安 靜 楊晉翔 賀梅娟 彭繼升 魏 玥 賈雪晴

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，100029 2.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院 3.中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)）

胃癌是一個(gè)逐步形成的過(guò)程，常由胃癌前病變（PLGC）進(jìn)一步發(fā)展而來(lái)。胃癌前病變的早診斷和早干預(yù)可以阻斷其向胃癌的發(fā)展。PLGC分為腸上皮化生（IM）和異型增生（Dys）兩種，尤其是中重度異型增生。輕度Dys約15%～30%會(huì)進(jìn)展為重度Dys和／或腺癌，而重度Dys的病人有60%～80%發(fā)展為胃癌。有效干預(yù)PLGC，阻斷其向胃癌的發(fā)展，對(duì)防治胃癌有積極意義。

中醫(yī)學(xué)將PLGC歸為“胃痞”，屬本虛標(biāo)實(shí)之證。從微觀上辨識(shí)有“虛痞”“胃脘痛”“胃痞惡化”之實(shí)。以其辨證論治、個(gè)體化治療、多靶點(diǎn)干預(yù)、毒副作用小等為特點(diǎn)。中醫(yī)藥療法可多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)來(lái)干預(yù)阻斷逆轉(zhuǎn)PLGC，逐漸成為治療PLGC的重要手段。

實(shí)驗(yàn)材料

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：無(wú)特定病原體（Specified Pathogen Free，SPF）Wistar實(shí)驗(yàn)用雄性大鼠60只，4周齡，體重約100g。由京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物批號(hào)：SCXK（京）2012-0001。

2.實(shí)驗(yàn)藥物：①消痞顆粒劑：為益氣化瘀解毒法方藥，由北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院藥劑科制成顆粒沖劑，12g／袋，每克沖劑含生藥9g。②維酶素片：為陽(yáng)性對(duì)照組用藥，由河北環(huán)海藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)：20090506。③N-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍［（N-methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidine，MNNG），又稱(chēng)1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍］：由日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社（Tokyo Chemical Industry Co.Ltd，TCI）生產(chǎn)，CAS登錄號(hào)：70-25-7，產(chǎn)品編號(hào)：M0527。

研究方法

1.模型的建立：參照相關(guān)文獻(xiàn)［1，2］采用以MNNG癌誘變劑灌胃為主多因素聯(lián)合建立慢性萎縮性胃炎伴異型增生大鼠模型。模型組大鼠自由飲用濃度為0.05%氨水溶液，氨水溶液每24h新鮮配制并更換1次，自由進(jìn)食含0.03%鹽酸雷尼替丁清潔級(jí)大鼠飼料，予120μg／mL的MNNG溶液灌胃，每只5mL／kg·d。

2.隨機(jī)分組：SPF級(jí)雄性Wistar大鼠60只經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，根據(jù)體重因素按計(jì)算機(jī)生成隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分為兩組。空白組10只，給以清潔級(jí)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)提供普通飼料喂養(yǎng)，持續(xù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。造模組50只，如上述造模方法和飼養(yǎng)條件進(jìn)行干預(yù)，于實(shí)驗(yàn)第20、24、26、28、30、32周分別隨機(jī)抽檢2只。第32周末造模成功，造模結(jié)束。

3.干預(yù)處理：第33周始將造模組剩余的33只大鼠考慮體重因素，按計(jì)算機(jī)生成分層，隨機(jī)分成三組，每組11只，以清潔級(jí)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)提供普通飼料和水飼養(yǎng)，自然恢復(fù)組予生理鹽水3mL／kg·d灌胃；維酶素組予維酶素懸濁液2mL／kg·d（即維酶素0.3g／kg）灌胃；消痞顆粒組予消痞顆粒懸濁液3mL／kg·d（含生藥9g／kg）灌胃。干預(yù)階段持續(xù)12周。所有實(shí)驗(yàn)大鼠于第44周末處死。

4.標(biāo)本處置：實(shí)驗(yàn)第44周末，取材前各組大鼠禁食不禁水18h，使用1%戊巴比妥鈉按30mg／kg經(jīng)腹腔注射麻醉大鼠后，迅速沿大彎側(cè)剪開(kāi)，4%生理鹽水漂洗內(nèi)容物，再沿小彎側(cè)剪開(kāi)，用濾紙吸干水分，切取病變胃黏膜組織，取胃竇組織10%甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋切片，常規(guī)HE染色和免疫組化。

5.觀察指標(biāo)及方法：（1）觀察大鼠胃黏膜組織病理組織學(xué)診斷及分級(jí)。病理分析標(biāo)準(zhǔn)采用2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)《全國(guó)慢性胃炎研討會(huì)共識(shí)意見(jiàn)》［3］和2006年中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)全國(guó)第二屆慢性胃炎共識(shí)會(huì)議制定的《中國(guó)慢性胃炎共識(shí)意見(jiàn)》中的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］。（2）結(jié)果觀察和分析方法：使用圖像處理分析軟件Image-Pro Plus V 7.0（IPP 7.0）軟件觀察經(jīng)免疫組化染色后APC和beta-catenin蛋白的表達(dá)情況，在高倍鏡視野（×40）隨機(jī)選取5個(gè)視野攝像，并使用IPP7.0圖像分析軟件計(jì)算總面積內(nèi)的平均光密度值做半定量分析。

結(jié)果

1.大鼠病理變化情況：全部10例空白組均出現(xiàn)異型增生；自然恢復(fù)組大鼠胃黏膜持續(xù)萎縮，伴有IM及Dys，未見(jiàn)明顯組織修復(fù)現(xiàn)象，2例為輕度異型增生，2例為中度異型增生，3例為重度異型增生，僅1例未出現(xiàn)異型增生。維酶素組大鼠胃黏膜可見(jiàn)組織修復(fù)現(xiàn)象，2例為輕度異型增生，2例為中度異型增生，2例為重度異型增生，3例出現(xiàn)異型增生逆轉(zhuǎn)。消痞顆粒組大鼠胃黏膜可見(jiàn)明顯組織修復(fù)現(xiàn)象，2例為輕度異型增生，2例為中度異型增生，0例為重度異型增生，7例出現(xiàn)異型增生逆轉(zhuǎn)。消痞顆粒組大鼠的病理變化情況優(yōu)于自然恢復(fù)組（P＜0.05），維酶素組大鼠的病理變化情況與自然恢復(fù)組有差異（P＞0.05）。

2.各組大鼠APC和β-catenin蛋白表達(dá)情況：（1）各組大鼠APC蛋白表達(dá)：經(jīng)免疫組化圖像半定量分析得出，空白組有10例大鼠APC蛋白表達(dá)，自然恢復(fù)組有8例，維酶素組有9例，消痞顆粒組有11例。消痞顆粒組大鼠APC蛋白表達(dá)情況優(yōu)于維酶素組（P＜0.05）和自然恢復(fù)組（P＜0.01），但與空白組大鼠APC蛋白表達(dá)情況仍有差異（P＜0.01）。（2）各組大鼠betacatenin蛋白表達(dá)情況：經(jīng)免疫組化圖像半定量分析得出，空白組有10例大鼠beta-catenin蛋白表達(dá)，自然恢復(fù)組有8例，維酶素組有9例，消痞顆粒組有11例。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析比較，消痞顆粒組大鼠beta-catenin蛋白表達(dá)情況明顯優(yōu)于維酶素組（P＜0.01）和自然恢復(fù)組（P＜0.01），同時(shí)與空白組beta-catenin蛋白表達(dá)情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；維酶素組大鼠beta-catenin蛋白表達(dá)情況與自然恢復(fù)組比較，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；自然恢復(fù)組大鼠beta-catenin蛋白表達(dá)情況與空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（3）大鼠APC蛋白與beta-catenin蛋白表達(dá)關(guān)系：25例APC蛋白表達(dá)陽(yáng)性的大鼠中有24例beta-catenin蛋白表達(dá)陽(yáng)性，1例beta-catenin蛋白表達(dá)陰性；而13例APC蛋白表達(dá)陰性的大鼠中，有5例beta-catenin蛋白表達(dá)陽(yáng)性，8例betacatenin蛋白表達(dá)陰性。經(jīng)兩變量相關(guān)分析檢驗(yàn)，P＜0.01，可以認(rèn)為大鼠APC蛋白與beta-catenin蛋白表達(dá)相關(guān)。

討論

PLGC的病機(jī)基礎(chǔ)為脾胃虛損，兼或氣陰兩虛。以益氣化瘀解毒法為組方的消痞顆粒通過(guò)益氣養(yǎng)陰消滯、活血化瘀、清熱解毒之法不僅改善臨床癥狀，而且消除異化之象，逆轉(zhuǎn)胃癌前病變。

Correa［5］根據(jù)病理組織學(xué)和流行病學(xué)研究將胃癌的發(fā)生發(fā)展描述為一個(gè)連續(xù)的組織病理學(xué)事件：正常胃黏膜→淺表性炎癥→萎縮性胃炎→腸上皮化生→異型增生→胃癌。該模式已經(jīng)得到國(guó)內(nèi)外專(zhuān)家認(rèn)可。胃癌前病變主要是指萎縮性胃炎伴不完全性腸化生和（或）中、重度異型增生［6］。近些年越來(lái)越多的臨床資料顯示腸上皮化生預(yù)測(cè)胃癌價(jià)值有限而更強(qiáng)調(diào)重視腸上皮化生范圍。因此，腸上皮化生分型的臨床意義和價(jià)值有限。

胃上皮異型增生與胃癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。研究顯示，輕度異型增生的癌變率僅為2.27%，重度癌變率是25.00%，中度介于兩者之間［7］；輕度異型增生癌變的相對(duì)危險(xiǎn)度為1.97［8］，中度和重度異型增生癌變的相對(duì)危險(xiǎn)度分別高達(dá)正常人群的26倍和132倍［9］。目前西醫(yī)學(xué)對(duì)胃癌前病變的基礎(chǔ)研究取得了令人矚目的成果，但仍缺乏理想阻斷或逆轉(zhuǎn)這種病變的有效藥物和方法。中醫(yī)藥療法有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，大量臨床治療及實(shí)驗(yàn)研究表明，中醫(yī)藥療法［10～12］可使部分腸上皮化生和異型增生減輕或消失，對(duì)防治胃癌的發(fā)生和發(fā)展具有十分重要的意義。

胃癌是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，經(jīng)過(guò)多階段、多途徑協(xié)同作用逐步發(fā)展形成。本研究探討益氣化瘀解毒法對(duì)胃癌前病的較好療效是通過(guò)作用于多基因、多途徑實(shí)現(xiàn)的，其對(duì)Wnt傳導(dǎo)通路成分APC、beta-catenin表達(dá)的調(diào)節(jié)是其可能作用機(jī)制之一，從而達(dá)到防治胃癌的發(fā)生和發(fā)展的作用。

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