李駿飛 李清林

中醫(yī)是我國最具代表性的傳統(tǒng)醫(yī)學，起源于中國古代樸素唯物主義，理論體系獨特完整，治療手段豐富多樣，且數(shù)千年間積累了大量臨床案例，為人類的健康生存作出了極大的貢獻，是我國一直大力推廣和發(fā)展的特色醫(yī)學。然而進入21世紀以來，療效穩(wěn)定問題持續(xù)困擾著現(xiàn)代中醫(yī)學的進步與發(fā)展，降低了它的影響力，阻礙國際社會對它更廣泛的認可。

中醫(yī)的療效穩(wěn)定問題與中藥質(zhì)量息息相關，而反映中藥質(zhì)量的關鍵是藥效物質(zhì)基礎。目前，由于多數(shù)單味及復方中藥的藥效物質(zhì)基礎尚未被闡明，相關研究大多還停留在化學方法分步提取、體外實驗逐個驗證的狀態(tài)[1]。因此，現(xiàn)行中藥質(zhì)量控制指標采用的“有效成分”，或稱為“指標成分”，更多是指中藥中含量較大或具有一定藥理作用的成分，但多數(shù)學者認為這些“指標成分”并不能與真正意義上的中藥“有效成分”或藥效物質(zhì)基礎劃等號。地理環(huán)境、品種、加工方法等因素的變化均會導致中藥中各“指標成分”的含量存在較大差異，部分中藥的指標成分甚至與藥效完全無關[2]。這使得現(xiàn)行的中藥質(zhì)量控制指標及方法并不能準確反映其質(zhì)量，從而影響了治療效果的穩(wěn)定性。

1 中藥血清藥物化學與中藥質(zhì)量控制

“血清藥物化學”最早是由日本科學家田代真一[3-4]提出的，原理為口服給藥后藥物成分無論直接吸收還是經(jīng)代謝分解成活性或次級代謝物，其藥效物質(zhì)最終均會進入血液，并以血液為介質(zhì)輸送到靶點，因此只有進入血液的成分才可能是藥效物質(zhì)。此后，我國學者王喜軍[5]將該理論完善并成功應用于中藥研究，如王喜軍[6]通過“血清藥物化學”研究發(fā)現(xiàn)越桔入血成分為熊果苷和秦皮苷，并進一步提出了“中藥血清藥物化學”的概念，即中藥血清藥物化學是以藥物化學方法為基礎，以人或動物口服給藥后的血清為樣品，應用現(xiàn)代分離技術(shù)及多位聯(lián)用技術(shù)，分離、鑒定血清中的移行成分，研究血清中移行成分與傳統(tǒng)療效的相關性，闡明體內(nèi)藥效物質(zhì)基礎及體內(nèi)動態(tài)的應用科學[7]。我國學者們已利用“中藥血清藥物化學”技術(shù)對多種中藥進行研究，包括單味藥：金銀花、葒草、羅漢果、梔子、雷公藤、纈草、補骨脂等；復方藥：酸棗仁湯、巴桑母酥油丸、銀翹散、地黃飲子及生脈散等[8-19]。經(jīng)過大量研究，學者們對“中藥血清藥物化學”的應用有了更全面的認識，王喜軍[6]學者及其他教授均提出“中藥血清藥物化學”對準確控制中藥質(zhì)量有重要意義。

“中藥血清藥物化學”跳過了中藥在體內(nèi)復雜的代謝過程，將研究目標直接定為入血成分。由于只有進入血液的物質(zhì)才可能成為藥效物質(zhì)，該方法不僅排除了對象中藥中大量無用成分的干擾，降低了研究難度，而且也鎖定了可能構(gòu)成該中藥藥效物質(zhì)基礎的絕大部分成分，包括直接吸收入血的原型成分及經(jīng)各種酶或肝臟代謝后產(chǎn)生活性的次級代謝產(chǎn)物，它們是反映中藥質(zhì)量的關鍵因素。而據(jù)此發(fā)現(xiàn)并確定的“指標成分”是確實被人體吸收并發(fā)揮藥效作用的，能更準確地反映該中藥質(zhì)量。如霍世霞等[20]利用“中藥血清藥物化學”建立了高良姜的含藥血清HPLC指紋圖譜，并確定了高良姜的入血成分為高良姜素。孫健等[21]測定了苦參中12個移行入血的生物堿成分，其中7個為原型成分，并發(fā)現(xiàn)由于結(jié)構(gòu)相似存在競爭作用，具有相似藥理活性同類型成分間吸收入血速度及程度存在差異，為苦參質(zhì)量控制指標的建立縮小了研究范圍，提供實驗基礎。

2 應用舉例

2.1 當歸 王亞麗等[22]學者建立了用HPLC-DADMS方法分析當歸乙醇提取物及其在灌胃兔子后血液中成分的分析方法，證實共有31種成分自藥物移行入血液，且共鑒定出其中的10種成分及其結(jié)構(gòu)，包括：阿魏酸、藁本內(nèi)酯二聚物及藁本內(nèi)酯等。隨后，通過比較進入血液前后各組分的相對含量變化，對血液中各移行成分的生物活性進行判斷，發(fā)現(xiàn)藁本內(nèi)酯及藁本內(nèi)酯二聚物具有較高的生物活性。因此，王亞麗等[22]認為目前只以阿魏酸一種“指標成分”并不足以控制當歸質(zhì)量。

2.2 地黃 王慧森等[23]研究地黃原型移行入血成分，建立了用HPLC法測定鮮地黃中梓醇、地黃苷D、益母草苷等3種成分含量的方法，并對12批次河南焦作產(chǎn)懷藥鮮地黃中此3種成分的含量進行了檢測。結(jié)果表明12批次鮮地黃中3種成分，梓醇含量最高15.87%，最低6.15%，地黃苷D含量最高3.30%，最低1.50%，益母草苷含量最高6.08%，最低2.38%，總含量最高20.28%，最低11.32%。根據(jù)結(jié)果，王慧森等[23]認為質(zhì)量合格的鮮地黃其提取物含梓醇不得<8%，地黃苷D不得<1.7%，益母草苷不得<2.8%，3者總含量不得<15%。

2.3 白術(shù)及其復方 王喜軍等[5，24]研究發(fā)現(xiàn)，作為白術(shù)質(zhì)量評價指標的蒼術(shù)酮及蒼術(shù)內(nèi)酯在白術(shù)口服后并未被吸收，而只有TEDYA水解成TEDY后移行入血，進一步研究表明TEDY具有與白術(shù)相關的藥理活性，表明TEDY是白術(shù)作用于體內(nèi)的有效成分，因此，蒼術(shù)酮及蒼術(shù)內(nèi)酯含量的多寡與白術(shù)質(zhì)量的優(yōu)劣無關，而TEDY的前提TEDYA的含量應成為評價白術(shù)質(zhì)量的重要指標。王喜軍等[5，24]還發(fā)現(xiàn)，TEDYA還可以作為含白術(shù)復方甘草附子湯的質(zhì)量控制指標。

曹藝等[25]對歸苓片進行檢測，鑒定出血液中移行成分包括白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ等白術(shù)原型成分而沒有檢測到當歸、茯苓中的成分，且白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ及白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ在單味白術(shù)血清中基本檢測不到，而白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ含量亦大幅降低。因此三種內(nèi)酯類成分含量可能成為控制該復方藥質(zhì)量的重要評價指標。

2.4 延胡索 程星燁等[26]利用LC-MS/MS對口服延胡索活性部位后的大鼠血中移行成分進行研究，鑒定出其中九種成分，其中3-Methyl-dehydrocorydalmine移行入血含量比原藥中明顯提高，具有較高的生物活性。已被鑒定的九種成分均可作為控制延胡索質(zhì)量的潛在“指標成分”而被進一步研究，尤其體內(nèi)活性較高的3-Methyl-dehydrocorydalmine。

2.5 枳術(shù)丸 王喜軍等[27]通過HPLC法測定了枳術(shù)丸口服后大鼠血液中的化學成分，發(fā)現(xiàn)枳術(shù)丸移行入血的原型成分6個，代謝成分7個，認定柚皮苷、橙皮苷及新陳皮苷為枳術(shù)丸在體內(nèi)的有效成分。并根據(jù)研究結(jié)果，建立了測定血液中柚皮苷、橙皮苷含量的方法用于控制枳術(shù)丸質(zhì)量。

2.6 茵陳蒿及茵陳蒿湯 王喜軍等[28]利用HPLC及UPLC-UV-Q-TOF/MS技術(shù)對茵陳蒿及其復方制劑茵陳蒿湯進行了系統(tǒng)性的血清藥物化學研究。研究表明，盡管茵陳蒿中含有的Caparisine及6，7-DME兩種成分均具有極顯著的促膽汁分泌作用，且前者效果更顯著，但是在口服茵陳蒿后只有6，7-DME移行入血，Caparisine卻未被吸收。之后，對于茵陳蒿湯的研究發(fā)現(xiàn)全方移行入血的成分有21個，但只有8個成分在全方配伍時才出現(xiàn)，這8個成分與茵陳蒿湯的作用均具有相關性，其中的主要成分仍是6，7-DME。因此提出應將6，7-DME作為控制茵陳蒿及茵陳蒿湯質(zhì)量的“指標成分”。

2.7 當歸芍藥散 Chen等[29]對當歸芍藥散給藥后的大鼠血液成分進行研究，共鑒定出7個復方原型成分及1個代謝后成分移行入血，并認為當歸芍藥散在體內(nèi)發(fā)揮藥效作用的成分包括：芍藥苷磺酸鹽、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、阿魏酸、川芎內(nèi)酯Ⅰ、藳本內(nèi)酯和丁烯酜內(nèi)酯等，這些成分可能成為評價當歸芍藥散質(zhì)量的“指標成分”。

此外，還有復方安替威膠囊及養(yǎng)血清腦顆粒等復方中藥[30-31]，亦有學者應用“中藥血清藥物化學”進行了質(zhì)量控制研究。

3 展望

3.1 血液微透析 血液微透析是一種微透析技術(shù)與“血清藥物化學”聯(lián)用的檢測技術(shù)。微透析技術(shù)是將透析與灌流取樣技術(shù)結(jié)合的一種可對體內(nèi)物質(zhì)進行動態(tài)微量取樣分析的新技術(shù)，具有活體連續(xù)取樣、實時監(jiān)測、定量分析、采樣量小及微創(chuàng)等特點，將微透析技術(shù)用于血樣的采集分析能順利解決傳統(tǒng)“血清藥物化學”研究時所產(chǎn)生的諸多問題，如個體化差異、取血時間及方法的合理確定等?，F(xiàn)階段，已有部分學者將血液微透析技術(shù)應用于藥物研究，如Hou等[32]。血液微透析技術(shù)必將成為未來“中藥血清藥物化學”研究的核心技術(shù)之一。

3.2 中藥質(zhì)量評價的“模糊化”和“整體化” 越來越多的研究者提出中藥的質(zhì)量控制研究不應僅限于某一或某幾個“指標成分”的研究，而忽略了中藥的整體性，“模糊化”和“整體化”的質(zhì)量評價指標能更準確地反映中藥質(zhì)量[33]。如Tilton等[34]學者利用HPLC-MS和基因芯片技術(shù)，繪制指紋圖譜，標定與藥效作用相關的基因，通過對多批次藥材樣品測量數(shù)據(jù)的模糊聚類分析，建立了一種以黃芩湯“整體”成分和藥效為指標的質(zhì)量評價方法?！爸兴幯逅幬锘瘜W”不僅能排除中藥中大量無用成分的干擾，闡明藥效物質(zhì)基礎，還能反映藥物成分在體內(nèi)的生物活性程度，為中藥“整體”成分及藥效作為指標的質(zhì)量控制研究提供切實可行的依據(jù)及方法，尤其適用于復方中藥，如劉學偉等[35]使用UPLC-TOF-MS技術(shù)建立開心散血清指紋圖譜，并鑒定了41個入血成分，其中13個為代謝成分，28個為原型成分，為采用模糊聚類分析法建立“整體化”的質(zhì)量控制方法提供實驗基礎。

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