吳寶軍

核酸檢測與酶聯(lián)免疫檢測血液病毒的對比分析

吳寶軍

目的探究對血液病毒采用核酸檢測和酶聯(lián)免疫檢測的方法以及準(zhǔn)確率。方法住院的18637例患者進(jìn)行檢測分析， 包括HCVAb、HBsAg、HIVAb和二次酶聯(lián)免疫法的篩查， 并對陰性和陽性血樣進(jìn)行核酸檢測， 觀察兩種檢測方法的檢查結(jié)果， 對比檢測的準(zhǔn)確性。結(jié)果酶聯(lián)免疫法中103個樣本出現(xiàn)檢測失誤， 漏（誤）檢率為0.6%， 而核酸檢驗沒有出現(xiàn)漏檢或者誤檢現(xiàn)象， 檢測準(zhǔn)確率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論對住院患者采用核酸檢測的方法檢測血液病毒， 靈敏度較高， 減少并避免漏檢。

血液病毒；核酸檢測；酶聯(lián)免疫檢測

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年2月～2014年3月本院住院的18637例患者進(jìn)行檢測分析， 其中192例血液標(biāo)本有梅毒或者轉(zhuǎn)氨酶的檢測不合格。對18216份血液標(biāo)本進(jìn)行病毒檢測，每個標(biāo)本在采血后使用5 ml和7 ml的真空抗凝管進(jìn)行留樣，放置在2～8℃的冰箱中保存， 對7 ml真空抗凝管的血樣在24 h內(nèi)需要分離血漿， 進(jìn)行酶聯(lián)免疫法的血液篩查， 對5 ml的真空管血氧在3 h內(nèi)進(jìn)行血漿分離， 給予核酸檢測。

1.2 方法

1.2.1 酶聯(lián)免疫法 將18216份7 ml真空抗凝管進(jìn)行室溫離心， 將血漿成功分離， 并選擇安圖e-Lisa全自動加樣儀進(jìn)行自動加樣， 并采用Uranus AE的全自動酶免分析儀， 檢驗人員要仔細(xì)記錄檢測結(jié)果。

1.2.2 核酸檢測法 把5 ml的真空抗凝管的血樣進(jìn)行20 min的室溫離心， 并將其放置在2～8℃的冰箱中， 當(dāng)血液樣品在血常規(guī)檢查合格后， 將其放置在加樣儀樣品的條架上， 采用一級分配試劑的程序， 將100 μl的A、B洗液以及100 μl的洗脫液， 加入到B號96孔深孔板中， 把50 μl的磁珠和600 μl的結(jié)合液加入到A號96孔深孔板中。并對樣品進(jìn)行裂解， 同時避免標(biāo)本污染。當(dāng)完成裂解后， 要采用三級核酸的提取程序，并采用核酸提取儀經(jīng)過B號的96孔深孔板以及A號的96孔深孔板來提取核酸， 并配置擴增核酸的反應(yīng)液。針對標(biāo)本量采用四級核酸的擴增程序?qū)⑻崛『蠛怂岬慕Y(jié)合液混入到八聯(lián)管中， 并將八聯(lián)管放置在PCR儀中擴增， 并記錄結(jié)果， 對陽性匯集孔的標(biāo)本挑出來， 進(jìn)行相應(yīng)的拆分實驗， 確定陽性標(biāo)本。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS14.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

對18216份血液標(biāo)本進(jìn)行病毒檢測， 酶聯(lián)免疫法在檢測過程中， 有103例血樣檢測為HBV DNA陽性， 出現(xiàn)檢測失誤，漏（誤）檢率為0.6%， 而核酸檢驗中， 沒有出現(xiàn)漏檢或者誤檢現(xiàn)象， 檢測準(zhǔn)確率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

有很多疾病通過血液傳播病毒， 其中丙型肝炎、艾滋病和乙型肝炎為傳播最嚴(yán)重的疾病， 會對人體產(chǎn)生嚴(yán)重的不良影響， 因此通過對住院患者術(shù)前的檢測率的提高， 才能排除輸血傳播的風(fēng)險， 降低醫(yī)院糾紛， 目前在血液的篩查中常用的檢測方法為酶聯(lián)免疫法［3］。對住院患者術(shù)前進(jìn)行檢測， 采用核酸檢測的方法， 無一例出現(xiàn)HIV和HCV的誤檢和漏檢，說明醫(yī)院進(jìn)行規(guī)范的檢測工作， 采取核酸檢測這種方法， 可促進(jìn)醫(yī)療質(zhì)量的提高。排除輸血傳播途徑， HBV漏檢是因為窗口期導(dǎo)致， 還由于測試劑的靈敏度較低， 造成HBV的低水平復(fù)制。酶聯(lián)免疫檢測法的靈敏度低， 其主要因素為窗口期、免疫靜默的感染以及病毒變異等。核酸檢測方法其檢測的準(zhǔn)確率高， 基本沒有漏診和誤診情況的出現(xiàn)。HBV感染跟季節(jié)有一定聯(lián)系， ELISA漏檢跟氣溫相關(guān)聯(lián)， 冬季的氣溫較低， 且人體HBsAg不容易表達(dá)， 活性較低， 這就需要多次檢測和大量標(biāo)本進(jìn)行證明， 由此說明控制HBV的漏檢以及經(jīng)血途徑的傳播， 只給予HBsAg的篩查并不夠， 需高度重視。CT值和羅氏病毒的定量數(shù)值之間為正相關(guān)， 并證實了熒光定量PCR技術(shù)來檢測核酸的CT值有必要性和可靠性。NAT檢測法的靈敏度較高， 且檢測的窗口期較短， NAT已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床。酶聯(lián)免疫法中103個樣本出現(xiàn)檢測食物， 漏（誤）檢率為0.6%， 而核酸檢驗法沒有出現(xiàn)漏檢或者誤檢現(xiàn)象， 檢測準(zhǔn)確率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述， 在住院患者篩查中采用核酸檢測的方法， 準(zhǔn)確率高， 靈敏度較高， 能夠較好減少并避免漏檢的情況， 值得推薦。

［1］ 龔曉燕， 任芙蓉， 宋美蘭， 等.羅氏cobas MPX混樣及單人份檢測模式對獻(xiàn)血者NAT檢測效果的研究.中國輸血雜志，2013， 26（21）:136-137.

［2］ 歐陽玲， 黃建國， 謝秀華， 等.核酸檢測技術(shù)在深圳地區(qū)獻(xiàn)血者血液病毒篩查中的應(yīng)用.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志， 2010， 31（7）: 764-765.

［3］ 曾勁峰， 葉賢林， 馬蘭， 等.血篩用酶聯(lián)免疫吸附試驗與核酸檢測互補性探討和研究.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志， 2008， 29（8）:683-684.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.07.080 HCV、HIV、HBV這些疾病主要的傳染途徑之一為輸血，對血液給予輸血相關(guān)的抗體檢驗或者抗原檢測， 能夠避免或者減少輸血過程的疾病傳播等現(xiàn)象。而本院住院需要手術(shù)的患者， 按照醫(yī)院規(guī)定和要求， 術(shù)前必須對患者的血樣采用酶聯(lián)免疫的測定方法， 進(jìn)行血液的各項篩查， 從而排除了醫(yī)院院內(nèi)輸血傳播的可能。但因為酶聯(lián)免疫法是對相應(yīng)病毒進(jìn)行抗體或者抗原的篩查， 但在病毒變異、窗口期、儀器的運行程序、手工操作、實際的特異性以及環(huán)境溫度等都會造成HCV、HBV、HIV等疾病的漏檢。在目前檢驗技術(shù)的不斷發(fā)展中， 病毒核酸檢測能夠明顯減短血液感染病毒的檢測窗口期， 對病毒本身進(jìn)行直接檢測， 排除醫(yī)院通過輸血傳播病毒的風(fēng)險， 有利于保護醫(yī)院和患者權(quán)益， 因此臨床檢驗中推薦使用核酸檢測法［2］。選取2013年2月～2014年3月本院住院的18637例患者進(jìn)行檢測分析， 觀察檢測結(jié)果， 現(xiàn)報告如下。

2014-11-12］

741000 天水市第一人民醫(yī)院檢驗科