李　敏　陳　洪　張　程　邢德剛(廣東藥學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院，廣東　廣州　510006)

不同造模方法的胃腸動(dòng)力障礙動(dòng)物模型比較

李敏陳洪張程邢德剛
(廣東藥學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院，廣東廣州510006)

〔摘要〕目的比較不同方法建立的胃腸動(dòng)力障礙動(dòng)物模型，為胃腸動(dòng)力障礙疾病研究中動(dòng)物模型的建立、選擇與實(shí)際應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法將80只昆明種小鼠，分為8組，每組10只。A組空白對照組; B組腹腔注射生理鹽水組; C組生理鹽水灌胃組; D組甘草煎劑造模組; E組肢體缺血-再灌注造模組; F組冰水刺激造模組; G組阿托品造模組; H精氨酸造模組。造模結(jié)束后，測定實(shí)驗(yàn)小鼠胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率，比較各組胃腸動(dòng)力障礙的發(fā)生程度。結(jié)果各組模型小鼠胃內(nèi)殘留率分別為: A組43.5％，B組42.6％，C組42.1％，D組70.7％，E組57.2％，F(xiàn)組56.4％，G組59.5％，H組66.2％;各組模型小鼠小腸推進(jìn)率分別為A組90.7％，B組89.1％，C組89.3％，D組62.2％，E組75.9％，F(xiàn)組71.5％，G組68.1％，H組72.1％。結(jié)論甘草煎劑造模組出現(xiàn)胃腸動(dòng)力障礙最明顯，造模可靠。

〔關(guān)鍵詞〕胃腸動(dòng)力障礙;動(dòng)物模型;胃內(nèi)殘留率;小腸推進(jìn)率

第一作者:李敏(1991-)，男，碩士，主要從事胃腸動(dòng)力學(xué)的研究。

胃腸動(dòng)力障礙性疾病(DGIM)是臨床常見病，該疾病可由多種病因所致，是眾多功能性消化道疾病的共同病理過程，病理生理表現(xiàn)復(fù)雜〔1〕。胃腸動(dòng)力障礙動(dòng)物模型是進(jìn)行DGIM相關(guān)研究的重要基礎(chǔ)，國內(nèi)外已建立了多種DGIM相關(guān)的模型，常用方法有藥物注射法、物理法、中藥灌胃法。然而，有關(guān)這3種造模方法的質(zhì)量、穩(wěn)定性及應(yīng)用比較，目前尚未有相關(guān)研究報(bào)道。我們采用上述造模方法分別建立DGIM動(dòng)物模型，對各種模型進(jìn)行比較，旨在為DGIM研究中動(dòng)物模型的建立、選擇與實(shí)際應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料藥材:甘草飲片購自廣東省采芝林藥材公司;精氨酸購自天津金耀氨基酸有限公司;阿托品購自吉林省華牧動(dòng)物保健品有限公司。動(dòng)物:昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量25～30 g，購自廣東藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。儀器:精密電子天平，型號(hào)AL204-IC。

1.2方法

1.2.1藥物制備(1)甘草煎劑:煎煮一定量甘草，重復(fù)煎煮2次，將所得煎煮液合并，過夜沉降，第2天用多層紗布過濾，加熱濃縮濾液，使之最終濃度為生藥1 g/ml，置4℃冰箱備用。(2)精氨酸溶液:將適量鹽酸精氨酸粉末溶于生理鹽水配成20％鹽酸精氨酸溶液，攪拌混勻后調(diào)節(jié)pH至7.3左右。

1.2.2分組與造模方法將80只小鼠隨機(jī)分為8組，每組10只。A組空白對照組; B組腹腔注射生理鹽水組; C組生理鹽水灌胃組; D組甘草煎劑造模組:將得到的甘草煎劑以10 g/kg體重的比例對小鼠進(jìn)行灌胃，1次/d，連續(xù)喂養(yǎng)5 d，即可完成造模; E組肢體缺血-再灌注造模組:采用拉力法統(tǒng)一結(jié)扎造模，以烏拉坦按0.5 ml/100 g比例行術(shù)前麻醉，用拉力法結(jié)扎模型小鼠兩側(cè)大腿根部，持續(xù)3 h后，立即解除結(jié)扎，重復(fù)5 d; F組冰水刺激造模組:將小鼠置于冰水中，觀察其游泳狀態(tài)，隨后取出漂浮不動(dòng)的小鼠，放于自制的固定器中，束縛小鼠胸段及前肢，持續(xù)應(yīng)激2 h; G組阿托品造模組:以0.5 mg/kg體重的比例給予阿托品腹腔注射1次，造模完成; H組精氨酸造模組:模型動(dòng)物分別以5.2 g·kg－1·d－1(首日)，2.6 g·kg－1·d－1(第2～5 天)的比例腹腔注射左旋精氨酸，同時(shí)用生理鹽水15 ml/kg/d灌服，直至造模結(jié)束。

1.2.3檢測方法測定前24 h禁食不禁水，測定當(dāng)日灌服添加墨汁的玉米淀粉糊0.4 g/只，20 min后脫頸椎處死動(dòng)物，立即剖開腹腔，結(jié)扎胃賁門和幽門，取出胃，用濾紙拭干后稱全質(zhì)量，沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內(nèi)容物后拭干，稱胃凈質(zhì)量，計(jì)算胃內(nèi)殘留率。取出完整的小腸平鋪于木板上，測量幽門至回盲部全長及幽門至玉米淀粉糊前沿的距離，以幽門至玉米淀粉糊前沿的距離占幽門至回盲部全長的百分比為小腸推進(jìn)率。胃內(nèi)殘留率(％) = (胃全質(zhì)量－胃凈質(zhì)量) /所給糊質(zhì)量×100％;小腸推進(jìn)率(％) =幽門至玉米淀粉糊前沿的距離/幽門至回盲部全長×100％

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS12.0軟件進(jìn)行方差分析。

2　結(jié)果

各組小鼠胃內(nèi)殘留率及小腸推進(jìn)率情況與C組比較，D組能顯著增加造模組小鼠胃內(nèi)殘留率〔(42.1±12.5) ％ vs (70.7±0.6) ％〕，顯著延遲小腸推進(jìn)速度〔(89.3±11.2) ％vs (62.2±8.2) ％〕(P＜0.05)。與A組相比，E組小鼠胃內(nèi)殘留率增加〔(43.5±12.4) ％ vs(57.2±10.0) ％〕，小腸推進(jìn)率降低〔(90.7±7.9) ％vs(75.0±11.0) ％〕(P＜0.05)。F組與A組比較，小鼠胃內(nèi)殘留率增加〔(56.4±8.6) ％〕，小腸推進(jìn)率降低〔(71.5±8.9) ％〕(P＜0.05)。G組小鼠與B組相比，小鼠胃排空延緩，胃殘留率增加〔(59.5±9.6) ％vs(42.6±11.6) ％〕;小鼠胃腸蠕動(dòng)顯著減慢，小腸推進(jìn)率明顯減少〔(68.1±7.4) ％vs (89.1±8.9) ％〕(P＜0.05)。與B組相比，H組小鼠胃排空延緩，胃內(nèi)殘留率增加〔(66.2±10.0) ％〕，小腸推進(jìn)率降低〔(72.1±8.8) ％〕(P＜0.05)。

3　討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明，DGIM的發(fā)生與多種因素有關(guān):神經(jīng)肌肉調(diào)控系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、胃腸道高敏感狀態(tài)以及免疫及感染功能等〔2〕。根據(jù)致病因素，通過不同方式，均可建立DGIM動(dòng)物模型。甘草可使胃收縮運(yùn)動(dòng)減慢并使收縮頻率降低，減弱移行性復(fù)合肌電活動(dòng)〔3〕，根據(jù)甘草藥理學(xué)特性，利用甘草煎劑可復(fù)制胃動(dòng)力低下小鼠模型。研究表明，心理性應(yīng)激條件可使胃電活動(dòng)出現(xiàn)紊亂，顯著增加血漿中血管活性腸肽(VIP)、生長抑制素(SS)的濃度以及一氧化氮合酶(NOS)的活性，對胃腸運(yùn)動(dòng)有明顯的影響〔4〕。以心理刺激因素為根據(jù)，利用冰水刺激造模，應(yīng)激模型小鼠出現(xiàn)明顯的胃腸動(dòng)力障礙。肢體缺血-灌注可對遠(yuǎn)隔器宮造成一定損傷，模型動(dòng)物血清腫瘤壞死因子(TNF) -α、 NO水平升高〔5〕，細(xì)胞因子TNF-α、NO對胃腸動(dòng)力障礙起介導(dǎo)作用，由此肢體缺血-灌注模型動(dòng)物同時(shí)存在胃腸動(dòng)力障礙，據(jù)此，確定采用肢體缺血-再灌注建立胃腸動(dòng)力障礙模型具有可行性。乙酰膽堿是胃腸道神經(jīng)系統(tǒng)中最主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，可明顯興奮胃腸道平滑肌，使平滑肌細(xì)胞膜去極化。阿托品可阻斷M膽堿受體，抑制乙酰膽堿的作用，降低胃腸道平滑肌的興奮性，使其蠕動(dòng)的頻率和幅度下降〔6〕，因此采用阿托品阻斷M-膽堿能受體通路，可建立小鼠胃腸動(dòng)力障礙模型。體內(nèi)合成NO的唯一天然底物是精氨酸，腹腔注射后可增加胞質(zhì)Ca2+從而激活NO合成酶，促使機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生L-瓜氨酸和NO〔7〕，導(dǎo)致胃腸動(dòng)力下降，因此，選擇精氨酸建立胃腸動(dòng)力障礙實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型有科學(xué)的依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示各組模型小鼠均已出現(xiàn)類似DGIM的改變，可確定本實(shí)驗(yàn)采用的造模方法可行。本研究結(jié)果還證實(shí)，甘草煎劑模型組出現(xiàn)胃腸動(dòng)力障礙最明顯。

由于人類疾病的發(fā)生發(fā)展過程非常復(fù)雜，通過醫(yī)學(xué)臨床所積累的經(jīng)驗(yàn)具有時(shí)間或空間上的局限性，同時(shí)對DGIM患者的人體在體研究以及人胃腸組織的獲取較為困難。因此，在科學(xué)實(shí)驗(yàn)及臨床工作中，許多學(xué)者都在尋找一種理想可靠的方法建立理想的DGIM動(dòng)物模型。綜合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，筆者認(rèn)為甘草煎劑造模法可使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)類似DGIM改變，符合臨床研究DGIM患者體內(nèi)胃腸動(dòng)力障礙的需要。該方法簡單可靠，無須特殊儀器，便于操作，可作為一種探討DGIM的發(fā)病機(jī)制和病理改變的新型實(shí)驗(yàn)性模型。

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〔2015-03-16修回〕

(編輯郭菁)

通訊作者:邢德剛(1969-)，男，教授，博士，主要從事胃腸動(dòng)力學(xué)方面的教研工作。

基金項(xiàng)目:廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013B021800270)

〔中圖分類號(hào)〕R363.1

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2015) 16-4479-02;

doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2015.16.026