叢　馨，張　艷，吳立玲△，俞光巖(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部生理學(xué)與病理生理學(xué)系，口腔醫(yī)學(xué)院，北京0087)

激活毒蕈堿乙酰膽堿受體經(jīng)claudin-4調(diào)控下頜下腺旁細(xì)胞途徑的通透性

叢馨1，張艷1，吳立玲1△，俞光巖2
(北京大學(xué)1醫(yī)學(xué)部生理學(xué)與病理生理學(xué)系，2口腔醫(yī)學(xué)院，北京100871)

目的:探討激活毒蕈堿乙酰膽堿受體(mAChR)能否經(jīng)調(diào)控緊密連接而促進(jìn)下頜下腺的分泌。方法:跨上皮細(xì)胞電阻(TER)和旁細(xì)胞通透性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)緊密連接的功能; Western blot和免疫熒光檢測(cè)緊密連接的表達(dá)和分布;轉(zhuǎn)染claudin-4 shRNA 或cDNA觀察claudin-4對(duì)緊密連接功能的影響。免疫共沉淀檢測(cè)相關(guān)信號(hào)通路。結(jié)果: mAChR激動(dòng)劑卡巴膽堿可降低下頜下腺細(xì)胞TER值，并增加旁細(xì)胞途徑通透性?？ò湍憠A可下調(diào)claudin-4的表達(dá)和分布，但不影響其它緊密連接分子。敲低claudin-4可使卡巴膽堿降低TER值的作用消失;而在過(guò)表達(dá)claudin-4細(xì)胞中，卡巴膽堿仍能降低TER值和claudin-4表達(dá)。卡巴膽堿可經(jīng)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)促進(jìn)claudin-4絲氨酸磷酸化。磷酸化的claudin-4可與β-arrestin2結(jié)合，招募clathrin引起claudin-4發(fā)生內(nèi)化，并進(jìn)一步在胞漿中被泛素化降解。結(jié)論:激活mAChR通過(guò)ERK1/2/β-arrestin2/clathrin/泛素化途徑下調(diào)claudin-4的表達(dá)，進(jìn)而增加旁細(xì)胞途徑的通透性。

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