周 輝，陳小蘭

(衢州市柯城區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科，浙江 衢州 324000)

宮頸病變患者HPV-DNA、IL-17檢測(cè)的臨床意義及其相關(guān)性

周 輝，陳小蘭

(衢州市柯城區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科，浙江 衢州 324000)

目的 探討宮頸病變患者人乳頭狀瘤病毒DNA(HPV-DNA)、白細(xì)胞介素17(IL-17)檢測(cè)的臨床意義及其相關(guān)性。方法 2011年5月至2013年5月從衢州市柯城區(qū)婦幼保健院收治的宮頸病變患者中隨機(jī)選擇60例檢測(cè)其宮頸組織中HPV-DNA和IL-17含量。結(jié)果 60例宮頸病變患者中，HPV呈陰性的患者占41.67%(25/60)，陽(yáng)性占30.00%(18/60)，其余28.33%(17/60)為宮頸癌患者，3組構(gòu)成比無(wú)顯著性差異(χ2=12.21，P>0.05)。HPV陽(yáng)性組和宮頸癌組的IL-17水平均顯著高于陰性組(t=8.11，11.13，P<0.05)，陽(yáng)性組和宮頸癌組比較，無(wú)顯著性差異(t=2.15，P>0.05)。結(jié)論 IL-17和宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有一定相關(guān)性，臨床對(duì)宮頸癌進(jìn)行診斷和治療以及預(yù)后判斷時(shí)，可以積極的對(duì)患者進(jìn)行高危HPV聯(lián)合IL-17水平檢測(cè)。

宮頸病變；人乳頭狀瘤病毒DNA；白細(xì)胞介素17；相關(guān)性

宮頸病變是婦科疾病中常見(jiàn)的疾病，其對(duì)女性生殖健康危害較大。因此，有效的檢測(cè)方法對(duì)提高此病診斷、治療和預(yù)后效果至關(guān)重要[1-2]。本研究通過(guò)對(duì)60例宮頸病變患者進(jìn)行檢測(cè)人乳頭狀瘤病毒DNA(humna panillmoa virus DNA, HPV-DNA)、白細(xì)胞介素17(interleukin 17, IL-17)含量，以探討兩者的臨床意義及其相關(guān)性。

1 材料和方法

1.1 材料

從衢州市柯城區(qū)婦幼保健院2010年5月至2013年5月收治的宮頸病變患者中隨機(jī)選擇60例進(jìn)行研究，年齡19 ～ 68歲，平均年齡49.12±2.33 歲。研究獲得醫(yī)學(xué)倫理學(xué)相關(guān)部門(mén)同意，所有患者均了解研究情況，并簽署知情同意書(shū)，自愿參與研究。利用一次性宮頸細(xì)胞取樣器進(jìn)行取樣，取樣之前要將患者宮頸口過(guò)多的分泌物擦拭干凈，然后將取樣器插入患者子宮頸外口，轉(zhuǎn)動(dòng)5圈之后將取樣器緩慢取出。并放入含有保存液的小瓶中，折斷多余刷柄，并旋緊管蓋，標(biāo)注編號(hào)之后立即送檢。

1.2 方法

使用的儀器為全自動(dòng)流式細(xì)胞分析儀(購(gòu)自美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司，型號(hào)FC 500 MCL/MPL)，DA7600擴(kuò)增儀，試劑為配套的IL-17PE試劑以及人乳頭瘤病毒(HPV)核酸擴(kuò)增(PCR)熒光檢測(cè)試劑盒(購(gòu)自深圳康生保生物技術(shù)有限公司，S20060039)。

1.2.1 制備標(biāo)本

將200μL宮頸脫落細(xì)胞懸液加入20μL熒光標(biāo)記抗體IL-17之中，充分振蕩混合均勻之后，置于避光、室溫條件下進(jìn)行孵育。20min之后 用0.1mol pH 7.0 PBS×2mL，離心、洗滌，棄去上清液之后，加入500μL PBS充分振蕩混合均勻之后，制成懸浮細(xì)胞備用。

1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定

利用全自動(dòng)流式細(xì)胞儀的CELLQuest功能獲得數(shù)據(jù)分析，以波長(zhǎng)512nm，15mW的氬離子激光作為光源，利用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球進(jìn)行儀器校對(duì)之后，保持半峰變異系數(shù)小于2%。利用前向角散射光對(duì)側(cè)向角散射點(diǎn)圖來(lái)對(duì)淋巴細(xì)胞群進(jìn)行確定，得出IL-17 PE的表達(dá)，并以百分比表示。同期，利用同一患者的宮頸細(xì)胞標(biāo)本，不予處理，進(jìn)行自身陰性對(duì)照。

1.2.3 人乳頭狀瘤病毒DNA檢測(cè)

利用多重PCR法進(jìn)行HPV-DNA檢測(cè)。取適量宮頸脫落細(xì)胞，進(jìn)行5min的13 000rpm離心，棄去上清液之后，加入DNA提取液50μL，并置于100℃環(huán)境下進(jìn)行10min干浴。然后進(jìn)行10min的13 000rpm離心。取上清液進(jìn)行PCR擴(kuò)增，不同溫度下的反應(yīng)條件分別為：50℃、2min，95℃、10min，1循環(huán)；95℃、15s，52℃、30s，62℃、60s，40循環(huán)。 以36為臨界陽(yáng)性Ct值，利用儀器分析樣本的Ct值，并按照說(shuō)明書(shū)上的方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)研究所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)一的錄入和分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，并用 表示，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05定為結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 人乳頭狀瘤病毒檢測(cè)結(jié)果分析

在60例宮頸病變患者中，HPV呈陰性的患者占41.67%(25/60)，陽(yáng)性占30.00%(18/60)，其余28.33%(17/60)為宮頸癌患者，3組構(gòu)成比無(wú)顯著性差異(χ2=12.21，P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 HPV檢測(cè)結(jié)果

Table 1 Results of HPV detecting

2.2 白細(xì)胞介素17水平分析

將患者按照HPV檢測(cè)結(jié)果分為陽(yáng)性組和陰性組以及宮頸癌組，檢測(cè)其IL-17水平可得，陽(yáng)性組和宮頸癌組的IL-17水平顯著高于陰性組(t=8.11，11.13，均P<0.05)，陽(yáng)性組和宮頸癌組比較，無(wú)顯著性差異(t=2.15，P>0.05)，見(jiàn)表2。

注：▲為與陰性組比較，P<0.05。

3 討論

3.1 人乳頭狀瘤病毒DNA與宮頸癌

宮頸的人乳頭瘤病毒(humna panillmoa virus，HPV)感染是誘發(fā)宮頸癌的重要因素之一，大多數(shù)宮頸癌患者均可檢測(cè)到HPV。因此，HPV檢測(cè)是臨床篩查宮頸癌有效方法。多數(shù)女性一生中可感染HPV，但并非所有的HPV感染都會(huì)導(dǎo)致宮頸癌的出現(xiàn)。HPV按照其致病力可分為高危和低危兩種類(lèi)型。其中，高危HPV大多會(huì)導(dǎo)致宮頸癌，而低危HPV導(dǎo)致的一些感染大多屬于“一過(guò)性”，會(huì)導(dǎo)致扁平濕疣等[3]。

3.2 人乳頭狀瘤病毒DNA和白細(xì)胞介素17應(yīng)用于宮頸病變的檢測(cè)

IL-17是一種前炎癥細(xì)胞因子，它是由Th17細(xì)胞高水平分泌，和其他一些細(xì)胞亞群，例如Th1、Th2還有Treg存在較大的差異[4]。研究發(fā)現(xiàn)，IL-17會(huì)誘發(fā)涉于炎癥相關(guān)的多種趨化因子和細(xì)胞因子的產(chǎn)生，因此具有較強(qiáng)的促炎作用，和人體很多炎癥性疾病以及自身免疫疾病之間存在較為密切的關(guān)系。

本研究中選擇了60例宮頸病變患者進(jìn)行研究，檢測(cè)其HPV-DNA、IL-17含量，研究結(jié)果顯示，IL-17在HPV陽(yáng)性患者以及宮頸癌患者中的表達(dá)顯著高于HPV陰性組(P<0.05)，提示IL-17的高表達(dá)可能參與了宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展。分析原因，一方面是因?yàn)镮L-17 可以促腫瘤血管的生成；另一方面，IL-17并不直接促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，但會(huì)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移產(chǎn)生促進(jìn)作用，從而使得由成纖維細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞生成的前血管生成因子表達(dá)明顯上調(diào)。另外，IL-17還可以對(duì)腫瘤細(xì)胞表達(dá)IL-6產(chǎn)生較強(qiáng)的刺激，從而誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞募集，并對(duì)腫瘤細(xì)胞表型進(jìn)行調(diào)節(jié)，促使其生長(zhǎng)快速一致[5]。有學(xué)者報(bào)道IL-17具有促腫瘤血管生成的作用有關(guān)，也與IL-17雖然不直接促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，但可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，明顯上調(diào)由成纖維細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞生成的前血管生成因子表達(dá)和IL-17通過(guò)刺激腫瘤細(xì)胞表達(dá)IL-6，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞募集及調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞表型，使其生長(zhǎng)快速[6]，這與與本研究結(jié)果IL-17在宮頸癌組和HPV陽(yáng)性組表達(dá)增高一致，提示IL-17的高表達(dá)參與了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，其在宮頸癌的診斷、治療及預(yù)后判斷方面具有一定的價(jià)值。

綜上所述，IL-17和宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有一定的相關(guān)性，對(duì)宮頸病變患者應(yīng)進(jìn)行高危HPV聯(lián)合IL-17水平檢測(cè)，以提供宮頸癌在早診斷率。

[1]張哲雄,徐承來(lái),曹永濤,等.高危型人乳頭狀病毒和IL-17在宮頸病變患者宮頸脫落細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性和臨床意義[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2012,16(2):252-254.

[2]Salih M M,Sail M E,Hart K,elal.Genotypes of human papilloma virus in Sudanese women with cervical pathology[J].Infect Agent Cancer,2010,5:26.

[3]康慧杰,王金桃,高晨菲,等.DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1與甲基-CpG-結(jié)合蛋白2異常表達(dá)在宮頸病變中的作用及相互關(guān)系[J].中華流行病學(xué)雜志,2013,34(12):1223-1227.

[4]蘇艷霞.北京密云地區(qū)婦女宮頸病變與人乳頭瘤病毒感染相關(guān)性研究[J].中國(guó)婦幼健康研究,2012,23(2):232-234.

[5]唐艷,張靜,房春玉,等.豐臺(tái)區(qū)已婚婦女宮頸病變與HPV感染的分析[J].中國(guó)婦幼健康研究,2011,22(4):418-419,422.

[6]Dogan N U, Salman M C, Yuce K.The role of HPV DNA testing in the follow-up of cervical intraepithelial neoplasia after loop electrosurgical excision procedure[J].Arch Gynecol Obstet,2011,283(4):871-877.

[專(zhuān)業(yè)責(zé)任編輯：安瑞芳]

Clinical significance of detecting HPV-DNA and IL-17 in patients with cervical lesion and their correlation

ZHOU Hui, CHEN Xiao-lan

(DepartmentofLaboratory,MaternalandChildHealthHospitalofKechengDistrictinQuzhouCity,ZhejiangQuzhou324000,China)

Objective To explore the clinical significance of human papilloma virus DNA (HPV-DNA) and interleukin 17 (IL-17) detecting among patients with cervical lesions and their correlation. Methods Sixty cases of cervical lesions were selected from the patients admitted in Maternal and Child Health Hospital of Kecheng District in Quzhou City from May 2011 to May 2013, and HPV-DNA and IL-17 contents of them were detected. Results HPV was negative in 41.67% of patients (25/60), HPV was positive in 30.00% (18/60), and the rest were cases of cervical cancer. There was no significant difference in percentage (χ2=12.21,P>0.05). IL-17 level of HPV positive group and that of cervical cancer group was significantly lower than that of HPV negative group (tvalue was 8.11 and 11.13, respectively, bothP<0.05), but there was no significant difference in the level of IL-17 between HPV positive group and cervical cancer group (t=2.15,P>0.05).Conclusion There is certain correlation between IL-17 level and the development of cervical cancer. Detecting of high risk HPV combined with IL-17 level could be done actively at diagnosis, treatment and prognosis judgment of cervical cancer.

cervical lesions; humna panillmoa virus DNA (HPV-DNA); interleukin 17 (IL-17); correlation

2014-03-18

周輝(1982-)，女，檢驗(yàn)師，主要從事臨床檢驗(yàn)研究。

陳小蘭，副主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.04.073

R711.7

A

1673-5293(2015)04-0861-02