陳宗文 葛任新 李月娥 盧明詩

（廣東省高州市中醫(yī)院，廣東高州525200）

提高胃炎靈片劑質量標準的研究

陳宗文 葛任新 李月娥 盧明詩

（廣東省高州市中醫(yī)院，廣東高州525200）

目的：提高完善胃炎靈片劑的質量標準。方法：參照國家最新藥品標準在原有質量標準的基礎上，新增采用薄層色譜（TLC）對處方中的黨參、黃芪、木香、白芍進行定性鑒別，同時新增紫外分光光度法對黃連中鹽酸小檗堿進行含量測定。結果：薄層色譜斑點清晰集中，專屬性強；紫外分光光度法測得鹽酸小檗堿的含量在0～5.0μg/m L范圍內與吸光度有良好的線性關系，其線性方程A=0.063 8C＋0.001 4，r=0.999 8，平均回收率為99.78%，RSD為0.27%（n=6）。結論：該方法簡便，重復性好，可全面有效控制胃炎靈片的質量。

胃炎靈；鹽酸小檗堿；薄層色譜法；紫外分光光度法

胃炎靈片是由黨參、黃芪、香附、白術、木香、白芍等14味中藥材制備而成，具有補中益氣，健脾和胃之功，用于脾胃虛弱，慢性胃炎、胃及十二指腸潰瘍等癥，為本院的醫(yī)院制劑，批準文號為粵藥制字Z05170161。本品原質量標準中僅有黃連的薄層鑒別項。本研究增加了黨參、黃芪、木香、白芍的薄層色譜鑒別項，同時增加了該制劑中鹽酸小檗堿成分的紫外分光光度法含量測定項，結果滿意，為提高本品的質量標準，更好地保證藥品質量提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

中藥提取濃縮機組（型號RTH，湖北振華醫(yī)療器械有限公司）；中藥粉碎機組（型號WF-300，湖北振華醫(yī)療器械有限公司）；KQ-250B型超聲波清洗器（昆明市超聲儀器有限公司）；HH-4恒溫水浴鍋（江蘇金壇市宏華儀器廠）；紫外可見分光光度計（型號WFZ800-D2C）；分析天平（量制滬字00000163，上海國營長江科學儀器廠）；定量毛細管（Drummomd Co）；硅膠G（中國青島海洋化工有限公司）。

1.2 試藥

黨參炔苷對照品、黃芪甲苷對照品、去氫木香內酯對照品、木香烴內酯對照品、芍藥苷對照品、鹽酸小檗堿對照品均由原中國藥品生物制品檢定所提供（批號分別為：111732-200904，110781-200511，111525-200505，111525-200706，110713-200911）；水為雙蒸水；所用試劑均為分析純；胃炎靈片由高州市中醫(yī)院制劑室提供（批號：140312，140409，140505，140530，140624）。

2 定性鑒別

2.1 黨參的鑒別[1]

取胃炎靈片劑10片，研成細粉，加甲醇25m L，超聲震蕩處理30分鐘，濾過，取濾液蒸干。殘渣加水15 m L使其完全溶解，溶液通過D101型大孔樹脂柱，先用水50 m L洗脫，棄去水液，再用50 m L 50%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1 m L使其溶解，作為供試品溶液。按相同工藝制得缺少黨參藥材的片劑，按照供試品溶液的制備方法制得陰性對照品溶液。另取黨參炔苷對照品，加甲醇制成每1 m L含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照《中國藥典》（2010年版）一部附錄ⅥB薄層色譜法試驗，吸取對照藥材溶液2μL，陰性對照品溶液2～4μL，供試品溶液2～4μL，分別點于同一硅膠薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7∶1∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰，紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；而缺黨參的陰性對照品色譜中，在相應的位置無干擾斑點。見圖1。

圖1 黨參的薄層色譜

2.2 黃芪的鑒別[1]

取胃炎靈片劑10片，研成細粉，加甲醇20m L，置水浴上回流1小時，濾過，濾液加于已處理好的中性氧化鋁柱（100～120目，5 g，內徑10～15 mm）上，用40%甲醇100 m L洗脫。收集洗脫液，置水浴上蒸干，殘渣加水30 m L使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20 m L，合并正丁醇液，用水洗滌2次，每次20 m L，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5 m L使溶解，作為供試品溶液。按相同工藝制得缺少黃芪藥材的片劑，按上法制得陰性對照品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1 m L含l mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》（2010年版）一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述3種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（20∶40∶22∶10），10℃以下放置后的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，日光下顯棕褐色斑點；紫外光燈（365 nm）下，顯橙黃色熒光斑點；而缺黃芪的陰性對照品色譜中，在相應的位置無干擾斑點。見圖2。

圖2 黃芪的薄層色譜的可見光和紫外光

2.3 木香的鑒別[1]

取本品10片，研細，加甲醇30mL，加熱回流30分鐘，濾過，取濾液15mL，濃縮至約1mL，作為供試品溶液。按相同工藝制得缺少木香藥材的片劑，按照供試品溶液的制備方法制得陰性對照品溶液。另取去氫木香內酯和木香烴內酯對照品，用甲醇溶解，分別制成每1mL含2mg的混合溶液作為對照溶液。照薄層色譜法《中國藥典》（2010年版）一部附錄ⅥB，分別吸取對照藥材溶液、陰性對照品溶液、供試品溶液各3μL，分別帶狀點樣于同一硅膠薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯（10∶1）33mL為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯現(xiàn)相同顏色的斑點；而缺木香的陰性對照品色譜中，在相應的位置無干擾斑點。見圖3。

2.4 白芍的鑒別[1]

取本品10片，研細，加硅藻土12g。研勻，加氯仿120mL，加熱回流1.5小時，濾過，殘渣加乙醇40mL，浸漬1小時，時時振搖，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30mL使溶解，用乙醚抽提至乙醚層無色，棄去乙醚液，再用水飽和的正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇提取液，水洗滌2次，每次20mL，棄去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘渣加乙醇1mL使溶解，拌入少許中性氧化鋁，水浴上拌勻干燥，裝入預先裝填好的中性氧化鋁小柱（200～300目，1g，內徑10～15mm）頂部，以甲醇40mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加乙醇溶解，使成1mL，作為供試品溶液。按相同工藝制得缺少白芍藥材的片劑，按照供試品溶液的制備方法制得陰性對照品溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》（2010年版）一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述 3種溶液各4μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯現(xiàn)相同顏色的斑點；而缺白芍的陰性對照品色譜中，在相應的位置無干擾斑點。見圖4。

圖3 木香的薄層色譜

圖4 白芍的薄層色譜

3 鹽酸小檗堿的含量測定

3.1 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿標準品0.005 0 g，加入無水乙醇適量使其溶解，置于50 m L容量瓶中，繼續(xù)加入無水乙醇至刻度，搖勻，制成濃度為100μg/m L的鹽酸小檗堿對照品溶液。

3.2 樣品溶液的制備

取樣品20片，研細，混合均勻，精密稱取適量（約0.2 g），加入無水乙醇在水浴鍋上溶解，將溶液加入100 m L的容量瓶中，加無水乙醇定容，搖勻，即得。

3.3 空白溶液的制備

以同體積的無水乙醇為空白溶液。

3.4 測定波長的選擇

分別精密量取相同體積的對照品溶液、樣品溶液和空白溶液，波長自200～400 nm進行掃描，結果在306 nm獲得最大吸收峰，故選擇測定波長為306 nm。結果見圖5。

圖5 鹽酸小檗堿的紫外吸收光譜

3.5 標準曲線的制定

精密量取鹽酸小檗堿對照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，5.0 m L置于100 m L容量瓶，加入無水乙醇至刻度，搖勻，制成濃度分別為0.5，1.0，1. 5，2.0，3.0，4.0，5.0μg/m L的標準溶液系列。以無水乙醇為空白溶液，在波長306 nm處測吸光度。結果見表1。以鹽酸小檗堿濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，得到線性回歸方程：

A=0.063 8C＋0.001 4，

r=0.999 8，結果表明鹽酸小檗堿濃度在0～5.0μg/m L的范圍內，吸收度與濃度呈良好的線性關系。

3.6 樣品的含量測定

取5批不同批號的樣品，按“3.2樣品溶液的制備”制得不同批號的5份樣品溶液。以無水乙醇為空白溶液，在波長306 nm處測吸光度。得出結果，計算。見表2。

表1 標準溶液系列的測定結果（n=8)

表2 樣品溶液的測定結果(n=5)

3.7 精密度試驗

取“3.5標準曲線的制定”中制備的濃度為2.0μg/m L的對照品溶液，在波長306 nm處測定吸光度，重復測定6次吸光度分別為0.130，0.131，0.130，0.129，0.130，0.130。計算出RSD=0.49%（n= 6），結果表明儀器精密度良好。

3.8 重現(xiàn)性試驗

取同一批號樣品6份，分別按照“3.2樣品溶液的制備”依法制成供試品溶液，在波長306 nm處測定吸光度分別為0.219，0.220，0.219，0.217，0.219，0.220，計算含量。RSD=0.50%（n=6），表明該方法的重現(xiàn)性良好。

3.9 穩(wěn)定性試驗

精密量取依法制備的同一批號（140505）樣品溶液1.0 m L，60 m in內每隔10 min在波長306 nm處測定一次吸光度。測得吸光度分別為0.219，0.219，0.218，0.219，0.218，0.218，RSD為0.25%，結果表明：樣品溶液1小時內穩(wěn)定性良好。

取同一批號（140505）供試品，各12瓶，室溫（21±1）℃避光貯存6個月，片劑外觀無明顯變化。每月取樣測定崩解時限及鹽酸小檗堿含量，計算崩解時限及鹽酸小檗堿含量的RSD值分別為2.04%和2.29%，結果表明該片劑穩(wěn)定性良好。見表3。

表3 胃炎靈片劑崩解時限及鹽酸小檗堿含量變化（n=6）

3.10 加樣回收率試驗

精密吸取已知含量的樣品6份，分別精密加入已知濃度的鹽酸小檗堿溶液，測定吸收度，計算含量、回收率，結果平均回收率為99.78%，RSD為0.27%。表明方法分析誤差較小，操作過程中損失少，回收率高，方法可靠。見表4。

表4 回收率試驗結果（n=6）

4 討論

4.1 本制劑中黨參具有補中益氣、健脾益肺之功效，為本制劑的君藥，現(xiàn)代藥理學研究表明，黨參具有調整腸胃運動，抗?jié)?，增強機體免疫功能等作用[2]；黃芪具有補中益氣、補氣升陽的作用，主治脾胃氣虛證，現(xiàn)代藥理學研究表明，黃芪具有抗?jié)?，調節(jié)機體免疫力，抗氧化損傷，促進造血等作用[3]，為本制劑的臣藥；木香主治脾胃氣滯證，現(xiàn)代藥理學研究表明，木香具有促進胃動力、抗消化性潰瘍、促進膽囊收縮、鎮(zhèn)痛等作用[4]，對幽門螺旋桿菌有很強的抑制作用[5]，為本制劑的臣藥；白芍具有柔肝止痛、平抑肝陽的作用，用于脅痛，腹痛，肝陽上亢之胃痛，也為本制劑的臣藥。原標準只有對黃連一藥的定性鑒別，本文增加了這4味君臣藥的薄層色譜鑒別，能更好更全面地提高本制劑的定性鑒別。

4.2 鹽酸小檗堿檢測波長的確定，主要是參照《中國藥典》（2010年版）一部附錄ⅥB分光光度法，經(jīng)過波長自200～400 nm進行掃描，結果在306 nm獲得最大吸收峰，因此將306 nm作為測定波長，用于本制劑分光光度法的含量測定。

4.3 本制劑中黃連具有清熱燥濕，瀉火解毒之功，為本制劑的臣藥，小檗堿為黃連中主要有效成分，對幽門螺旋桿菌具有高度抑菌作用?！吨袊幍洹罚?010年版）一部黃連項下收載的黃連含量測定方法是以鹽酸小檗堿為對照品，采用高效液相色譜法測定，計算含小檗堿不得小于5.5%，表小檗堿不得少于0.80%，黃連堿不得少于1.6%，巴馬汀不得小于1.5%為標準的；而本文采用紫外分光光度法測定黃連中鹽酸小檗堿的含量，鹽酸小檗堿的含量在0～5.0μg/m L范圍內與吸光度有良好的線性關系：

A=0.063 8C＋0.001 4，

r=0.999 8，平均回收率為99.78%，RSD為0.27%（n=6），此結果表明該方法合理準確，重現(xiàn)性好。

4.4 方法學研究結果表明，采用薄層色譜法對本制劑中黨參、黃芪、木香、白芍進行定性鑒別，采用紫外分光光度法對本制劑中黃連中的小檗堿進行含量測定，相對于實驗儀器和實驗條件要求較高的液相色譜法，本方法操作簡便、結果準確、重現(xiàn)性好，具有專屬性，能夠有效地提高胃炎靈片劑的質量標準。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010年版）一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]焦紅軍.黨參的藥理作用及其臨床應用[J].臨床醫(yī)學，2005，25（4）：92.

[3]吳發(fā)寶，陳希元.黃芪藥理作用研究綜述[J].中藥材，2004，27（3）：231-234.

[4]魏華，彭勇，馬國需，等.木香有效成分及藥理作用研究進展[J].中草藥，2012，43（3）：613-620.

[5]Li Y，Xu C，Zhang Q，et，al.In vitro anti-Helicobacter pylori action of 30 Chinese herbal medicines used to treat ulcer diseases[J].JEthnopharmacol，2005，98（3）：329-333.

Study on the Improvement of Quality Standard of W eiyanling Tablets

Chen Zongwen，Ge Renxin，Li Yue’e，Lu M ingshi（Hospital of Traditional Chinese Medicine of Gaozhou City，Guangdong Gaozhou 525200，China）

Objective:To improve the quality standards of weiyanling tablets.M ethods:According to the latest national drug standards，thin-layer chromatography（TLC）method was added for the qualitative identification of codonopsis radix，astragali radix，aucklandiae radix and radix paeoniae alba based on the original quality standards.While the content of berberine hydrochloride was determined by ultraviolet spectrophotometry（UV）.Results:The characteristic spots were clear w ith good specificity using TCL.A good linear relationship between the content of berberine hydrochloride and absorbance，determined by UV，was w ithin the range of 0～5.0μg/m L，the linear equation was A=0.063 8C＋0.001 4（r=0.999 8），and the average recovery was 99.78%，RSD was 0.27%（n=6）.Conclusion:The method is simple w ith good reproducibility，and can be used for the quality control of weiyanling tablets effectively.

Weiyanling；Berberine Hydrochloride；TLC；UV

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.01.004

2014-10-14）

陳宗文，男，藥師。研究方向：醫(yī)院制劑。E-mail：956023927@qq.com