張華成

（浙江富陽(yáng)科興生物化工有限公司,浙江富陽(yáng) 311400）

獸藥殘留免疫學(xué)快速檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

張華成

（浙江富陽(yáng)科興生物化工有限公司,浙江富陽(yáng) 311400）

獸藥在降低畜禽發(fā)病率與死亡率，提高畜禽養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益方面發(fā)揮了巨大作用，但隨著獸藥品種和數(shù)量不斷增加，以及獸藥甚至違禁藥品在臨床中的大量濫用，獸藥蓄積在動(dòng)物機(jī)體及其動(dòng)物產(chǎn)品中造成獸藥殘留，由獸藥殘留導(dǎo)致的微生物耐藥性、生態(tài)環(huán)境毒性、食品安全等問(wèn)題日益受到重視。故加強(qiáng)獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)的研究與應(yīng)用對(duì)保障食品安全和人類(lèi)健康均具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。隨著現(xiàn)代免疫學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，獸藥殘留免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)日臻完善，本文就近年來(lái)針對(duì)獸藥殘留的酶聯(lián)免疫法、放射免疫分析法、電化學(xué)免疫方法、膠體金免疫層析法等免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)做一簡(jiǎn)要綜述，以期為我國(guó)獸藥殘留的快速檢測(cè)提供參考。

1 酶聯(lián)免疫法（ELISA）

ELISA是將抗原或抗體結(jié)合在固相載體表面，并使其保留免疫活性，再加入抗體或抗原與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物既有酶的活性特異性又具有與固相載體表面抗原或抗體特異性結(jié)合的活性，再加入酶的底物即可呈現(xiàn)出顏色反應(yīng)。王鶴佳等[1]利用尼卡巴嗪殘留標(biāo)志物作為抗原免疫動(dòng)物獲得特異性抗體，建立了雞肉中尼卡巴嗪殘留的ELISA檢測(cè)方法，該方法對(duì)雞肉中檢測(cè)限為9.2 μg/kg，在靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度方面均能滿(mǎn)足獸藥殘留快速篩選的檢測(cè)要求。ELISA方法檢測(cè)快速、操作簡(jiǎn)單，敏感性高、特異性強(qiáng)，已廣泛應(yīng)用于常見(jiàn)獸藥殘留的快速檢測(cè)。

2 放射免疫分析法

放射免疫分析法將微生物學(xué)與免疫學(xué)有效結(jié)合，具有分析成本低、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度快，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程大約20 min左右，特別適用于現(xiàn)場(chǎng)大量樣品的篩選。但該方法的放射性對(duì)人體和環(huán)境造成一定的危害，容易造成污染。周浩等[2]應(yīng)用放射免疫法檢測(cè)蜂蜜中四環(huán)素類(lèi)抗生素的殘留，該方法特異性強(qiáng)，與氯霉素、紅霉素、鏈霉素、青霉素G、磺胺嘧啶等其他族抗生素?zé)o交叉反應(yīng)，該方法與液相色譜質(zhì)譜法符合率達(dá)100 %，能達(dá)到檢測(cè)蜂蜜中四環(huán)素類(lèi)抗生素殘留的要求，為四環(huán)素類(lèi)抗生素殘留的快速檢測(cè)提供了一種很好的快速篩選方法。

3 電化學(xué)免疫方法

電化學(xué)免疫檢測(cè)方法測(cè)定快速、靈敏、經(jīng)濟(jì)、適合大規(guī)模生產(chǎn)，比較適合現(xiàn)代化畜產(chǎn)品檢測(cè)的需要。李孝君等[3]將玻碳電極表面氧化處理后，用戊二醛作交聯(lián)劑，將新亞甲藍(lán)及辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的青霉素多克隆抗體修飾到電極表面，制成了電流型青霉素免疫傳感器，并對(duì)雞肉中青霉素的殘留進(jìn)行了定量的檢測(cè)。結(jié)果表明，傳感器對(duì)雞肉中含有的青霉素最低檢出限為1.90ng/g，受交叉干擾和雞肉中其他成分干擾均較小。該方法具有操作簡(jiǎn)易、反應(yīng)快、靈敏度高、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，可用于實(shí)際肉樣中青霉素殘留量的測(cè)定。

4 化學(xué)發(fā)光免疫法

化學(xué)發(fā)光免疫法將免疫反應(yīng)的特異性與化學(xué)發(fā)光分析的靈敏性相結(jié)合，具有特異性好、靈敏度高、簡(jiǎn)便快速、標(biāo)記物有效期長(zhǎng)、無(wú)輻射、可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。馬玲等[4]利用制備的抗磺胺二甲嘧啶單克隆抗體建立了磺胺二甲嘧啶間接競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法，該方法批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為3.07 %和8.22 %，與磺胺脒等藥物無(wú)交叉反應(yīng)，與ELISA試劑盒的符合率為100 %?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法是免疫分析的重要發(fā)展方向，有逐步取代放射免疫和ELISA的趨勢(shì)。

5 時(shí)間分辨熒光免疫法

時(shí)間分辨熒光免疫分析方法采用稀土離子螯合物作為標(biāo)記物，通過(guò)時(shí)間分辨和波長(zhǎng)分辨，能夠有效降低背景熒光的干擾，具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、無(wú)放射性污染等優(yōu)點(diǎn)。李麗華等[5]將環(huán)丙沙星-卵清白蛋白包被于固相微孔板，利用銪標(biāo)羊抗兔IgG示蹤，建立環(huán)丙沙星時(shí)間分辨熒光免疫分析方法，該方法的檢測(cè)限為0.5 μg/L，批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為7.42 %和10.92 %，具有靈敏度高、特異性好、性能穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)，適于高通量篩查。時(shí)間分辨熒光免疫分析方法樣品處理簡(jiǎn)單、線性范圍相對(duì)較寬、可滿(mǎn)足實(shí)際樣品的檢測(cè)要求，可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)大批量樣品的篩查，具有一定的推廣應(yīng)用前景。

6 量子點(diǎn)熒光免疫法

量子點(diǎn)通過(guò)鏈霉親和素和生物素親和作用的抗體標(biāo)記技術(shù)在藥物檢測(cè)方面逐步得到應(yīng)用，楊杰等[6]將量子點(diǎn)同抗氧氟沙星抗體通過(guò)生物素-親和素系統(tǒng)進(jìn)行連接，建立了基于量子點(diǎn)的氧氟沙星間接熒光免疫檢測(cè)方法，該方法針對(duì)實(shí)際牛奶樣品中氧氟沙星抗生素殘留回收率測(cè)定結(jié)果為88.2 %～105.3 %，變異系數(shù)達(dá)7.3 %～10.9 %，可以替代傳統(tǒng)的ELISA方法應(yīng)用于牛奶中氧氟沙星抗生素殘留的實(shí)際測(cè)定中，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、便于推廣等優(yōu)點(diǎn)，是一種可用于不同藥物殘留的多重測(cè)定技術(shù)。

7 膠體金免疫層析法

膠體金免疫層析法以毛細(xì)作用使樣品溶液在纖維膜上泳動(dòng)，層析時(shí)膠體金標(biāo)記物與待測(cè)物的絡(luò)合物被相應(yīng)的配體捕獲而濃集顯色，以顯色條帶的有無(wú)即可進(jìn)行快速檢測(cè)。趙正苗等[7]應(yīng)用膠體金免疫層析法檢測(cè)動(dòng)物組織中殘留的呋喃西林代謝物，表明試紙條檢測(cè)限為1.0 μg/kg，假陽(yáng)性率小于5 %，假陰性率為0 %，對(duì)其他藥物無(wú)交叉反應(yīng)，特異性較好，對(duì)實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果與LCMS/MS法檢測(cè)結(jié)果一致。膠體金免疫層析方法具有操作簡(jiǎn)便、快速、直觀的特點(diǎn)，可作為篩選法對(duì)樣品進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速篩查。

8 結(jié)語(yǔ)

獸藥殘留與食品安全和人類(lèi)健康密切相關(guān)，故加強(qiáng)其檢測(cè)技術(shù)的研究與推廣應(yīng)用至關(guān)重要。免疫學(xué)技術(shù)檢測(cè)快速、操作簡(jiǎn)單、通量高，特別適合于基層現(xiàn)場(chǎng)的快速篩查。進(jìn)一步提高檢測(cè)的特異性和靈敏度，實(shí)現(xiàn)多種成分的同時(shí)檢測(cè)將是免疫學(xué)快速檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)。相信隨著免疫學(xué)技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展以及在藥物殘留檢測(cè)方面的不斷應(yīng)用，獸藥殘留免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)將具有更加廣闊的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用前景，為食品安全和人類(lèi)健康保駕護(hù)航。

[1] 王鶴佳，劉智宏，汪霞，等. 酶聯(lián)免疫法測(cè)定雞肉中尼卡巴嗪殘留[J].2014，48（3）：59-61.

[2] 周浩，李俊霞，楊紅，等. 蜂蜜中四環(huán)素類(lèi)抗生素的放射免疫法檢測(cè)[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā)，2012，33（11）：160-162.

[3] 李孝君，李蘭，馬潔，等. 電化學(xué)免疫法測(cè)定雞肉組織中青霉素[J].應(yīng)用化學(xué)，2009，26（6）：716-720.

[4] 馬玲，韋建興，陸忠礎(chǔ)，等. 磺胺二甲嘧啶間接競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法的建立及應(yīng)用[J]. 中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2014，26（5）：455-460.

[5] 李麗華，白瑞櫻，孫遠(yuǎn)明，等. 環(huán)丙沙星時(shí)間分辨熒光免疫分析方法的建立與應(yīng)用[J]. 食品科學(xué)，2012，33（8）：216-220.

[6] 楊杰，劉娜，劉琪，等. 量子點(diǎn)熒光免疫法快速測(cè)定氧氟沙星[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，28（6）：541-545.

[7] 趙正苗，羅曉琴，汪善良，等. 應(yīng)用膠體金免疫層析法檢測(cè)動(dòng)物組織中呋喃西林代謝物的殘留[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2012（5）：4-5.

張華成（1976-），男，浙江浦江人，漢族，本科，研究方向:獸醫(yī)獸藥。