慢性心力衰竭患者外周血Vδ1 T細胞數(shù)量及功能變化

郭文安陳津瀚易志剛

(廈門大學附屬第一醫(yī)院干部病房，福建廈門361001)

摘要〔〕目的觀察慢性心力衰竭(CHF)患者外周血Vδ1 T細胞數(shù)量和功能的改變，探討Vδ1 T細胞在CHF發(fā)病中的作用。方法選取2012年3月至2013年12月在該院入住的CHF患者50例及同期入院進行健康體檢者50例，抽取CHF患者及健康對照(HC)者外周靜脈血10 ml。采用流式細胞術測定其外周血Vδ1 T細胞比例及Vδ1 T細胞表面Foxp3表達情況。采用CFSE染色方法檢測Vδ1 T細胞對CD4 T細胞增殖能力的影響。采用流式細胞術測定Vδ1 T細胞與CD4 T細胞共孵育后對CD4 T細胞分泌IFN-γ及TNF-α能力的影響。結(jié)果CHF患者外周血Vδ1 T細胞數(shù)量〔(1.59±0.77)%〕與HC〔(1.41±0.344)%〕相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。與HC外周血Vδ1 T細胞表面Foxp3表達水平〔(19.82±2.46)%〕相比，CHF組Foxp3表達水平〔(1.23±0.86)%〕顯著降低(P<0.05)。HC外周血Vδ1 T細胞可顯著抑制CD4 T細胞增殖和IFN-γ及TNF-α分泌能力，而CHF患者外周血Vδ1 T細胞不具有此功能。結(jié)論CHF患者外周血Vδ1 T細胞功能喪失，致使外周血CD4 T細胞增殖和分泌IFN-γ及TNF-α能力增強，CHF患者免疫功能的這種改變可能與CHF的發(fā)生相關。

關鍵詞〔〕慢性心衰；Vδ1 T細胞；細胞因子

中圖分類號〔〕R54〔文獻標識碼〕A〔

第一作者：郭文安(1978-)，男，主治醫(yī)師，碩士，主要從事心血管內(nèi)科研究。

慢性心衰(CHF)發(fā)病機制目前存在多種學說，而越來越多的研究表明免疫系統(tǒng)過度激活在CHF的發(fā)病中具有重要作用〔1，2〕。調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)目前研究較多的是CD4 Treg，已有文獻證實CD4 Treg數(shù)量和功能異常與CHF發(fā)病密切相關〔3，4〕。然而，除外CD4 Treg，外周血中還存在多種具有免疫抑制功能的調(diào)節(jié)性細胞，例如調(diào)節(jié)性B細胞、調(diào)節(jié)性DC細胞和Vδ1 T細胞等〔5～7〕。Vδ1 T細胞是近年來被證實具有免疫抑制功能的一種T細胞〔7〕。目前關于Vδ1 T細胞在CHF中的作用還未見報道。本研究觀察CHF患者外周血Vδ1 T細胞數(shù)量和功能的改變。

1材料與方法

1.1臨床資料收集2012年3月至2013年12月在我院干部病房入住的CHF患者50例及同期入院進行健康體檢者50例。CHF患者中，男26例，女24例；平均年齡(66.27±9.26)歲；50例患者中缺血性心臟病(IHD)25例，非缺血性心臟病(NIHD)25例。健康對照(HC)組中，男25例，女25例；平均年齡(65.94±9.59)歲。

1.2外周血單個核細胞(PBMC)分離方法無菌采集的抗凝血按1∶1的比例緩緩加入已預加淋巴細胞分離液的15 ml離心管中，800 r/min離心18 min；滴管吸取白膜層，加入裝有10 ml無血清RPMI1640培養(yǎng)基的15 ml離心管中，600 r/min離心15 min；細胞沉淀以10 ml無血清RPMI 1640培養(yǎng)基重懸，400 r/min離心8 min；再用1 ml含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基將細胞沉淀重懸，臺盼藍染色計數(shù)后制備成濃度為2×106個/ml的細胞懸液。

1.3外周血Vδ1 T細胞比例測定無菌分選獲取的PBMC以含1%BSA 的PBS洗滌2次后，加入相應熒光抗體(CD3、TCR Vδ1)，4℃避光孵育30 min；以含1%BSA 的PBS洗滌2次后，細胞重懸于0.1 ml 1%多聚甲醛固定液中待流式細胞儀檢測。

1.4Vδ1 T細胞表面Foxp3表達檢測無菌分選獲取的PBMC以含1%BSA 的PBS洗滌2次后，加入相應熒光抗體(CD3、TCR Vδ1)，4℃避光孵育30 min；以含1%BSA的PBS洗滌2次后加入0.5 ml細胞膜固定透化液重懸細胞，室溫避光30 min；以透化液洗滌細胞2次后加入相應熒光抗體(Foxp3)，室溫避光30 min；以透化液洗滌細胞2次，細胞重懸于0.2 ml 1%多聚甲醛固定液中待流式細胞儀檢測。

1.5統(tǒng)計學處理采用SPSS16.0軟件行t檢驗。

2結(jié)果

2.1CHF患者和HC組外周血Vδ1 T細胞比例變化情況HC組外周血Vδ1 T細胞比例為(1.41±0.344)%，與CHF組患者〔(1.59±0.77)%〕比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

2.2CHF患者和HC組外周血Vδ1 T細胞表面Foxp3表達水平檢測HC組外周血Foxp3陽性Vδ1 T細胞比例為(19.82±2.46)%比較與CHF〔(1.23±0.86)%〕，差異無統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

2.3Vδ1 T細胞抑制CD4+T細胞增殖能力檢測HC組外周血Vδ1 T細胞可顯著抑制自體來源的CD4+T細胞的增殖能力(25.8%vs94.4%)，而CHF外周血Vδ1 T細胞對自體來源的CD4+T細胞增殖能力無顯著抑制作用(93.2%vs94.9%)。

2.4Vδ1 T細胞抑制CD4+T細胞因子分泌能力檢測CHF患者外周血IFN-γ+ CD4+T細胞比例(34.1%)及TNF-α+ CD4 T細胞比例(33.7%)在與自體來源外周血Vδ1 T細胞共孵育后無明顯變化(31.1%，32.9%)(P>0.05)；HC組患者外周血IFN-γ+ CD4+T細胞比例(20.1%)在與自體來源外周血Vδ1 T細胞共孵育后顯著降低(5.5%)(P<0.01)。

3討論

CHF發(fā)病機制目前主要有神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂機制、氧化應激機制和心肌細胞凋亡機制等。然而，近年來研究發(fā)現(xiàn)免疫系統(tǒng)過度激活在CHF的發(fā)病中具有重要的作用〔2〕。Treg是具有免疫抑制功能的一群細胞，在維持機體免疫功能平衡中具有重要的作用。焦海春等〔1〕研究顯示，在CHF患者中，CD4+Treg功能存在明顯的異常，從而導致CD4+Treg對CD4效應T細胞失去抑制作用，致使機體Th1細胞介導的細胞免疫應答增強，從而導致CHF發(fā)生。

本研究結(jié)果顯示，HC外周血Vδ1 T細胞可顯著抑制CD4 T細胞增殖和IFN-γ及TNF-α分泌能力，而CHF患者外周血Vδ1 T細胞不具有此功能。提示CHF患者外周血Vδ1 T細胞免疫抑制功能是顯著降低的。

4參考文獻

1焦海春，張俊威，崔彥芬.慢性心衰患者Th1與Th2型細胞及Treg細胞的表達〔J〕.西部醫(yī)學，2014;26(3)：347-9.

2Torre-Amione G，Anker SD，Bourge RC，etal.Results of a non-specific immunomodulation therapy in chronic heart failure(ACCLAIM trial)：a placebo-controlled randomized trial〔J〕.Lancet，2008;371(9608)：228-36.

3Zhang Q，Hu LQ，Yin CS，etal.Catechin ameliorates cardiac dysfunction in rats with chronic heart failure by regulating the balance between Th17 and Treg cells〔J〕.Inflamm Res，2014;63(8)：619-28.

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5Wei Y，Zheng D，Li X，etal.Infusion of dendritic cells carrying donor lymphocytes treated with 8-methoxypsoralen and ultraviolet a light induces CD19(+)IL-10(+) regulatory B cells and promotes skin allograft Survival〔J〕.Transplant Proc，2014;46(10)：3641-6.

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〔2014-09-11修回〕

(編輯徐杰)