常妊娠組胰島素水平顯著降低，空腹血糖水平顯著升高，給予白藜蘆醇120，240mg/kg1周和2周后，胰島素水平均顯著升高，并且與鹽酸二甲雙胍組相比，白藜蘆醇240mg/kg組胰島素水平顯著升高，白藜蘆醇120mg/kg組和白藜蘆醇240mg/kg組空腹血糖水平逐漸降低，各組比較差異均有統計學意義(P均<0.05)。見表1。

表1 各組空腹血糖和胰島素水平比較

注：①與模型組比較，P<0.05；②與鹽酸二甲雙胍組比較，P<0.05。

2.2各組大鼠體質量比較 給藥滿2周后，對照組、模型組、白藜蘆醇60mg/kg組、白藜蘆醇120mg/kg組、白藜蘆醇240mg/kg組和鹽酸二甲雙胍組體質量分別為(282.6±25.5)g、(285.1±26.4)g、(347.2±29.6)g、(335.4±30.2)g、(318.7±28.1)g、(304.3±26.5)g、(315.6±25.8)g，模型組大鼠體質量顯著高于正常妊娠組(P<0.05)，白藜蘆醇120mg/kg組、白藜蘆醇240mg/kg組、鹽酸二甲雙胍組體質量均明顯低于模型組(P均<0.05)。

2.3各組血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平比較 正常妊娠組與對照組血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平比較差異均無統計學意義(P均>0.05)；與正常妊娠組比較，模型組血清TC、TG、LDL-C水平顯著升高，HDL-C水平顯著降低，差異均有統計學意義(P均<0.05)；與模型組比較，白藜蘆醇120mg/kg組、白藜蘆醇240mg/kg組和鹽酸二甲雙胍組血清TC、TG水平顯著降低，白藜蘆醇240mg/kg組LDL-C水平顯著降低、HDL-C水平顯著升高，差異均有統計學意義(P均<0.05)；白藜蘆醇240mg/kg組血清TC、TG、LDL-C水平均顯著低于鹽酸二甲雙胍組(P均<0.05)。見表2。

表2 各組血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平比較

注：①與模型組比較，P<0.05；②與鹽酸二甲雙胍組比較，P<0.05。

2.4各組血漿CRP、TNF-α、IL-6水平比較 正常妊娠組與對照組血漿CRP、TNF-α、IL-6水平比較差異均無統計學意義(P均>0.05)；模型組血漿CRP、TNF-α、IL-6水平顯著高于正常妊娠組(P均<0.05)，白藜蘆醇120mg/kg組、白藜蘆醇240mg/kg組和鹽酸二甲雙胍組血漿CRP、TNF-α、IL-6水平顯著低于模型組(P均<0.05)，白藜蘆醇240mg/kg組血漿CRP、TNF-α、IL-6水平顯著低于鹽酸二甲雙胍組(P均<0.05)。見表3。

表3 各組血漿CRP、TNF-α、IL-6水平比較

注：①與模型組比較，P<0.05；②與鹽酸二甲雙胍組比較，P<0.05。

3 討 論

妊娠期糖尿病是妊娠期常見的并發(fā)癥之一，其病因與發(fā)病機制尚未完全闡明，目前認為是多種因素綜合作用的結果，其中胰島素分泌減少和胰島素抵抗被認為是妊娠期糖尿病發(fā)病的重要環(huán)節(jié)，而炎癥、脂質代謝異常在妊娠期糖尿病的發(fā)病機制中起媒介作用，許多炎癥因子(包括CRP、TNF-α、IL-6和IL-1等)與妊娠期糖尿病患者胰島素抵抗密切相關，參與了妊娠期糖尿病的發(fā)生、發(fā)展[10]。病理生理學研究發(fā)現，TC、TG能夠導致體內脂質代謝異常，而TG、LDL-C能夠損害血管內皮，是導致動脈粥樣硬化甚至心肌梗死的危險因子；HDL-C能夠協助轉運膽固醇進而代謝為膽汁酸而表現出對機體的保護作用[11]。CRP、TNF-α和IL-6參與炎癥反應，進而影響肌肉和脂肪細胞等胰島素敏感細胞磷酸化，胰島素信號轉導受阻而致葡萄糖代謝異常[12]。本實驗采用高脂高糖飲食喂養(yǎng)8周后，一次性腹腔注射STZ的方法制備妊娠期糖尿病大鼠模型，結果與正常妊娠組比較，模型組大鼠出現肥胖癥狀，并且血清TC、TG、LDL-C水平均顯著升高，HDL-C水平顯著降低，血漿CRP、TNF-α和IL-6水平均顯著升高。

白藜蘆醇是一種天然存在的非黃酮類多酚化合物，其具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種生物學作用。本研究結果顯示，經白藜蘆醇120，240mg/kg治療2周后，妊娠期糖尿病大鼠胰島素分泌水平顯著升高，空腹血糖水平顯著降低，體質量顯著降低，血清TC、TG、LDL-C水平及血漿CRP、TNF-α、IL-6水平均顯著降低，且各指標改善情況均優(yōu)于鹽酸二甲雙胍組；其作用機制可能是對炎癥因子的直接抑制或通過降低空腹血糖水平，解除高血糖對血管的刺激，阻斷促使炎癥因子大量產生的始動環(huán)節(jié)，并且通過直接降低炎癥因子水平，以利于組織血管的修復，從而達到消除或控制炎癥因子的產生。

綜上所述，白藜蘆醇對妊娠期糖尿病大鼠具有劑量依賴性的提高胰島素分泌、降低血糖和體質量、調節(jié)血脂和血漿炎癥因子水平的作用，并且改善胰島素分泌及調節(jié)血脂和炎癥因子水平的作用強于鹽酸二甲雙胍。但目前有關白藜蘆醇治療妊娠期糖尿病的研究很少，尚需擴大樣本量進行藥物活性成分及分子生物學機制研究，以為臨床應用提供理論依據。

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《現代中西醫(yī)結合雜志》社

Study of resveratrol on regulation of glucose-lipid metabolism and inflammatory cytokines in gestational diabetic rats

DONG Xiujuan,XING Baoheng, CAO Yalei, LI Qin

(Cangzhou Central Hospital, Cangzhou 061001, Hebei,China)

Objective It is to investigate the effects of Resveratrol(Res) on the levels of blood glucose and lipid and correlated inflammatory cytokines in Gestational Diabetic rats. Methods 60 rats with gestation for five days were injected STZ (35 mg/kg) by intraperitonal to make gestational diabetic model, which were randomly devided into five groups: normal gestation group, gestational diabetic model group, Resveratrol(60, 120 and 240 mg/kg) treated groups and Metformin hydrochloride 200 mg/kg treated group, every group had 12 rats. Anther 12 rats with gestation for five days as normal gestation control group and 12 rats with no gestation as normal control group. Before the drugs were given and 7, 14 days after treated, the level of plasma glucose and insulin were determined. After two weeks’ treatment, the body weight were detected, the content of TC, TG, LDL-C, HDL-C, CRP in serum were detected with automated analysis, and the level of TNF-α, IL-6 in plasma were also detected with ELISA. Results Compared with normal control group, the level of plasma glucose and insulin of the normal gestation control group was not significantly different(P>0.05), the body weigh were not significantly different(P>0.05), the content of TC, TG, LDL-C, HDL-C and the level of CRP, TNF-α, IL-6 were also not significantly different(P>0.05). Compared with the normal gestation control group, the level of plasma glucose in gestational diabetic model group was significantly increased and the level of insulin was significantly decreased(P<0.01); the body weight was significantly increased (P<0.01)；the content of TC, TG, LDL-C were significantly increased and the HDL-C was significantly decreased(P<0.05,P<0.01). Compared with model group, the content of TC, TG, LDL-C, the level of plasma glucose,CRP,TNF-α,IL-6 body weight were significantly decreased(P<0.05,P<0.01), while the level of plasma insulin was decreased in Res (120, 240 mg/kg) treated groups, furthermore, the content of HDL-C in Res 240 mg/kg treated group was significantly increased(P<0.05). Compared with the Metformin hydrochloride treated group, the content of TC, TG, LDL-C and the levels of CRP, TNF-α, IL-6 in plasma were significantly decreased while plasma insulin was increased in Res (240 mg/kg) treated group. Conclusion Res had dose-dependent effect of improving insulin secretion, lowering blood sugar and body weight, regulating plasma lipid, the level of CRP、TNF-α、IL-6 and these effects of Res was better than Metformin hydrochloride except lowering blood sugar and body weight.

resveratrol; gestational diabetes; plasma lipid; inflammatory cytokines

董秀娟，女，碩士研究生，主治醫(yī)師，研究方向為妊娠期糖尿病發(fā)病機制及藥物研究。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.32.001

R-332

A

1008-8849(2015)32-3535-04

2015-05-20