文懷秀, 邵 赟, 王啟蘭， 陶燕鐸, 梅麗娟

(中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所 中國(guó)科學(xué)院藏藥研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 青海 西寧 810008)

不同產(chǎn)地及采收時(shí)間青海產(chǎn)野生寧夏枸杞葉片中總黃酮含量的比較

文懷秀, 邵 赟, 王啟蘭， 陶燕鐸, 梅麗娟①

(中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所 中國(guó)科學(xué)院藏藥研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 青海 西寧 810008)

寧夏枸杞(LyciumbarbarumLinn.)為茄科(Solanaceae)枸杞屬(LyciumLinn.)灌木，為著名的藥食兩用植物，其成熟果實(shí)為枸杞子，具有滋補(bǔ)肝腎和益精明目等功效[1]232；其葉也是傳統(tǒng)中藥之一，具有“除煩益志、補(bǔ)五勞七傷、壯心氣、除熱毒、散瘡腫和除風(fēng)明目”等功效，民間常用枸杞葉制作藥膳或藥飲。相關(guān)化學(xué)成分的研究結(jié)果表明：枸杞葉富含多種維生素、人體必需的氨基酸及礦質(zhì)元素，還含有黃酮類、萜類、甾類、生物堿及有機(jī)酸類等次生代謝成分[2-3]，其中，黃酮類化合物具有降血脂、降膽固醇、保肝抗炎以及雌激素樣作用[4]。寧夏枸杞葉片中的總黃酮含量與其清除DPPH·的能力呈極顯著正相關(guān)[5]；枸杞葉片提取物中的黃酮類成分可抑制動(dòng)物體內(nèi)MDA的產(chǎn)生，從而提高機(jī)體耐力并延緩疲勞的發(fā)生[6]。近年來，已有研究者對(duì)寧夏產(chǎn)枸杞葉片總黃酮的提取純化工藝等進(jìn)行了研究[7-10]，但對(duì)青海產(chǎn)寧夏枸杞葉的相關(guān)研究較少。

為此，作者對(duì)來源于青海不同產(chǎn)地及同一產(chǎn)地不同采收時(shí)間的野生寧夏枸杞葉片中的總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定和比較，以期確定青海產(chǎn)野生寧夏枸杞葉的最佳產(chǎn)地及最佳采收時(shí)間，為青海產(chǎn)寧夏枸杞資源的開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，也為進(jìn)一步擴(kuò)大黃酮類化合物藥源提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

供試寧夏枸杞葉片均于2011年采自青海省，具體產(chǎn)地和采收時(shí)間見表1。原植物經(jīng)中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所梅麗娟高級(jí)工程師鑒定。每個(gè)產(chǎn)地隨機(jī)選擇3株樣株，分別采集一定量的新鮮葉片，混合后陰干、研碎，過20目篩，待用。并分別于2011年6月至10月的各月上旬在海西州都蘭縣縣城采集供試葉片，首次采樣后對(duì)所有樣株進(jìn)行標(biāo)記，每月定株采集葉片，混合后陰干、研碎，過20目篩，待用。

主要儀器和試劑：Waters高效液相色譜儀(包括二元泵、手動(dòng)進(jìn)樣器、二極管陣列檢測(cè)器和柱溫箱，美國(guó)Waters公司)；L×J-D型離心沉淀機(jī)(漣水縣電訊電機(jī)廠)；RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；DZKW-C型電子恒溫水浴鍋(北京化玻聯(lián)醫(yī)療器械公司)。槲皮素、山柰酚和異鼠李素對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào)依次為100081-200906、110861-200908和110860-200905)，純度均在98%以上。色譜分析用甲醇為色譜純，水為純凈水，其他試劑均為分析純。

表1 供試青海產(chǎn)野生寧夏枸杞葉片的產(chǎn)地概況和采收時(shí)間

Table 1 Location status and collection time of leaf of wildLyciumbarbarumLinn. tested in Qinghai Province

1)1: 民和縣松樹鄉(xiāng)Songshu Township in Minhe County; 2: 樂都縣高廟鎮(zhèn)Gaomiao Town in Ledu County; 3: 樂都縣洪水鄉(xiāng)Hongshui Township in Ledu County; 4: 樂都縣崗溝鄉(xiāng)Ganggou Township in Ledu County; 5: 樂都縣高店鎮(zhèn)Gaodian Town in Ledu County; 6: 平安縣平安鎮(zhèn)Ping’an Town in Ping’an County; 7: 互助縣紅崖子溝鄉(xiāng)Hongyazigou Township in Huzhu County; 8,9: 互助縣塘川鎮(zhèn)Tangchuan Town in Huzhu County; 10,11: 互助縣五十鄉(xiāng)Wushi Township in Huzhu County; 12: 平安縣寺臺(tái)鄉(xiāng)Sitai Township in Ping’an County; 13: 互助縣丹麻鎮(zhèn)Danma Town in Huzhu County; 14: 都蘭縣香日德鎮(zhèn)Xiangride Town in Dulan County; 15-19: 都蘭縣縣城County town in Dulan County.

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 ThermoC18色譜柱 (250 mm × 4.6 mm， 5 μm)；流動(dòng)相為V(甲醇)∶V(體積分?jǐn)?shù)0.1%H3PO4)=50∶50，流速1 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm，柱溫30 ℃，靈敏度1.5 AUFS。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 分別取槲皮素、山柰酚和異鼠李素對(duì)照品適量，精密稱定后，用甲醇配制成槲皮素質(zhì)量濃度為40 μg·mL-1、山柰酚質(zhì)量濃度為40 μg·mL-1和異鼠李素質(zhì)量濃度為30 μg·mL-1的混合對(duì)照品溶液。分別吸取混合對(duì)照品溶液6、8、10、12、14 μL，按上述色譜條件進(jìn)行分析。以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行擬合。槲皮素標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=8 769 350 024X+1 302 599(r=0.999 3)，槲皮素含量在0.06～0.14μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；山柰酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=23 921 875 000X-5 635(r=0.999 7)， 山柰酚含量在0.06～0.14 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；異鼠李素標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=13 076 005 695X-162 182(r=0.999 9)，異鼠李素含量在0.054～0.126 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

1.2.3 樣品制備及色譜分析 取1 g樣品粗粉置于索氏提取器中，加約120 mL石油醚，回流2 h，棄去提取液；再加甲醇120 mL，回流提取4 h，提取液減壓濃縮至干；用V(甲醇)∶V(體積分?jǐn)?shù)25%HCl)=4∶1混合液30 mL溶解殘?jiān)⒅糜?0 ℃水浴中水解處理30 min；水解液用0.45 μm微孔濾膜過濾，并定容至50 mL，即得供試樣品溶液。按照上述色譜條件進(jìn)行分析，進(jìn)樣量10 μL。

1.3 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)樣品的峰面積、參照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中各黃酮類成分的含量；并參照文獻(xiàn)[1]297中的方法計(jì)算總黃酮含量(以總黃酮醇苷含量計(jì))，計(jì)算公式為：總黃酮含量=(槲皮素含量+山柰酚含量+異鼠李素含量)×2.51。

2 結(jié)果和分析

2.1 不同產(chǎn)地寧夏枸杞葉片中總黃酮含量的差異

采自青海不同產(chǎn)地的野生寧夏枸杞葉片中總黃酮含量的測(cè)定結(jié)果見表2。結(jié)果顯示：青海不同產(chǎn)地野生寧夏枸杞葉片中總黃酮含量有明顯差異，其中，采自都蘭縣縣城的葉片中總黃酮含量最高，達(dá)到3.443%；其次為采自都蘭縣香日德鎮(zhèn)的葉片，總黃酮含量也達(dá)到2.582%；采自樂都縣崗溝鄉(xiāng)的葉片中總黃酮含量最低，僅為0.127%。

表2 青海不同產(chǎn)地野生寧夏枸杞葉片中總黃酮含量的比較

Table 2 Comparison on total flavonoids content in leaf of wildLyciumbarbarumLinn. from different locations in Qinghai Province

1)1: 民和縣松樹鄉(xiāng)Songshu Township in Minhe County; 2: 樂都縣高廟鎮(zhèn)Gaomiao Town in Ledu County; 3: 樂都縣洪水鄉(xiāng)Hongshui Township in Ledu County; 4: 樂都縣崗溝鄉(xiāng)Ganggou Township in Ledu County; 5: 樂都縣高店鎮(zhèn)Gaodian Town in Ledu County; 6: 平安縣平安鎮(zhèn)Ping’an Town in Ping’an County; 7: 互助縣紅崖子溝鄉(xiāng)Hongyazigou Township in Huzhu County; 8,9: 互助縣塘川鎮(zhèn)Tangchuan Town in Huzhu County; 10,11: 互助縣五十鄉(xiāng)Wushi Township in Huzhu County; 12: 平安縣寺臺(tái)鄉(xiāng)Sitai Township in Ping’an County; 13: 互助縣丹麻鎮(zhèn)Danma Town in Huzhu County; 14: 都蘭縣香日德鎮(zhèn)Xiangride Town in Dulan County; 15: 都蘭縣縣城County town in Dulan County.

2.2 不同采收時(shí)間寧夏枸杞葉片中總黃酮含量的差異

6月份至10月份采自青海省都蘭縣縣城的野生寧夏枸杞葉片中總黃酮含量的測(cè)定結(jié)果見表3。結(jié)果顯示：不同采收時(shí)間野生寧夏枸杞葉片中總黃酮含量有明顯差異，其中，6月份總黃酮含量最高，達(dá)到3.443%；10月份最低，僅為1.479%；總體上看，青海產(chǎn)野生寧夏枸杞葉片中總黃酮含量隨采收時(shí)間的延后(6月份至10月份)呈逐漸降低的趨勢(shì)。

表3 不同采收時(shí)間青海產(chǎn)野生寧夏枸杞葉片中總黃酮含量的比較

Table 3 Comparison on total flavonoids content in leaf of wildLyciumbarbarumLinn. from Qinghai Province at different collection times

3 討論和結(jié)論

本研究涉及的15個(gè)野生寧夏枸杞產(chǎn)地主要分布在青海省的海東地區(qū)(1至13號(hào)樣品)和海西地區(qū)(14和15號(hào)樣品)，這2個(gè)區(qū)域的野生寧夏枸杞葉片中的總黃酮平均含量分別為0.689%和3.012%，差異達(dá)顯著水平，這一現(xiàn)象可能與這2個(gè)區(qū)域的氣候條件和土質(zhì)等環(huán)境因素的差異有關(guān)。海西地區(qū)地處柴達(dá)木盆地，該地是青海產(chǎn)野生寧夏枸杞中心分布區(qū)之一[11]，獨(dú)特的土壤和氣候條件特別適合寧夏枸杞生長(zhǎng)，也有利于野生寧夏枸杞中次生代謝產(chǎn)物的合成和積累；而海東地區(qū)的13個(gè)產(chǎn)地相對(duì)較集中，也是青海省人口分布較為密集的地區(qū)，且本研究的采樣點(diǎn)多在公路沿線，寧夏枸杞的生長(zhǎng)環(huán)境受較大干擾，有可能導(dǎo)致野生寧夏枸杞葉片中總黃酮含量相對(duì)較低。另外，本研究所選的產(chǎn)地海拔落差較大，各產(chǎn)地間海拔落差最大可達(dá)到1 340 m，但進(jìn)一步的分析結(jié)果顯示野生寧夏枸杞葉片中總黃酮含量與產(chǎn)地海拔并無直接的相關(guān)性。此外，在青海海西地區(qū)都蘭縣縣城，6月份和7月份采收的野生寧夏枸杞葉片中總黃酮含量較高，10月份采收的最低。筆者的前期研究結(jié)果[12]也顯示西寧市的寧夏枸杞葉片總黃酮含量在入秋后呈下降趨勢(shì)。

綜合分析結(jié)果表明：產(chǎn)自青海海西地區(qū)的野生寧夏枸杞葉片中總黃酮含量較高，且以6月份和7月份為最佳采收期。青海海西地區(qū)的野生寧夏枸杞分布面積大、結(jié)果率較低，目前其果實(shí)和葉片尚處于自然生長(zhǎng)和凋落的狀態(tài)，資源并未得到有效利用。因而，本研究結(jié)果可為青海海西野生寧夏枸杞的進(jìn)一步開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典: 2010年版(一部)[M]. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010.

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(責(zé)任編輯: 張明霞)

Comparison on total flavonoids content in leaf of wildLyciumbarbarumat different locations and collection times in Qinghai Province

WEN Huaixiu, SHAO Yun, WANG Qilan, TAO Yanduo, MEI Lijuan①

(Key Laboratory of Tibetan Medicine Research, Northwest Institute of Plateau Biology, Chinese Academy of Sciences, Xining 810008, China),

J.PlantResour. &Environ., 2015, 24(1): 107-109

Total flavonoids content in leaf of wildLyciumbarbarumLinn. from June to October at 15 locations from Haidong and Haixi districts in Qinghai Province was determined. The results show that there are obvious differences in total flavonoids content in leaf of wildL.barbarumat different locations and collection times. Total flavonoids content in leaf from 15 locations is 0.127%-3.443%, inwhichthatfromcountytownand Xiangride Town in Dulan County reaches 3.443% and 2.582%, respectively. Total flavonoids content in leaf from county town in Dulan County decreases gradually with delaying of collection time, that is higher in June and July (3.443% and 3.382%, respectively) and is the lowest in October (only 1.479%). The comprehensive analysis result shows that total flavonoids content in leaf of wildL.barbarumfrom Haixi District in Qinghai Province is higher, and the best collection time is June and July.

寧夏枸杞; 葉片; 產(chǎn)地; 采收時(shí)間; 總黃酮含量

LyciumbarbarumLinn.; leaf; location; collection time; total flavonoids content

2014-05-14

青海省“123”科技支撐工程項(xiàng)目(2012-G-Q08A-6)

文懷秀(1981—)，女，青海平安人，碩士，助理研究員，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)方面的研究。

①通信作者E-mail: meilijuan111@163.com

S567.1+9; R284

A

1674-7895(2015)01-0107-03

10.3969/j.issn.1674-7895.2015.01.15