楊炳林 肖 堅 陳文新 王合兵 李永林 蘇衛(wèi)國

CD90在增生性瘢痕中的表達及其生物學作用研究

楊炳林 肖 堅 陳文新 王合兵 李永林 蘇衛(wèi)國

目的 探討CD90在增生性瘢痕的形成過程中所起的生物學作用。方法 20例帶有正常皮膚組織的瘢痕為手術切除后的標本，經(jīng)過嚴格固定、石蠟包埋、組織切片、HE染色后，分為增生性瘢痕組(A組)、瘢痕交界處組(B組)及正常皮膚組(C組)，每組20例。從每例標本中選取1個典型部分進行采樣，構(gòu)建包括60個典型組織標本的芯片蠟塊，從該蠟塊中切取1張切片，免疫組化染色,檢測CD90在A、B、C組中的表達水平，將所得結(jié)果進行統(tǒng)計分析。結(jié)果 CD90的陽性表達在A組與B組中均較高，兩組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而在C組中陽性表達較低，與上述兩組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結(jié)論 在增生性瘢痕中，CD90陽性表達的成纖維細胞與瘢痕異常增生存在相關性。

增生性瘢痕；CD90；免疫組化

增生性瘢痕是因創(chuàng)傷后膠原纖維等細胞外基質(zhì)過度生長、無序沉積所致。CD90作為粘附分子家族成員，在成纖維細胞的粘附、凋亡、細胞增殖等方面通過信號傳導發(fā)揮作用,與創(chuàng)面愈合和纖維化疾病關系密切［1］。本實驗應用免疫組化結(jié)合組織芯片技術方法，檢測成纖維細胞CD90在增生性瘢痕、瘢痕交界處、周圍正常皮膚組織中的陽性表達情況，為增生性瘢痕的臨床防治提供新的思路和實驗依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 20例標本均來自本院外科手術切除的瘢痕組織，用福爾馬林溶液進行嚴格固定，然后常規(guī)石蠟包埋,切片經(jīng)過HE染色檢測證實臨床診斷后，分為正常皮膚組、瘢痕交界處組、增生性瘢痕組，每組20例。所選標本都符合以下實驗標準［2］：①病變未超過損傷范圍；②病程中瘢痕組織具有持續(xù)性生長、表面發(fā)紅、疼痛及瘙癢等臨床癥狀；③未經(jīng)過口服激素藥物、冷凍、激光等非手術治療；④供者無遺傳性疾病及全身系統(tǒng)性疾病。

1.2 試劑來源及染色方法 鼠抗人CD90單克隆抗體、SP通用型免疫組化試劑盒(武漢博士德生物工程公司)。將新鮮的組織標本用10%中性甲醛固定，制成3 μm厚度石蠟切片后HE染色。根據(jù)染色結(jié)果，通過觀察組織標本中成纖維細胞的分布特征及膠原含量情況，進行實驗分組。分成增生性瘢痕組(A組)、瘢痕交界處組(B組)、正常皮膚組(C組)。選取三組組織蠟塊的標本，根據(jù)標本HE切片染色及形態(tài)學觀察結(jié)果確定其典型病變部位，從每例標本中選取1個典型部分進行采樣，構(gòu)建包括60個典型組織標本的芯片蠟塊，陣列均為10×6。將組織芯片蠟塊切片，制成3 μm厚度。

1.3 觀察方法 通過觀察組織切片中成纖維細胞CD90的表達情況，CD90以細胞膜及胞漿內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，由兩名高年資病理科醫(yī)師在光學顯微鏡下觀察并照相，評估其免疫組化結(jié)果。

1.4 評分標準 在400倍光鏡下隨機觀察5個視野，每張切片由2名觀察者雙盲交換判斷，采用半定量記分法，根據(jù)細胞膜或細胞漿的染色強度及染色細胞百分比進行綜合評分［3］。陽性細胞數(shù)評分標準：＞50%為3分；26%～50%為2分；≤25%為1分；無細胞染色記為0分，染色強度評分：3分為棕褐色；2分為棕黃色；1分為淺黃色；0分為無色。結(jié)合每張切片染色程度和陽性細胞數(shù)百分比進行綜合評分，兩者相加為其最后得分：判定0～2分為陰性，3～6分為陽性。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

20例標本中，A組有13例可以觀測到有少量CD90陽性表達的成纖維細胞分布在管周，真皮中CD90陽性表達的成纖維細胞相對較多，且體積肥大，C組中CD90陽性表達的成纖維細胞相對較少，且體積也較小。B組中CD90的陽性表達(50.00%)介于A組(61.11%)與C組(16.67%)之間。A組與B組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，A組與C組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

3 討論

CD90是最小的免疫球蛋白超家族成員，一般都貼附在細胞膜的胞漿面，它作為一種細胞的粘附結(jié)構(gòu)，是細胞與細胞之間，細胞和細胞外基質(zhì)之間相互作用的重要調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)［1］。本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)成纖維細胞CD90陽性的表達情況，在A組中表達最高，而在B組及其C組中表達量依次遞減，這說明CD90在增生性瘢痕成纖維細胞中表達明顯，而且與瘢痕形成密切相關。

為了減少實驗誤差，本實驗中作者采用組織芯片技術檢測成纖維細胞CD90的陽性表達情況，發(fā)現(xiàn)成纖維細胞CD90在A組與B組中的陽性表達均較高，兩組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而在C組的陽性表達較低，其與上述兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。這些都提示成纖維細胞CD90在增生性瘢痕中的確存在異常表達，推測CD90可能是增生性瘢痕成纖維細胞的特異標記，它在瘢痕異常增生過程中起作用,如能針對CD90進行干預和調(diào)控，有望在增生性瘢痕的防治中發(fā)揮積極的作用。

［1］ Hagood JS，Prabhakaran P，Kumbla P，et al.Loss of fibroblast Thy-1 expression correlates with lung fibrogenesis.Am J Pathol，2005，167(2):365-379.

［2］ 李薈元，魯開花，郭樹忠.新編瘢痕學.西安:第四軍醫(yī)大學出版社，2003:9-25.

［3］ Mattern J，Koomagi R，Volm K.Association of vascular endothelial growth factor expression with intratumoral microvessel density and tumour cell proliferation in human epidermoid lung cancer.Br J Cancer，1996，73(7):931-934.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.29.018

2015-04-29］

000000 福建醫(yī)科大學附屬三明第一醫(yī)院乳腺外科(楊炳林 肖堅 陳文新 王合兵)；鄭州市第一人民醫(yī)院整形外科(李永林 蘇衛(wèi)國)