王成桂，李 旋，楊世平，李曉筠，史黎黎，陳兆明，孫成波

(廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廣東湛江 524088)

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6種消毒劑對養(yǎng)殖海水中細(xì)菌的殺滅效果

王成桂，李 旋，楊世平，李曉筠，史黎黎，陳兆明，孫成波*

(廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廣東湛江 524088)

[目的] 探討6種消毒劑對養(yǎng)殖海水中細(xì)菌的殺滅效果。[方法] 使用不同濃度梯度的二溴海因、聚維酮碘、福爾馬林、富氯、漂粉精和次氯酸鈉等6種消毒劑對養(yǎng)殖海水進(jìn)行處理，測定不同時間段細(xì)菌的殺滅率。[結(jié)果] 0.50～1.00 mg/L的二溴海因?qū)?xì)菌無明顯的殺滅效果；0.50～1.00 mg/L的聚維酮碘對細(xì)菌在3和6 h的殺滅率為24.50%～44.30%，其他濃度的聚維酮碘對細(xì)菌的殺滅藥效較二溴海因持久，說明聚維酮碘的殺菌效果強(qiáng)于二溴海因；僅5.00 mg/L的福爾馬林在12 h的殺滅率略高于二溴海因，相同濃度的二溴海因?qū)?xì)菌的藥效要強(qiáng)于福爾馬林；漂粉精在12 h對細(xì)菌無殺滅效果；2.50 mg/L富氯在1 h對細(xì)菌的殺滅率為99.90%，說明富氯對細(xì)菌的藥效強(qiáng)于漂粉精；各濃度的次氯酸鈉對細(xì)菌的藥效都強(qiáng)于富氯。僅5.00和10.00 mg/L聚維酮碘對細(xì)菌的殺滅效果低于相同濃度的二溴海因和福爾馬林。[結(jié)論]6種消毒劑的殺菌效果依次為福爾馬林<二溴海因<聚維酮碘<漂粉精<富氯<次氯酸鈉，而其殺滅弧菌的效果依次為聚維酮碘<福爾馬林<二溴海因<漂粉精<富氯<次氯酸鈉，含氯消毒劑殺菌效果強(qiáng)于非含氯消毒劑。

消毒劑；養(yǎng)殖海水；細(xì)菌；殺滅效果

我國是海水養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達(dá)的國家，養(yǎng)殖面積和產(chǎn)量均居世界第一，海水養(yǎng)殖為國民經(jīng)濟(jì)發(fā)展作出了重要貢獻(xiàn)。2008年，我國水產(chǎn)品總產(chǎn)量為4 895.6萬t，其中海水養(yǎng)殖產(chǎn)量1 340.3萬t，占水產(chǎn)品總產(chǎn)量的27.4%[1]。海水養(yǎng)殖業(yè)在水產(chǎn)業(yè)中占有重要地位。2009 年世界水產(chǎn)養(yǎng)殖總產(chǎn)量為7.304 5×107t，其中海水養(yǎng)殖產(chǎn)量3.920 7×107t，占世界水產(chǎn)養(yǎng)殖總產(chǎn)量的53.68%[2]。近年來，隨著環(huán)境污染和海區(qū)富營養(yǎng)化，細(xì)菌病害大量暴發(fā)[3-10]，給海水養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，因受到各種病害的影響，2013年全球養(yǎng)殖對蝦產(chǎn)量比2012年減少23%[11]。為了殺滅病菌和清除病源，在海水養(yǎng)殖業(yè)廣泛使用消毒劑，如防治對蝦發(fā)光病[12-13]、魚類細(xì)菌性疾病。各種消毒劑對細(xì)菌的藥效強(qiáng)度不同，殺滅效果明顯不同。筆者分別使用不同濃度的二溴海因、聚維酮碘、福爾馬林、富氯、漂粉精和次氯酸鈉等6種常見消毒劑對養(yǎng)殖海水進(jìn)行處理，研究6種消毒劑對養(yǎng)殖海水中細(xì)菌的殺滅效果，對指導(dǎo)生產(chǎn)有一定的實際意義。

1 材料與方法

1.1 試驗時間、地點及試驗用水試驗于2014年7月1日至8月30日在廣東海洋大學(xué)東海島海洋生物研究基地進(jìn)行。試驗用水為外海水，鹽度26‰～28‰，pH 8.0～8.2，溫度27～28 ℃，試驗用桶為300 m3大小的玻璃鋼桶。

1.2 試驗設(shè)計用二溴海因、聚維酮碘、福爾馬林、富氯、漂粉精和次氯酸鈉6種常見的消毒劑分別按不同的濃度分批次處理試驗海水，每個濃度設(shè)置3個平行組。其中3種含氯消毒劑的使用濃度按有效氯計算，有效氯的測定采用藍(lán)墨水滴定法[14]。二溴海因和聚維酮碘試驗使用濃度分別為0.50、1.00、3.00、5.00、10.00 mg/L；福爾馬林試驗使用濃度為3.00、5.00、10.00、20.00、50.00 mg/L；富氯試驗使用濃度為0.125、0.25、0.75、1.25、2.50 mg/L；漂粉精試驗使用濃度為0.50、1.50、2.50、50、10.00 mg/L；次氯酸鈉試驗使用濃度為1.00、3.00、5.00、10.00 mg/L；前3種消毒劑的試驗時間梯度分別為3、6和12 h，富氯的試驗時間梯度分別為1、3和6 h，漂粉精和次氯酸鈉的試驗時間梯度為1、6和12 h。

1.3 細(xì)菌數(shù)量的測定測定試驗海水中異養(yǎng)細(xì)菌總數(shù)和弧菌總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)的測定利用常規(guī)稀釋培養(yǎng)法，弧菌總數(shù)的測定采用選擇性培養(yǎng)法，異養(yǎng)細(xì)菌和弧菌分別用2216E、TCBS培養(yǎng)基培養(yǎng)，儀器用廣東省醫(yī)療器械廠生產(chǎn)的生化培養(yǎng)箱[5-6]，24 h后計算菌落數(shù)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 二溴海因?qū)?xì)菌的殺滅效果由表1可知，二溴海因濃度在0.50和1.00 mg/L范圍時不能殺滅細(xì)菌，對細(xì)菌的殺滅率為0；當(dāng)二溴海因濃度為3.00 mg/L時，3 h后對細(xì)菌有49.30%的殺滅效果，然后下降，12 h后無殺滅效果；當(dāng)二溴海因濃度為5.00和10.00 mg/L時，對細(xì)菌有殺滅效果，6 h藥效最強(qiáng)，最高可殺滅70.10%的細(xì)菌，12 h有反彈現(xiàn)象，殺滅率下降。用藥濃度在0.50、1.00和3.00 mg/L范圍時能有效殺滅弧菌，6 h藥效最強(qiáng)，達(dá)到100%，12 h有輕微反彈；當(dāng)二溴海因濃度5.00 mg/L時，3、6 h藥效較強(qiáng)，對弧菌的殺滅率達(dá)100%，12 h有輕微反彈；當(dāng)二溴海因濃度10.00 mg/L時，3～12 h對弧菌的殺滅率達(dá)100%。

表1 不同濃度二溴海因?qū)?xì)菌的殺滅效果

2.2 聚維酮碘對細(xì)菌的殺滅效果由表2可知，當(dāng)聚維酮碘濃度在0.50和1.00 mg/L時，聚維酮碘對細(xì)菌的殺滅率3、6 h內(nèi)最高為44.30%，12 h無殺滅效果；當(dāng)聚維酮碘濃度為3.00、5.00和10.00 mg/L時，聚維酮碘對細(xì)菌的殺滅率在3～6 h內(nèi)最高為68.20%，3 h藥效最強(qiáng)，6、12 h有反彈現(xiàn)象，殺滅率下降。當(dāng)聚維酮碘濃度為0.50 mg/L時，聚維酮碘對弧菌無殺滅效果；當(dāng)聚維酮碘濃度為1.00 mg/L時，3、6 h無殺滅效果，12 h殺滅率為11.10%；當(dāng)聚維酮碘濃度為3.00和5.00 mg/L時，12 h藥效最佳，最高殺滅率為44.40%；當(dāng)聚維酮碘濃度為10.00 mg/L時，6 h藥效最佳，殺滅率為52.80%；12 h殺滅率下降，為44.40%。

2.3 福爾馬林對細(xì)菌的殺滅效果由表3可知，當(dāng)福爾馬林濃度在3.00和10.00 mg/L時，福爾馬林對細(xì)菌的殺滅效果隨用藥時間的延長而增強(qiáng)，殺滅率在12 h時最大，為40.40%；當(dāng)福爾馬林濃度為20.00和10.00 mg/L時，3 h藥效最強(qiáng)，隨后下降。用藥濃度在3.00、5.00、10.00和20.00 mg/L時，福爾馬林對弧菌的藥效在6 h最強(qiáng)，最大達(dá)100%，12 h有輕微反彈；當(dāng)福爾馬林濃度為50.00 mg/L時，3 h殺滅率達(dá)100%，至12 h沒反彈。

表2 不同濃度聚維酮碘對細(xì)菌的殺滅效果

表3 不同濃度福爾馬林對細(xì)菌的殺滅效果

2.4 富氯對細(xì)菌的殺滅效果由表4可知，當(dāng)富氯濃度在0.125 mg/L時，富氯對細(xì)菌的殺滅效果在3 h時最佳，6 h反彈明顯，無效果；當(dāng)富氯濃度為0.25和0.75 mg/L時，1 h藥效最佳，隨后下降，在6 h無效果，殺滅率為0；當(dāng)富氯濃度1.25和2.50 mg/L時，1 h時藥效最佳，隨后下降，在6 h下降更為明顯。當(dāng)富氯濃度為0.125和0.25 mg/L時，富氯對弧菌的藥效在3 h時最佳，殺滅率最高(91.60%)；當(dāng)富氯濃度為0.75、1.25和2.50 mg/L時，1 h、3 h的殺滅率均為100%，6 h反彈明顯，殺滅率下降。

2.5 漂粉精對細(xì)菌的殺滅效果由表5可知，各濃度的漂粉精對細(xì)菌的藥效在1 h時最佳，殺滅率最高(99.90%)，6 h下降，12 h明顯反彈，殺滅率均為0。各濃度的漂粉精對弧菌的藥效在1 h最佳，當(dāng)漂粉精濃度在2.5 mg/L及以上1 h時可達(dá)100%，6 h輕微下降，12 h下降明顯。

表4 不同濃度富氯對細(xì)菌的殺滅效果

表5 不同濃度漂粉精對細(xì)菌的殺滅效果

2.6 次氯酸鈉對細(xì)菌的殺滅效果由表6可知，次氯酸鈉濃度為1.00 mg/L時，次氯酸鈉對細(xì)菌的藥效在6 h時最強(qiáng)，殺滅率為49.10%；當(dāng)次氯酸鈉濃度為3.00和5.00 mg/L時，次氯酸鈉對細(xì)菌的藥效在1 h時最強(qiáng)，殺滅率最大為99.70%，在12 h時最差；當(dāng)次氯酸鈉濃度為10.00 mg/L時，6 h藥效最強(qiáng)，殺滅率為99.90%。當(dāng)次氯酸鈉濃度在1.00、3.00和5.00 mg/L時，在1 h時藥效最強(qiáng)，都為100%，此后下降；當(dāng)次氯酸鈉濃度為10.00 mg/L時，1～12 h殺滅率為100%，沒有反彈現(xiàn)象。

3 討論

表6 不同濃度次氯酸鈉對細(xì)菌的殺滅效果

0.50～1.00 mg/L二溴海因?qū)?xì)菌無明顯的殺滅效果，殺滅率為0；0.50～1.00 mg/L的聚維酮碘對細(xì)菌在3、6 h的殺滅率最低為24.50%，最高為44.30%，有部分殺滅效果，其他濃度組的聚維酮碘對細(xì)菌的殺滅藥效較二溴海因持久，聚維酮碘的殺菌效果強(qiáng)于二溴海因；5.00和10.00 mg/L的福爾馬林在3個時間段中僅5.00 mg/L濃度在12 h的殺滅率略高于二溴海因，其他5個時間段均低于二溴海因，相同濃度的二溴海因?qū)?xì)菌的藥效要強(qiáng)于福爾馬林；富氯的主要成分為三氯異氰尿酸鈉，漂粉精的主要成分為次氯酸鈣，漂粉精在12 h時對細(xì)菌殺滅無效果，其他濃度在12 h亦無明顯藥效，2.50 mg/L富氯在1 h時對細(xì)菌的殺滅率為99.90%，高于漂粉精，說明富氯對細(xì)菌的藥效強(qiáng)于漂粉精；次氯酸鈉在各濃度組對細(xì)菌的藥效強(qiáng)于富氯。對弧菌的殺滅效果分析發(fā)現(xiàn)，僅5.00和10.00 mg/L聚維酮碘的效果低于相同濃度的二溴海因和福爾馬林，其他消毒劑對弧菌的殺滅效果與對細(xì)菌的殺滅效果強(qiáng)度次序相同。綜合分析，6種消毒劑殺滅細(xì)菌的效果依次為福爾馬林<二溴海因<聚維酮碘<漂粉精<富氯<次氯酸鈉，殺滅弧菌的效果依次為聚維酮碘<福爾馬林<二溴海因<漂粉精<富氯<次氯酸鈉，含氯消毒劑殺菌效果強(qiáng)于非含氯消毒劑。

海水養(yǎng)殖對細(xì)菌病的預(yù)防是關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，定期消毒是主要措施，消毒劑的使用在殺滅病害細(xì)菌的同時，亦帶來各種影響。氯溴等鹵素與水中的碳?xì)溆袡C(jī)化合物形成三鹵甲烷等多種鹵代有機(jī)物，對人體和飼養(yǎng)動物具致癌、致突變誘發(fā)作用[15]。目前，各消毒劑所存在的最主要問題是毒性和殘留對水產(chǎn)動物、人類以及環(huán)境的損害，不符合健康養(yǎng)殖規(guī)范要求。如果消毒劑克服了以上弊端，在水產(chǎn)動物的病害防治上仍有著廣闊的前景。采用其他方式替代消毒劑預(yù)防細(xì)菌性疾病，水產(chǎn)用無公害制劑開發(fā)和使用不妨為一種有效方法。目前運(yùn)用較多的是各種微生態(tài)制劑的使用，如在海水養(yǎng)殖池塘投放光合細(xì)菌、芽孢類等微生微制劑，形成一定的優(yōu)勢有益種群，以抑制各類有害病菌的生長繁殖[16-17]。

[1] 陳雨生，房瑞景，喬娟，等.中國海水養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展研究[J].農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)問題，2012(6)：72-77.

[2] 楊宇峰，王慶，聶湘平，等.海水養(yǎng)殖發(fā)展與漁業(yè)環(huán)境管理研究進(jìn)展[J].暨南大學(xué)學(xué)報，2012，33(5)：531-541.

[3] 徐曉津，王軍.我國養(yǎng)殖對蝦細(xì)菌性疾病[J].河北漁業(yè)，2001(3)：22-41.

[4] 蔡生力，黃倢，王崇明，等.1993-1994對蝦暴發(fā)病的流行病學(xué)研究．水產(chǎn)學(xué)報，1995，19(2)：112-119．

[5] 胡超群．廣東沿海養(yǎng)殖對蝦疾病流行特點及病因[J]．海洋科學(xué)，1994(6)：9-10．

[6] 蘇永全，蔡心一，王軍．1992-1993年福建南部地區(qū)蝦病的調(diào)研[J]．海洋科學(xué)，1995(1)：1-4．

[7] LIGHTNER D V，POULOS B T，BRUCE L，et al.New development in penaeid virology：Application of biotechnology in research and disease diagnosis for shrimp viruses of concern in the American[M]//FULKS W，MAIN K L.Diseases of cultured penaeid shrimp in Asia and the united states.The Oceanic Institute，1992：233-253.

[8] 何建國，翁少萍，鄧敏，等.斑節(jié)對蝦白斑病病原與病理[J].中山大學(xué)學(xué)報論叢，1996(S1)：12-15.

[9] 何建國.對蝦白斑綜合癥病毒爆發(fā)流行與傳播途徑，氣候和水體理化因子的關(guān)系及其控制措施[J].中國水產(chǎn)，1999(7)：34-41.

[10] 孫成波，黎子蘭，何建國．沙濾對白斑綜合癥病毒和細(xì)菌的過濾效果[J]．中山大學(xué)學(xué)報，2004，43(4)：70-73.

[11] 國家蝦產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系等.對蝦肝胰腺壞死癥和白斑綜合癥防控技術(shù)手冊[Z].2014：1-16.

[12] 劉建勇，梁飛龍.斑節(jié)對蝦仔蝦發(fā)光病治療方法的初步研究[J].水產(chǎn)養(yǎng)殖，1999(3)：20-22.

[13] 馮永勒，許志堅，曾令明.對蝦育苗病害綜合防治及效果[J].科學(xué)養(yǎng)魚，1993(3)：21-22.

[14] 徐國成.次氯酸鹽有效氯、余氯及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的測定[J].北京水產(chǎn)，2007(4)：18-20.

[15] 謝文平，朱新平，鄭光明，等.廣東羅非魚養(yǎng)殖區(qū)水體及魚體中多環(huán)芳烴的含量與健康風(fēng)險[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報，2014，33(12)：2450-2456.

[16] 沈錦玉，尹文林，劉問，等.光合細(xì)菌HZPSB對水產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)的改良和對魚類促生長作用[J].科技通報，2004，20(6)：481-484.

[17] 付保榮，曹向宇，冷陽，等.光合細(xì)菌對水產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)和水生生物的影響[J].生態(tài)科學(xué)，2008，27(2)：102-106.

Study on the Killing Effect of Six kinds of Disinfectants on Bacteria in Aquaculture Seawater

WANG Cheng-gui, LI Xuan, YANG Shi-ping, SUN Cheng-bo*et al (College of Fisheries, Guangdong Ocean University, Zhanjiang, Guangdong 524088)

[Objective] The aim was to study the killing effect of six kinds of disinfectants on bacteria in aquaculture seawater. [Method] The auquculture seawater was disinfected with different concentration gradients of DBDMH, povidone iodine, formaldehyde, chlorine, calcium hypochlorite, sodium hypochlorite. The killing rate on bacteria was determined at different time. [Result] DBDMH at 0.50-1.00 mg/L had no obvious killing effects. The killing rate of povidone iodine at 0.50-1.00 mg/L on bacteria after 3 and 6 hours was 24.50%-44.30% and the killing efficiency of povidone iodine at other concentrations on bacteria was more permanent than that of DBDMH, which indicated that the bactericidal effects of povidone iodine were stronger than that of DBDMH. Only the killing rate of 5.00 mg/L formaldehyde after 12 h was slightly higher than that of DBDMH, the killing efficiency of DBDMH at the same concentration was stronger than that of formaldehyde. Calcium hypochlorite had no killing effect on bacteria after 12 h. The killing rate of 2.50 mg/L chlorine on bacteria after 1 h was 99.90%, which indicated that the killing efficiency of chlorine was stronger than that of calcium hypochlorite. The killing efficiency of sodium hypochlorite at different concentrations on bacteria was stronger than that of chlorine. Only the killing efficiency of povidone iodine at 5.00 and 10.00 mg/L on bacteria was worse than that of DBDMH and formaldehyde at the same concentrations. [Conclusion] The bactericidal effects of six kinds of disinfectants was formaldehyde < DBDMH < povidone iodine < calcium hypochlorite < chlorine < sodium hypochlorite. The killing effects of six kinds of disinfectants on vibrio was povidone iodine < formaldehyde < DBDMH < calcium hypochlorite < chlorine < sodium hypochlorite. The bactericidal effects of chlorine-containing disinfectants were stronger than that of non-chlorine disinfectants.

Disinfectant；Aquaculture seawater；Bacteria；Killing effects

廣東省科技計劃項目(2013B020201001)；廣東省海洋漁業(yè)科技推廣專項(A201301D02)。

王成桂(1978-)，男，湖南衡陽人，助理研究員，從事海產(chǎn)動物增養(yǎng)殖研究。*通訊作者，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事對蝦養(yǎng)殖和病害防治研究。

2015-04-15

S 949

A

0517-6611(2015)16-152-03