劉譯

（懷化市食品藥品檢驗(yàn)所，湖南懷化418000）

HPLC測定利膽消石顆粒中槲皮素和山奈素含量

劉譯

（懷化市食品藥品檢驗(yàn)所，湖南懷化418000）

目的：建立利膽消石顆粒中槲皮素和山奈素含量測定方法。方法：色譜柱：DIKMA-C18柱（4.6mm×250mm；5μm），流動相為甲醇-0.4%磷酸（45∶55），流速為1.0m L/m in，檢測波長為360 nm，柱溫為30℃。結(jié)果：利膽消石顆粒中槲皮素和山奈素的線性范圍分別為0.988～98.8μg/m L（r=0.999 8），0.979～97.9μg/m L（r=0.999 7），平均回收率為98.21%，98.18%，RSD值為0.71%，0.56%。結(jié)論：該方法簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為利膽消石顆粒的質(zhì)量控制方法。

利膽消石顆粒；槲皮素；山奈素；含量測定；高效液相色譜法

利膽消石顆粒由金錢草、木通、芒硝、松子、烏藥、莪術(shù)、海金沙、枳殼、丹參9味中藥組成，具有消熱利濕，利膽排石的功效。用于泌尿系結(jié)石，膽道結(jié)石，膽囊炎，膽道感染等。金錢草為本方中君藥，金錢草中的有效成分為槲皮素和山奈素，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)沒有對其進(jìn)行含量測定，為了有效控制本品的質(zhì)量，本研究參照《中國藥典》[1]及相關(guān)文獻(xiàn)[2-9]對金錢草中槲皮素和山萘素同時(shí)進(jìn)行含量測定,結(jié)果滿意，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試液

1.1 儀器

日本島津LC-20ATVP高效液相色譜儀（LC-20AT四元泵，SPD-M 20A型二極管陣列檢測器，SIL-20A自動進(jìn)樣器，LCsolution色譜工作站），METTLER TOLEDO十萬分之一電子分析天平（瑞士）。

1.2 試藥

利膽消石顆粒（懷化市第一人民醫(yī)院，規(guī)格：20 g/包，批號：20131006，20131109，20131218），槲皮素對照品（原中國藥品生物制品檢定所，批號：100081-200406，純度：100%），山萘素對照品（原中國藥品生物制品檢定所，批號：110861-200304，純度100%），甲醇（色譜純，TEDIA），磷酸（色譜純，TEDA），甲醇（分析純），水為去離子重蒸餾水（科室自制）。

2 含量測定

2.1 色譜條件

色譜柱為DIKMA-C18柱（4.6 mm×250 mm；5μm)，流動相為甲醇-0.4%磷酸（45∶55），水流速為1.0 m L/m in，檢測波長為360 nm，柱溫為30℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥24 h至恒重的槲皮素對照品（9.88 mg）和山奈素對照品（9.79 mg）置100 m L棕色量瓶中，用80%甲醇溶液40 m L使溶解，并定容至刻度，搖勻，配制成混合對照品儲備液。

2.2.2 供試品溶液 取裝量差異項(xiàng)的內(nèi)容物，精密稱取樣品5.0 g，置100 m L錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 m L，稱定重量，加熱回流60 m in，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 m L，加入鹽酸5 m L，置水浴中加熱水解1小時(shí)，取出，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50 m L量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照液 取除金錢草以外的其他8味藥材按處方制備成不含金錢草樣品，再按供試品溶液方法制備。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

取混合對照品儲備液0.1，0.5，1.0，2.0，4.0， 6.0，8.0，10.0 m L置10 m L棕色量瓶中，以流動相定容至刻度。按照2.1項(xiàng)下進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖，見圖1A。由峰面積（Y）（n=3）對響應(yīng)的濃度（X）直線回歸，槲皮素回歸方程為：

Y=37 826 284.241 3X＋18 988.318 6，

r＝0.999 8，表明槲皮素在0.988～98.8μg/m L的濃度范圍內(nèi)線性相關(guān)；山奈素回歸方程為：

Y=37 925 392.597 5X－26 716.769 4，

r＝0.999 7，表明山奈素在0.979～97.9μg/m L的濃度范圍內(nèi)線性相關(guān)。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別取對照品溶液、樣品溶液、陰性對照液注入色譜儀，記錄色譜圖，從圖1中可以看出，槲皮素峰和山奈素峰與其相鄰峰完全分離，陰性對照色譜圖在對應(yīng)的槲皮素峰和山奈素峰位置處無干擾峰，即表明其他組分對測定無干擾。槲皮素峰和山奈素峰與其他組分峰的分離度都大于1.5。

2.5 精密度考察

取同一樣品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量10μL，測定峰面積，計(jì)算RSD值為0.68%，0.72%。結(jié)果表明儀器與色譜條件具有良好的精密度。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號（批號：20121006）的樣品6份，按2.2.2方法制備供試品溶液，分別精密吸取各供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀。測定峰面積，根據(jù)線性回歸方程計(jì)算含量，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD分別為0.82%，0.77%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一樣品溶液，在0，2，4，6，8，10，12 h分別進(jìn)樣10μL，依法測定，結(jié)果6次測定的槲皮素和山奈素峰面積RSD分別為1.01%，1.08%，表明樣品溶液在12 h內(nèi)相對穩(wěn)定。

圖1 槲皮素和山奈素色譜

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品（批號：20121006，平均裝量：20.252 6 g/包）10.0 g 9份置錐形瓶中，每份分別加入對照品混合溶液（重新配制）0.8 m L，0.8 m L，0.8 m L，1.0 m L，1.0 m L，1.0 m L，1.2m L，1.2m L，1.2m L（槲皮素濃度為0.247mg/m L，山奈素濃度為0.222 mg/m L）水浴加熱將其蒸干。按2.2.2方法制備。按2.1項(xiàng)下分別進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖，測定槲皮素和山奈素的峰面積，經(jīng)換算后，計(jì)算槲皮素和山奈素的回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2.9 樣品含量測定

將3批不同批號的利膽消石顆粒按2.2.2方法制備，進(jìn)樣10μL，測定峰面積,按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 以80%甲醇為溶劑，通過高效液相色譜DAD檢測器掃描，發(fā)現(xiàn)槲皮素和山奈素這兩種對照品溶液均在360 nm波長處有最大吸收，因此確定360 nm為檢測波長。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n＝3）

3.2 試驗(yàn)中以文獻(xiàn)[1]提供的色譜條件甲醇-0.4%磷酸（50∶50）為基礎(chǔ)，改變流動相的比例甲醇-0.4%磷酸（45∶55），通過試驗(yàn)摸索，利膽消石顆粒中各組分能夠較好分離，該條件適合利膽消石顆粒的含量測定。

3.3 本試驗(yàn)采用HPLC同時(shí)測定利膽消石顆粒中槲皮素和山奈素的含量，具有方法簡便，重復(fù)性好，準(zhǔn)確且專屬性較強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，具一定的實(shí)際意義。

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Content Determ ination of Quercetin and Kaempferol in Lidan XiaoshiGranules by HPLC

Liu Yi（Huaihua Municipal Food and Drug Inspection Institute，Hunan Huaihua 418000，China）

Objective:To establish a HPLC method for the content determ ination of quercetin and kaempferol in lidan xiaoshi granules.M ethods:DIKMA-C18（4.6 mm×250 mm；5μm）column was used w ith the mobile phase of methanol-0.4%phosphoric acid solution（45∶55）,the flow ratewas 1.0m L/min,the detection wavelength was at 360 nm and the column temperature was at 30℃.Results:A good linear relationship of quercetin and kaempferol was w ithin the range of 0.988～98.8μg/m L（r=0.999 8）and 0.979～97.9μg/m L（r=0.999 7）respectively,and the average recovery of quercetin and kaempferolwas 98.21%and 98.18%（RSD was 0.71%and 0.56%）.Conclusion:Themethod is simple and accurate,which can be used for the quality control of lidan xiaoshigranules.

Lidan XiaoshiGranules；Quercetin；Kaempferol；Content Determ ination；HPLC

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.01.006

2014-06-27）

劉譯，男，副主任藥師。研究方向：食品藥品檢驗(yàn)。E-mail：442959621@qq.com