楊曉軍,邢瑞斌，田曉玲，楊國(guó)鋒，高艷華

(1. 河北省青龍滿(mǎn)族自治縣中醫(yī)院，河北 青龍 066500；2. 河北省青龍滿(mǎn)族自治縣醫(yī)院，河北 青龍 066500)

重癥腦梗死患者血清免疫炎性細(xì)胞因子水平變化研究

楊曉軍1,邢瑞斌1，田曉玲1，楊國(guó)鋒1，高艷華2

(1. 河北省青龍滿(mǎn)族自治縣中醫(yī)院，河北 青龍 066500；2. 河北省青龍滿(mǎn)族自治縣醫(yī)院，河北 青龍 066500)

目的分析重度腦梗死患者血清超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平與Treg/CD4+細(xì)胞、Th17/CD4+T細(xì)胞比例變化，比較Treg/CD4+細(xì)胞、Th17/CD4+T細(xì)胞比例與患者病情嚴(yán)重程度GCS評(píng)分相關(guān)性。方法選擇重度急性腦梗死患者80例， 依據(jù)入院后24 h病情嚴(yán)重程度評(píng)分(格拉斯哥昏迷評(píng)分，Glasgow Coma Scale，GCS)將患者分為重度組(30例)與特重組(50例)。酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)發(fā)病后24 h患者外周血清中hs-CRP、IL-6、TNF-α水平。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血清中Treg/CD4+細(xì)胞、Th17/CD4+T細(xì)胞比例變化，采用Pearson直線(xiàn)相關(guān)分析Treg/CD4+細(xì)胞、Th17/CD4+T細(xì)胞比例與GCS評(píng)分之間相關(guān)性。結(jié)果發(fā)病后,重度組與特重組患者h(yuǎn)s-CRP、IL-6、TNF-α水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。外周血Treg/CD4+細(xì)胞百分比、Th17/CD4+T細(xì)胞比例2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血清Th17/CD4+T細(xì)胞百分比與GCS評(píng)分呈正相關(guān)(r=5.981,P<0.05)，血清Treg/CD4+細(xì)胞百分比與GCS呈直線(xiàn)正相關(guān)(r=-4.872,P<0.05)。結(jié)論急性重癥腦梗死患者發(fā)病后體內(nèi)存在嚴(yán)重的免疫抑制炎癥反應(yīng)。主要表現(xiàn)為炎性細(xì)胞因子hs-CRP、IL-6、TNF-α水平上升以及Treg/CD4+細(xì)胞比例升高、Th17/CD4+T細(xì)胞比例下降。免疫調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、抑制性T細(xì)胞比例變化與臨床病情嚴(yán)重程度存在相關(guān)性。

重度腦梗死；CD4+；T細(xì)胞；Th17；炎性因子；Treg

急性腦梗死發(fā)生后機(jī)體可發(fā)生多種病理反應(yīng)變化，其中氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)、炎癥反應(yīng)學(xué)說(shuō)、交感興奮學(xué)說(shuō)以及免疫調(diào)節(jié)機(jī)制學(xué)說(shuō)等均從不同角度解釋梗死后缺血反應(yīng)的病理生理過(guò)程[1]。近年來(lái)，免疫炎癥反應(yīng)機(jī)制學(xué)說(shuō)在急性腦梗死病理生理過(guò)程中占有重要地位[2]。重癥腦梗死患者發(fā)病后易患各種并發(fā)癥，如卒中后相關(guān)性感染的發(fā)生率增加等。對(duì)于不同程度重度腦梗死患者，機(jī)體免疫炎性反應(yīng)程度是否存在不同，免疫指標(biāo)高低與反應(yīng)病情程度評(píng)分之間是否存在相關(guān)性，目前尚缺乏研究。本研究分析了不同程度重度腦梗死患者血清超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平與Treg/CD4+細(xì)胞、Th17/CD4+T細(xì)胞比例的變化，并進(jìn)一步比較Treg/CD4+細(xì)胞、Th17/CD4+T細(xì)胞比例與患者病情嚴(yán)重程度評(píng)分關(guān)系。

1 臨床資料

1.1研究對(duì)象 選擇重度急性腦梗死患者80例，均符合重度腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)：①腦梗死診斷符合2010年中國(guó)缺血性腦卒中和短暫性腦缺血發(fā)作二級(jí)預(yù)防指南[3]；②入組患者均經(jīng)過(guò)頭顱影像學(xué)檢查證實(shí)；③入院時(shí)格拉斯哥昏迷評(píng)分(Glasgow coma scale,GCS)<12分。病例排除標(biāo)準(zhǔn)：①急性腦梗死GCS評(píng)分≥12分者；②合并急性感染性疾病、惡性腫瘤、慢性疾病終末期、3個(gè)月內(nèi)使用免疫調(diào)節(jié)劑患者。依據(jù)入院后24 h病情嚴(yán)重程度評(píng)分(GCS)將患者分為重度組(GCS評(píng)分8～11分)與特重組(GCS評(píng)分3～7分)。 重度組30例，男18例，女12例；年齡(68.65±6.39)歲；體質(zhì)量指數(shù)(27.45±3.18)kg/m2；腦梗死危險(xiǎn)因素：高血壓22例，糖尿病13例，高血脂癥21例，房顫6例。特重組50例，男28例，女22例；年齡(69.01±5.41)歲；體質(zhì)量指數(shù)(27.45±3.18)kg/m2；腦梗死危險(xiǎn)因素：高血壓38例，糖尿病20例，高血脂癥28例，房顫9例。2組患者一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。本研究得到醫(yī)院科學(xué)研究倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有治療獲得患者或者家屬的知情同意，簽署知情同意書(shū)。

1.2檢測(cè)方法 所有患者均在發(fā)病后24 h內(nèi)抽取肘靜脈血5 mL，3 000 r/min離心沉淀，-20 ℃冰箱保存?zhèn)錂z。酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)患者外周血清中hs-CRP、IL-6、TNF-α水平，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血清中Treg/CD4+細(xì)胞、Th17/CD4+T細(xì)胞比例變化。

2 結(jié) 果

2.12組患者h(yuǎn)s-CRP、IL-6、TNF-α水平變化 發(fā)病后,重度組與特重組患者h(yuǎn)s-CRP、IL-6、TNF-α水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)，見(jiàn)表1。

2.22組患者Treg、Th17水平變化比較 重度組外周血清中Treg/CD4+細(xì)胞百分比與特重組比較明顯降低，Th17/CD4+T細(xì)胞比例明顯升高，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。血清Th17/CD4+T細(xì)胞百分比與GCS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=5.981,P<0.05)，血清Treg/CD4+細(xì)胞百分比與GCS呈直線(xiàn)負(fù)相關(guān)(r=-4.872,P<0.05)。見(jiàn)圖1及圖2。

表1 2組患者h(yuǎn)s-CRP、IL-6、TNF-α水平比較

表2 2組患者Treg、Th17水平變化比較，%)

圖1 Th17和GCS評(píng)分的相關(guān)性

圖2 Treg和GCS評(píng)分的相關(guān)性

3 討 論

急性缺血性腦損傷后血管內(nèi)皮功能紊亂，血管通透性改變，造成血腦屏障功能障礙。中心粒細(xì)胞黏附內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)毛細(xì)血管間隙遷移、轉(zhuǎn)移至壞死腦組織周?chē)奂陌准?xì)胞能夠釋放氧自由基，蛋白水解酶增加，同時(shí)聚集的炎性細(xì)胞可釋放C反應(yīng)蛋白、IL-6、腫瘤壞死因子等炎性介質(zhì)與細(xì)胞因子，循環(huán)往復(fù)，加重局部腦組織損傷。有研究證實(shí)[4-5]腦缺血發(fā)生后，缺血壞死的腦組織可觸發(fā)一系列免疫炎性反應(yīng)。近年來(lái)研究表明[6-7]免疫介導(dǎo)的炎性損傷在缺血性腦卒中發(fā)病中占有重要地位。遷移聚集的單核細(xì)胞不僅吞噬脂質(zhì)，而且將低密度脂蛋白顆粒的抗原決定簇等抗原信息通過(guò)主要組織相容性復(fù)合體遞呈T淋巴細(xì)胞，繼而激活細(xì)胞免疫系統(tǒng)，誘發(fā)CD4+T細(xì)胞增殖。CD4+T細(xì)胞分為兩個(gè)亞群：Th1與Th2細(xì)胞。Th1細(xì)胞主要分泌IL-6、TNF-α等促炎因子。Th2細(xì)胞分泌IL-10、IL-5等抑炎因子。細(xì)胞免疫炎性反應(yīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)CD4+T細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中發(fā)揮重要作用。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)是一種表達(dá)Fxop3的抑制性T細(xì)胞(Th2)亞群，可能通過(guò)介導(dǎo)抑制性炎性信號(hào)IL-10和TGF-β1來(lái)調(diào)節(jié)CD4+T細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化中的表達(dá)。

Th17是近年來(lái)研究較多的一種CD4+T細(xì)胞亞群。由于該亞群可以產(chǎn)生IL-17，因此又稱(chēng)為T(mén)h17細(xì)胞，其主要效應(yīng)分子為IL-17。Th17、Th1、Treg細(xì)胞間相互影響。Th17、Th1是主要的促炎細(xì)胞，Treg細(xì)胞具有廣泛的抑制功能，可以同時(shí)抑制Th17、Th1細(xì)胞的產(chǎn)生。效應(yīng)性T細(xì)胞亞群和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群之間的動(dòng)態(tài)平衡對(duì)于維持機(jī)體自身免疫平衡穩(wěn)定具有重要作用。任何炎性反應(yīng)的產(chǎn)生及恢復(fù)均伴隨著免疫平衡系統(tǒng)關(guān)系的破壞。近年來(lái)研究[8-9]發(fā)現(xiàn)在Th17與Th1之間存在一種漂移關(guān)系。即Th17、Th1與Treg細(xì)胞間的比例平衡關(guān)系破壞可能在急性缺血性腦卒中發(fā)病中占有重要地位，而炎性介質(zhì)的變化有可能與上述因素有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，發(fā)病后,重度組與特重組患者h(yuǎn)s-CRP,IL-6，TNF-α水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。重度組外周血清中Treg/CD4+細(xì)胞百分比與特重組比較明顯降低，Th17/CD4+T細(xì)胞比例明顯升高，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。血清Th17/CD4+T細(xì)胞百分比與GCS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=5.981,P<0.05)，血清Treg/CD4+細(xì)胞百分比與GCS呈直線(xiàn)負(fù)相關(guān)(r=-4.872,P<0.05)。表明急性重癥腦梗死患者發(fā)病后體內(nèi)存在嚴(yán)重的免疫炎癥反應(yīng)。免疫調(diào)節(jié)與抑制性T細(xì)胞比例變化與臨床病情嚴(yán)重程度存在相關(guān)性。急性腦缺血后炎性反應(yīng)是一個(gè)自限性動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。炎癥反應(yīng)的消退并不是促炎因子自然消退的過(guò)程，而可能是抑制炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)過(guò)度失衡的過(guò)程，促炎因子與抑炎因子的適度調(diào)節(jié)有助于免疫調(diào)節(jié)平衡，在腦缺血反應(yīng)中起到保護(hù)作用。

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