達熱瑪

(青海省海北州祁連縣八寶鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,青海祁連 810499)

牛病毒性腹瀉病毒的綜合診斷和防控

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(青海省海北州祁連縣八寶鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,青海祁連 810499)

牛病毒性腹瀉病毒是危害養(yǎng)牛業(yè)的重要病毒性傳染病，該病毒主要感染犢牛，成年牛也可以感染發(fā)病，牛病毒性腹瀉病毒具有潛伏感染和免疫耐受的特征，從而對本病的綜合診斷提出了更高要求。本文主要綜述了牛病毒性腹瀉的臨床癥狀、病理變化、實驗室診斷方法及防控措施，為基層養(yǎng)殖場的飼養(yǎng)管理與疫病防治提供參考。

牛病毒性腹瀉病毒 綜合診斷 防控

牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）屬于黃病毒科（Flaviviridae）瘟病毒屬（Pestivirus），該病毒呈世界性分布，世界上許多養(yǎng)牛的國家和地區(qū)都有本病發(fā)生的報道[1]。BVDV的宿主范圍廣泛，豬、牛、羊、駱駝都可以感染本病毒，感染動物和帶毒動物是本病的傳染源，病毒主要通過呼吸道和消化道感染傳播，有些病牛呈潛伏感染狀態(tài)，該病毒可以通過胎盤垂直傳播[2]。持續(xù)性感染和免疫耐受是本病的重要特征，這一特征給本病的診斷、檢疫及防控均造成很大困難。該病的診斷方法很多，常用的檢測方法有常規(guī)的病毒分離培養(yǎng)、中和試驗等方法，常規(guī)檢測方法費時較長，特異性和敏感性不好，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，新型的檢測方法逐漸應(yīng)用到牛病毒性腹瀉病毒的檢測中，現(xiàn)將該病毒的綜合診斷和防控措施介紹如下：

1 臨床癥狀

牛病毒性腹瀉的發(fā)病率在5 %左右，死亡率在90 %以上，發(fā)病牛在3月齡到18月齡居多，發(fā)病牛主要表現(xiàn)為體溫升高至40℃～42 ℃，精神沉郁，少食，鼻眼有黏性分泌物，典型的臨床癥狀為水樣腹瀉，嚴重的可帶有血便。有的病牛出現(xiàn)腐蹄和跛行。本病常常可以引起免疫抑制，呈急性感染狀態(tài)，病毒感染導(dǎo)致淋巴組織破壞，免疫功能損傷，因而增強了其他病原體的致病性。與細菌性腹瀉鑒別主要通過大便常規(guī)檢查，細菌性腹瀉有白細胞和膿細胞，同時可以進行細菌分離培養(yǎng)進行鑒別。

2 病理變化

剖檢可見病牛消瘦，消化道黏膜充血、出血，腸系膜淋巴結(jié)水腫增大，盲腸和結(jié)腸黏膜充血、出血。急性BVDV 感染可見胃腸道、體表和呼吸道的表皮損傷。

3 綜合診斷方法

牛病毒性腹瀉疾病的診斷可以通過臨床癥狀與病理變化做出初步診斷，但最后確診還要借助分子生物學(xué)等實驗室診斷方法。

3.1 RT-PCR檢測方法

季新成[3]等針對不同基因型BVDV基因組高度保守的5’端非編碼區(qū)核苷酸序列，設(shè)計特異性引物（擴增長度為288 bp），同時為了指示假陰性結(jié)果，以牛GAPDH基因為內(nèi)標基因，設(shè)計特異性引物（擴增序列長度為152 bp）。通過RT-PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化，建立了BVDV通用型內(nèi)標雙重RT-PCR檢測方法，該方法可以監(jiān)測RNA 提取與RT-PCR反應(yīng)過程，指示假陰性結(jié)果的發(fā)生。該方法的檢測靈敏度約為102TCID50/ml，且具有較好的特異性和可重復(fù)性。通過對566份臨床樣品檢驗，檢測到陽性樣品19份，陽性率為3.36 %。該方法可用于臨床樣品中BVDV檢測，并可對檢測結(jié)果進行質(zhì)量控制。

3.2 熒光定量RT-PCR檢測方法

韓猛立[4]等根據(jù)BVDV 5’端非編碼區(qū)核苷酸序列，軟件分析后設(shè)計特異性擴增引物，建立了一種快速定量檢測BVDV的實時熒光定量RT-PCR方法。該方法檢測豬瘟病毒、牛傳染性鼻氣管炎病毒、牛輪狀病毒及牛冠狀病毒沒有交叉反應(yīng)，具有高度的特異性；在102～108拷貝/μl模板范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，所制作的標準曲線相關(guān)系數(shù)為0. 998，最低可檢測下限可達到102拷貝/ μl，具有靈敏度高的特點；不同情況下進行3次重復(fù)檢測，變異系數(shù)均小于1.5 %，具有重復(fù)性好的特點。該檢測方法可用于臨床樣品的檢測，適用于BVDV 的臨床快速診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

3.3 抗原捕獲ELISA檢測方法

范晴[5]等用兔抗BVDV多抗作為包被抗體，BVDV NS3單克隆抗體作為捕獲抗體，建立了檢測BVDV抗原的捕獲ELISA方法，該方法對牛輪狀病毒、牛傳染性鼻氣管炎病毒、牛分枝桿菌無特異性交叉反應(yīng)，其最低可檢測7.9×103個TCID50的病毒含量，與常規(guī)RT-PCR方法相比較，符合率為100 %。BVDV抗原捕獲ELISA方法快速、特異、敏感，可用于BVDV抗原的快速檢測。

3.4 RT-LAMP檢測方法

范晴[6]等根據(jù)BVDV的5’端非編碼區(qū)序列，分別在保守區(qū)的8個位點設(shè)計LAMP特異性引物（2對特異性引物和1對環(huán)引物），對反應(yīng)條件和試劑濃度進行優(yōu)化，建立了BVDV的RT-LAMP快速檢測方法。該方法特異性好，檢測其他對照病毒均為陰性；靈敏度高，最低可檢測到1個拷貝的陽性質(zhì)粒，可通過觀察渾濁度或加入染料后直接判定擴增結(jié)果。該方法簡便、快速、特異性好、靈敏度高，適合基層和現(xiàn)場檢測。

4 防控措施

BVDV預(yù)防的關(guān)鍵在于加強牛的日常飼養(yǎng)管理。新生犢牛的飼養(yǎng)首先要保證出生后半小時內(nèi)吃到初乳，這對新生犢牛極其重要，定時定量喂養(yǎng)，保持舍內(nèi)溫度，衛(wèi)生，防止消化道疾病發(fā)生，加強新生牛的飼養(yǎng)管理。懷孕母牛的飼料配比要適當，保證蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)和維生素含量，保持良好的營養(yǎng)水平，保證產(chǎn)后乳汁分泌良好，牛舍環(huán)境要清潔、干燥，衛(wèi)生，定期消毒。母牛產(chǎn)犢過程中的分泌物，排泄物要及時清除，徹底打掃衛(wèi)生和消毒。該病目前無特效藥，一旦感染發(fā)病只能對癥輔助治療，同時給予抗病毒的藥物輔助治療，增強病牛的抵抗力。目前，國際上用于BVD的防控措施主要是鑒別和撲殺持續(xù)性感染動物，其次是疫苗免疫[7]。國內(nèi)本病的防控建議根據(jù)不同牛場的規(guī)模、養(yǎng)殖密度、血清抗體陽性率情況制定不同的防疫對策。在牛養(yǎng)殖密度低、BVDV抗體陽性率低的地方，禁用弱毒疫苗，定期監(jiān)測牛血清抗體，逐步淘汰隱性感染牛。在牛養(yǎng)殖密度高、BVDV抗體陽性率高的地方，可以通過疫苗免疫控制疫病暴發(fā)流行，對發(fā)病牛要及時隔離治療，逐步淘汰達到牛場逐步凈化的目標。

[1] 王龍，梁霄勇，季新成，等. 新疆部分地區(qū)牛病毒性腹瀉病毒的分離、鑒定及分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，52（2）：334-338.

[2] 姚偉.遼寧地區(qū)規(guī)?；膛雠２《拘愿篂a-黏膜病血清學(xué)調(diào)查[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2015，（4）：36-40.

[3] 季新成，段琛，王克棟，等. 牛病毒性腹瀉病毒內(nèi)標雙重RTPCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用[J]. 動物醫(yī)學(xué)進展，2014，35（1）：17-21.

[4] 韓猛立，黃新，鐘發(fā)剛，等. 牛病毒性腹瀉病毒SYBR Green I實時定量RT-PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J]. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，51（2）：333-339.

[5] 范晴，謝芝勛，謝志勤，等. 牛病毒性腹瀉病毒抗原捕獲ELISA方法的建立[J]. 動物醫(yī)學(xué)進展，2015，36（2）：21-24.

[6] 范晴，謝芝勛，劉加波，等. 牛病毒性腹瀉病毒RT-LAMP檢測方法的建立[J].生物技術(shù)通訊，2010，（2）：248-251.

[7] 王煒，武華. 牛病毒性腹瀉病毒生物學(xué)特性、危害及防控[J]. 中國奶牛，2014，（23-24）：22-26.

達熱瑪（1982-），女，青海祁連人，本科，助理獸醫(yī)師，研究方向:動物疾病診療。