陳正林

（安龍縣動物疫病預防控制中心，貴州安龍 550024）

畜禽血液采集、血清分離及保存技術

陳正林

（安龍縣動物疫病預防控制中心，貴州安龍 550024）

隨著畜禽養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，交通運輸便利，畜禽交易半徑擴大，畜禽疾病流行機會增加，提高了動物疫病防控難度。在疫病防控工作中，僅靠流行病學、臨床癥狀、病理剖檢等手段已經(jīng)不能對疫病做出準確的診斷，獸醫(yī)實驗室診斷技術已成為判定動物疫病的重要依據(jù)。各級加強了獸醫(yī)實驗室能力建設，對動物血液樣品的采集、制備與保存有較高的要求，所以，畜禽血液的采集、血清的規(guī)范分離、保存是獲得準確的實驗室診斷、監(jiān)測結(jié)果、疾病確診的基礎，對及時做出診斷結(jié)論，迅速采取相應防控措施，撲滅疫情和控制疫情至關重要，同時，進行免疫效果監(jiān)測，評估畜禽群體免疫抗體水平，及時為養(yǎng)殖戶提供免疫技術指導，加強畜禽疫病免疫工作，保護養(yǎng)殖安全具有重要意義。

1 采血用具準備

止血鉗2把（消毒）、毛剪2把（消毒）、酒精、碘酒、棉球、一次性采血器（10 ml）或真空采血管（含有抗凝劑，使用量根據(jù)采血數(shù)量準備）、1.5～2 ml彈頭離心管、膠布、記號筆1支、口罩、白大褂、瓷盤（消毒）、消毒藥等。

2 畜禽血液的采集方法

采血過程中應嚴格保持無菌操作。

2.1 牛、羊血液的采集方法

2.1.1 牛、羊頸靜脈采血

將被采血動物保定，稍抬頭頸，于經(jīng)脈溝上1/3與中1/3交界部剪毛消毒，一手拇指按壓采血部位下方頸靜脈溝血管，使靜脈怒張，另一手持針頭，與皮膚呈45°，由下向上斜刺入，插入真空采血管，待血量達到要求后，拔下針頭，用消毒棉球按壓針眼，輕按止血，立即將采血管輕輕倒置使血液與抗凝劑混合，靜置15 min，待血液凝固后分離血清。

2.1.2 牛尾靜脈采血

固定牛，使牛尾往上翹，在尾部約30 cm處用手握住，離尾根10 cm左右中點凹陷處，先用酒精棉球消毒，然后將采血針垂直刺入（約1 cm深），針頭觸及尾骨后再退出1 mm進行抽血，采血結(jié)束，消毒并按壓止血。

2.2 豬血液的采集方法

2.2.1 耳靜脈采血

耳靜脈采血 一般用于體格較大的豬。保定后，耳部消毒滅菌，以手指壓迫心端耳部靜脈，使血管怒張，針頭刺入血管采集血液。針頭刺入血管后，動作要輕柔，采血要緩慢，否則血液不回流使靜脈癟陷而采不到血液。

2.2.2 前腔靜脈采血

前腔靜脈采血方法，比耳靜脈采血節(jié)約時間，而且采出的血樣衛(wèi)生干凈。豬的大小不同，前腔靜脈的深淺不一樣，要求使用的針頭是不一樣的，針頭太短，刺不到前腔靜脈，針頭太長，則可能刺穿前腔靜脈，采不到血。一般75～100 kg公母豬宜選用16#×40 mm針頭；30 kg以上的中大豬，宜選用12#×30 mm針頭；10～30 kg小豬，可選用12#×25 mm；10 kg以下乳豬，應選擇9#×20 mm針頭。

豬只的固定：豬用保定繩固定，要求盡可能吊得高一點，使豬的頭頸與水平面呈30°以上角度，方便采血人員察看采血部位，使前腔靜脈向外突出，靜脈充脹。25 kg以上的中大豬，由1～2個飼養(yǎng)員用捉豬器（或保定繩）拉住，頭昂起，偏向右側(cè)；20 kg以下的小豬，可由1～2個飼養(yǎng)員抓起，倒立，后背緊靠在保定臺上，按住頭部和四肢。

采血部位：豬的前腔靜脈，越往頭部越淺，但也越細，越靠胸部越粗，但也越深，所以，采血應選擇適當?shù)牟课?，小豬采血的部位太靠前，血管太小，很難扎中，而且扎中了也很難抽到血液，所以，小豬的采血部位應稍靠后。中大豬和公母豬血管比較大，往后太深，針頭夠不到血管，所以，應略靠前。根據(jù)經(jīng)驗，25 kg以下的小豬采兩前肢與氣管交匯處，25 kg以上中大豬可選頸部最低凹處，對準下針部位，使針頭偏向氣管約15°方向下針，拉緊針筒活塞，若扎中，可見血液流出。在工作中，操作熟練后，針頭有沒有扎中，憑手是可以感覺得到的，當針頭扎破靜脈壁時，可以感覺得到輕微“卟”的一聲。

2.3 雞血液的采集方法

在工作中常用的有心臟采血法和翅靜脈采血法

2.3.1 雞心臟采血法

右側(cè)臥保定，在左側(cè)胸部觸摸心搏動最明顯的地方進行穿刺，連接注射器采取血液。成年雞心臟穿刺部位從胸骨峭前端至背部下凹處連接線的1/2處，用細針頭在穿刺部位與皮膚垂直刺入約2～3 cm即可。家禽品種和個體大小不同進針位置和深度不同要作適當調(diào)整。心臟采血可大量采血，但不宜連續(xù)使用，因有一定的死亡率。

2.3.2 雞翅靜脈采血法

翅靜脈位于家禽翅膀下，此靜脈明顯易找，可采血10～20 ml，操作方便，單人即可完成，采血量極易控制，止血徹底，對家禽影響小。方法是技術人員右手持注射器或采血針，左手將家禽雙翅提起，露出翅靜脈的采血位置，把覆蓋血管的羽毛拔開，即可見到明顯一條較粗的靜脈血管。采血時用左手大拇指夾住覆蓋靜脈的羽毛，食指協(xié)調(diào)大拇指夾住雙翼，中指、無名指和手掌輕輕提起或輕按背部保定雞只，待其安靜方可刺針，針頭在距靜脈血管0.3～0.5 cm一旁傾斜刺入皮膚，再與血管平行進針0.2～0.4 cm后刺入血管，見有少量回血即可采集血液，采血完成后馬上用手壓迫止血。

3 血清的分離及保存

3.1 血清分離

在采血器內(nèi)加入適量的抗凝劑或直接選擇抗凝管，采血后，輕輕倒置采血器，使抗凝劑與血液充分混勻，將采集的血液樣品置室溫0.5 h，待血液凝固后用離心機2 000～3 000 r/min離心5～10 min分離血清，上清液即為血清，用干凈吸管收集血清于清潔無菌的1.5～2 ml彈頭離心管中，貼上標簽備用。如血清溶血嚴重，應剔出樣品。

3.2 血液樣品的保存與運輸

（1）若能在4 h內(nèi)送到實驗室，可用保溫箱冰袋冷藏運輸。如果超過4 h，要作冷凍處理，應先將樣品置于-20 ℃凍結(jié)，然后再在保溫箱內(nèi)加冰袋運輸，經(jīng)凍結(jié)的樣品必須在24 h內(nèi)送到。

（2）樣品置于保溫容器中運輸，保溫容器必須密封，防止?jié)B漏，保溫容器外貼封條，封條有貼封人（單位）簽字（蓋章），并注明貼封日期。

4 采血、分離血清注意事項

（1）采血前，應事先通知被采血單位或農(nóng)戶，做好清潔衛(wèi)生、消毒工作，準備好被采血動物。

（2）認真填寫動物疫病檢（監(jiān)）測采樣表。

（3）采血用的試管必須清潔無菌，最好用一次性真空采血管，每采集一頭（只）動物，必須更換采血針頭。

（4）每頭（只）動物采血量必須在3 ml以上，采完血的試管必須按規(guī)定編號，然后靜置10～15 min，使血液凝固，才能帶走。

（5）在血清還沒有析出前，不能把所采血液放入冰箱，以免紅細胞破裂發(fā)生溶血現(xiàn)象，待血清析出或分離后，要在24 h內(nèi)把血清倒入1.5～2 ml彈頭離心管內(nèi)，并按原編號編好號，若不能立即做檢（監(jiān)）測試驗，把分離好的血清冷凍保存。