程漢興，孫愛(ài)華，姜 穎（.北京蛋白質(zhì)組研究中心，蛋白質(zhì)組學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所，北京 02206；2.安徽醫(yī)科大學(xué)，合肥安徽 230032）

蛋白質(zhì)組技術(shù)在中藥配伍藥理學(xué)和毒理學(xué)機(jī)制研究中的應(yīng)用

程漢興1，2，孫愛(ài)華1，姜 穎1
（1.北京蛋白質(zhì)組研究中心，蛋白質(zhì)組學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所，北京 102206；2.安徽醫(yī)科大學(xué)，合肥安徽 230032）

配伍用藥是中藥遣藥組方、辨證施治的主要形式和應(yīng)用特點(diǎn)。組方的宜忌多來(lái)自前人經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)，大多缺少相應(yīng)的分子機(jī)制研究做配伍的理論支撐。作為規(guī)?；芯康鞍踪|(zhì)的工具，蛋白質(zhì)組技術(shù)可以從整體水平，較全面地呈現(xiàn)中藥多種有效成分進(jìn)入機(jī)體后發(fā)揮的多途徑、多靶點(diǎn)調(diào)控過(guò)程，進(jìn)而揭示中藥配伍發(fā)揮宜忌作用的分子機(jī)制。本文對(duì)近年蛋白質(zhì)組技術(shù)，包括雙向電泳、熒光雙向差異凝膠電泳技術(shù)和基于穩(wěn)定同位素標(biāo)記的相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)在中藥配伍宜忌和相應(yīng)的藥理毒理學(xué)機(jī)制研究中的應(yīng)用進(jìn)行綜述，為進(jìn)一步探討中藥配伍宜忌原理，更好地實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化和實(shí)際臨床用藥發(fā)展提供理論指導(dǎo)基礎(chǔ)。

中藥配伍；蛋白質(zhì)組；藥理學(xué)；毒理學(xué)

中藥配伍組方是中醫(yī)臨床用藥的主要形式。中藥配伍后藥物間、藥物與機(jī)體間產(chǎn)生相互作用，形成最后的功效取向，增效減毒謂“宜”，增毒減效謂“忌”。中藥配伍過(guò)程中涉及到藥效和毒性問(wèn)題，一直是中醫(yī)藥科學(xué)研究者關(guān)注的重中之重［1］。雖然古人并不了解具體的中藥化學(xué)組分，但結(jié)合辨證思想和臨床經(jīng)驗(yàn)，配伍使用中藥一直是古人治療疾病的有效手段，并在此基礎(chǔ)上總結(jié)出“十八反”“十九畏”等一系列藥物配伍規(guī)律［2］。中藥成分復(fù)雜，配伍體系中存在多種藥物的宜忌協(xié)作，探索中藥配伍協(xié)同禁忌機(jī)制的分子生物學(xué)研究發(fā)展緩慢，影響了中藥現(xiàn)代化、國(guó)際化的進(jìn)程。因此，研究中藥配伍宜忌機(jī)制已是研究者舉足重輕的任務(wù)之一［3］。

中藥配伍發(fā)揮宜忌效用的機(jī)制主要表現(xiàn)在兩個(gè)方面：①藥物間相互作用，主要表現(xiàn)在配伍藥在煎制過(guò)程中，由于化學(xué)物質(zhì)發(fā)生相互作用產(chǎn)生致毒效應(yīng)，或是有效毒性成分溶出。②藥物與機(jī)體間相互作用，包括藥物在體內(nèi)代謝的各個(gè)環(huán)節(jié)，藥物原型及其代謝產(chǎn)物通過(guò)對(duì)相應(yīng)蛋白質(zhì)及代謝酶的作用而影響彼此的藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程，導(dǎo)致中藥配伍的增減效作用。

中藥進(jìn)入人體后，通過(guò)多途徑、多靶點(diǎn)調(diào)控發(fā)揮作用，藥物間相互作用可引起機(jī)體相應(yīng)靶器官/組織多種蛋白質(zhì)豐度的改變［4］。蛋白質(zhì)組作為規(guī)?；芯康鞍踪|(zhì)變化的技術(shù)平臺(tái)，可用于中藥配伍機(jī)制研究的大致包括以下幾類(lèi)：①用于檢測(cè)藥物單用與配伍蛋白質(zhì)變化及藥理學(xué)和毒理學(xué)機(jī)制的差異蛋白質(zhì)組技術(shù)；②用于規(guī)模化檢測(cè)肝藥酶豐度的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiple reaction monitoring，MRM）聯(lián)合同位素標(biāo)記肽段技術(shù)；③用于中藥藥靶檢測(cè)的化學(xué)蛋白質(zhì)組技術(shù)。下面我們對(duì)各技術(shù)方法在中藥配伍研究中的應(yīng)用作簡(jiǎn)要綜述。

1 差異蛋白質(zhì)組技術(shù)在藥物配伍蛋白質(zhì)豐度變化檢測(cè)中的應(yīng)用

差異蛋白質(zhì)組技術(shù)研究思路是先通過(guò)蛋白質(zhì)組技術(shù)獲得一批藥物配伍前后豐度發(fā)生明顯變化的蛋白質(zhì)，然后通過(guò)深入的功能或藥理學(xué)網(wǎng)絡(luò)分析，挖掘其可能的協(xié)同或禁忌機(jī)制的方法。差異蛋白質(zhì)組技術(shù)主要包括基于凝膠成像的雙向凝膠電泳（two dimensional gel electrophoresis，2-DE）技術(shù)，熒光雙向差異凝膠電泳技術(shù)（2-D fluorescence differential gel electrophoresis，2D-DIGE）［5］和基于穩(wěn)定同位素標(biāo)記的相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)（isobaric tagsfor relative and absolute quantitation，iTRAQ）［6］。

差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在中藥配伍協(xié)同機(jī)制研究中常用來(lái)證明配伍藥相對(duì)于單方有更好的治療作用。該法先通過(guò)蛋白質(zhì)組技術(shù)獲得藥物配伍前后豐度發(fā)生明顯變化的一批蛋白質(zhì)，然后通過(guò)功能或藥理學(xué)網(wǎng)絡(luò)分析，挖掘其可能的協(xié)同或禁忌機(jī)制。芪參益氣方是臨床用于冠心病和心絞痛治療的中藥復(fù)方，主要由黃芪、丹參、三七和降香4味中藥組成。洪誠(chéng)韜等［7］應(yīng)用2-DE結(jié)合基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（matrix-assisted laser desorption/Ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）技術(shù)，分析了該方全方及單獨(dú)給藥情況下對(duì)大鼠心肌組織蛋白質(zhì)表達(dá)的影響。結(jié)果表明，黃芪和三七的主要功能是維護(hù)細(xì)胞能量代謝和線粒體呼吸鏈功能，丹參通過(guò)改善細(xì)胞氧化應(yīng)激作用保護(hù)心肌，各有效組分配伍形成的良好協(xié)同機(jī)制，復(fù)方治療效果優(yōu)于單藥。中藥復(fù)方茵陳蒿湯具有清熱、利濕和退黃之功效。臨床常用于治療急性黃疸型傳染性肝炎和膽囊炎等引起的黃疸。Wang等［8］采用差異蛋白質(zhì)組技術(shù)研究表明，相對(duì)于單藥處理組，該復(fù)方對(duì)與CCl4肝損傷相關(guān)的分子標(biāo)志物（鋅指蛋白等）的逆轉(zhuǎn)作用更明顯，表明茵陳蒿湯復(fù)方藥物的協(xié)同治療作用優(yōu)于單藥。

在中藥的毒性機(jī)制研究方面，Pan等［9］應(yīng)用2-DE聯(lián)合基質(zhì)輔助激光解吸/電離串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜（matrix-assisted laser desorption/Ionization tandem time-of-flight mass spectrometry，MALDITOF/TOF）技術(shù)分析蟾毒靈作用于HeLa細(xì)胞24 h后毒性作用，蛋白質(zhì)表達(dá)譜結(jié)果分析找到11個(gè)差異蛋白，其中核糖體蛋白和S-腺苷甲硫氨酸合成酶2表達(dá)顯著上調(diào)，波形蛋白、核內(nèi)不均一核糖核蛋白C1、核內(nèi)不均一核糖核蛋白C2變體、核內(nèi)不均一核糖核蛋白K、熱休克蛋白27和人硒結(jié)合蛋白1等9個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)，這些表達(dá)的蛋白主要影響細(xì)胞核酸代謝、DNA合成和骨架形成等生理學(xué)過(guò)程。黃芩與黃連是中醫(yī)臨床的常用配伍藥，為研究?jī)伤幒嫌玫拇x機(jī)制，Miao等［10］利用2-DE結(jié)合MALDITOF-MS技術(shù)分析黃芩或黃連單用以及配伍服用前后大鼠肝蛋白質(zhì)組變化情況，結(jié)果表明，差異蛋白質(zhì)主要為藥物代謝酶、二相藥物代謝酶和其他參與能量代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架類(lèi)的蛋白質(zhì)，這些蛋白大都與藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程或毒性機(jī)制發(fā)揮相關(guān)，可作藥物代謝研究的目標(biāo)蛋白或毒性標(biāo)志物。

在配伍禁忌機(jī)制研究方面，孫愛(ài)華等［12］采用DIGE聯(lián)合MALDI-TOF/TOF技術(shù)，探討藜蘆、人參配伍前后對(duì)大鼠肝功能及肝組織蛋白質(zhì)表達(dá)的影響。結(jié)果表明，藜蘆、人參合用可導(dǎo)致二硫鍵異構(gòu)酶和碳酸酐酶明顯降低；谷氨酸脫氫酶及氨甲酰磷酸合成酶明顯升高。提示藜蘆與人參合用可能通過(guò)影響肝細(xì)胞內(nèi)與pH自穩(wěn)、蛋白折疊及氨基酸代謝相關(guān)酶的表達(dá)發(fā)揮增毒作用。為探討藜蘆人參配伍可能的增毒減效的作用機(jī)制提供了依據(jù)。

2 質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)聯(lián)合同位素標(biāo)記肽段技術(shù)在規(guī)?；嗡幟肛S度檢測(cè)中的應(yīng)用

MRM聯(lián)合同位素標(biāo)記技術(shù)用于中藥配伍研究主要圍繞肝細(xì)胞色素P450酶（cytochrome P-450，CYP450）展開(kāi)。目前，常用方法有用絕對(duì)定量法（absolute quantification，AQUA）［13］、定量串聯(lián)體法（quantification concatamers，QconCAT）［14］、蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)物絕對(duì)定量法（protein standard absolute quantification，PSAQ）［15］、細(xì)胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標(biāo)記絕對(duì)定量技術(shù)法（absolute stable isotope labeling with amino acids in cell culture，abosolute SILAC）［16］和蛋白抗原表位標(biāo)簽-細(xì)胞培養(yǎng)條件下氨基酸穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)法（protein epitope signature tags-stable isotope labeling with amino acids in cell culture，PrESTs-SILAC）［17］。其中QconCAT法克服了AQUA法化學(xué)合成同位素標(biāo)記肽段費(fèi)時(shí)費(fèi)力、合成的肽段純度低和目標(biāo)蛋白質(zhì)酶解不完全等影響定量準(zhǔn)確性的缺陷，具有顯著優(yōu)勢(shì)。

藥物聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，一種藥物可通過(guò)誘導(dǎo)或抑制CYP450酶特定的亞型改變另一種藥物的代謝清除特性，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生不良反應(yīng)，有時(shí)甚至產(chǎn)生致命傷害。

高度同源性是CYP450家族的一個(gè)顯著特點(diǎn)，由于以CYP450酶系為主的藥代酶與藥物相互作用關(guān)系密切，此領(lǐng)域日益受到藥理和毒理學(xué)的重視［18-20］。美國(guó)食品藥物管理局（FDA）要求每個(gè)新藥研究須確定參與代謝的CYP450酶亞型。CYP450酶參與代謝藥物過(guò)程形成的藥物相互作用，揭示配伍結(jié)果的利弊效果。目前，在中藥藥理研究中，沒(méi)有成熟的檢測(cè)參加藥物代謝過(guò)程的CYP450酶活性的方法，由于CYP450家族高度同源，缺乏特異性好的商品化抗體；mRNA豐度與蛋白質(zhì)豐度又不完全一致。在評(píng)估中藥配伍使用過(guò)程中，需要有評(píng)估中藥單用及配伍對(duì)肝藥酶的影響的高通量方法。MRM技術(shù)具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高及通量高的特點(diǎn)。MRM聯(lián)合同位素標(biāo)記技術(shù)能很好地區(qū)分這些序列同源性較高CYP450亞型并進(jìn)行定量，是分析中藥配伍對(duì)CYP450酶調(diào)控作用的新方法，通過(guò)預(yù)設(shè)候選靶蛋白特異肽段的離子對(duì)信息，對(duì)符合規(guī)則的離子進(jìn)行信號(hào)記錄，減少?gòu)?fù)雜組分共流出物的干擾，進(jìn)而提高低豐度蛋白質(zhì)的檢測(cè)靈敏度。CYP2C9與CYP2C19的氨基酸系列只有一個(gè)氨基酸不同。在對(duì)人體CYP450蛋白豐度變化監(jiān)測(cè)研究中，Kawakami等［21］根據(jù)該不同的氨基酸位點(diǎn)設(shè)計(jì)肽段，使用AQUA法成功定量人肝微粒體CYP2C9與CYPC19蛋白水平，并同時(shí)對(duì)其他9種CYP450進(jìn)行定量。Liu等［22］采用AQUA法利用重型同位素標(biāo)記合成肽段作內(nèi)標(biāo)結(jié)合MRM方法測(cè)定CYP1A2，CYP2B6，CYP3A4，CYP3A5，CYP2C9，CYP2C19 和CYP2E1等7種中高豐度CYP450蛋白。Russell等［23］使用QconCAT法結(jié)合MRM質(zhì)譜分析對(duì)藥物代謝酶和膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等21種蛋白進(jìn)行了定量。我們實(shí)驗(yàn)室也基于MRM聯(lián)合QconCAT技術(shù)建立了27種人肝藥酶和12種大鼠肝藥酶的高通量檢測(cè)方法，不同濃度的質(zhì)控樣本的方法學(xué)評(píng)估結(jié)果表明該方法重復(fù)性好，CV值＜25%。精密度誤差為0.66%～3.09%，準(zhǔn)確度誤差為1.33%～8.50%。滿足常規(guī)定量的要求。此外，MRM聯(lián)合QconCAT技術(shù)測(cè)得的肝藥酶CYP1A2和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶1A1的豐度與于Western蛋白印跡法測(cè)得的相對(duì)豐度有良好的相關(guān)性（r2分別為0.72和0.92）。對(duì)于同源性高達(dá)93%的CYP4F2和CYP4F3，我們也提供了很好的定量肽段，并成功進(jìn)行定量。藥物代謝酶研究是中藥在肝代謝機(jī)制研究中的重要切入點(diǎn)，該方法的建立為探討中藥配伍對(duì)肝藥酶調(diào)控變化，以及中藥的藥理毒理學(xué)研究提供新技術(shù)支持。

3 化學(xué)蛋白質(zhì)組技術(shù)在中藥靶點(diǎn)檢測(cè)中的應(yīng)用

中藥靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)有助于深入了解機(jī)體針對(duì)配伍藥的多種有效成分所表現(xiàn)出來(lái)的協(xié)同或拮抗作用。如協(xié)同作用往往是多種藥物作用于同一靶點(diǎn)或同一通路的功能相近靶點(diǎn)，從而導(dǎo)致藥物作用相加或增強(qiáng)；拮抗作用大多因?yàn)樽饔孟喾吹乃幬锔?jìng)爭(zhēng)性拮抗效應(yīng)相近靶點(diǎn)或不同的藥物作用于效應(yīng)相反的不同靶點(diǎn)所致。

化學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)是利用能與靶蛋白質(zhì)發(fā)生特異性相互作用的化學(xué)小分子來(lái)干擾和探測(cè)蛋白質(zhì)組，在分子水平上系統(tǒng)揭示特定蛋白質(zhì)的功能及其與化學(xué)小分子的相互作用，從而準(zhǔn)確找到化學(xué)小分子（包括藥物）的結(jié)合部位-作用靶點(diǎn)的組學(xué)研究方法［24］。

中藥復(fù)方黃黛片的配伍機(jī)制研究是應(yīng)用化學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)進(jìn)行中藥復(fù)方配伍機(jī)制研究的成功典范，第一次用中藥方劑“君、臣、佐、使”的配伍原則闡明了一個(gè)完全依據(jù)中醫(yī)理論研發(fā)出來(lái)的中藥復(fù)方黃黛片治療白血病的多成分多靶點(diǎn)作用機(jī)制。復(fù)方黃黛片的主要有效成分是四硫化四砷（A），靛玉紅（I）和丹參酮ⅡA（T）。Wang和Zhang等［25-26］基于有機(jī)砷為中心的化學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)（compound-centric chemical proteomics，CCCP），設(shè)計(jì)合成砷聯(lián)合生物素探針，并將其固定到具有生物相容性固相載體上，結(jié)合胞內(nèi)熒光定位技術(shù)，證實(shí)砷在細(xì)胞內(nèi)通過(guò)RBCC結(jié)構(gòu)域直接結(jié)合早幼粒白血病-維甲酸受體α（promyelocytic leukemia-retinoic acid receptor alpha，PML-RARα），誘導(dǎo)蛋白構(gòu)象變化進(jìn)而促進(jìn)其降解，使其分化成熟，急性早幼粒細(xì)胞白血?。╝cute promyelocytic leukemia，APL）獲得緩解，從而揭示砷特異性治療APL分子機(jī)制。同時(shí)發(fā)現(xiàn)丹參酮和靛玉紅作為輔助藥物，協(xié)同促進(jìn)PML-RARα泛素化并加快其降解，進(jìn)一步促進(jìn)白血病細(xì)胞的分化成熟，抑制癌細(xì)胞分裂增殖。復(fù)方黃黛片通過(guò)各組分的聯(lián)合應(yīng)用，產(chǎn)生了大于3個(gè)組分加和的協(xié)同效應(yīng)。證明化學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在復(fù)方黃黛片有效成分篩選、治療APL靶蛋白的發(fā)現(xiàn)、中藥協(xié)同作用機(jī)制研究中發(fā)揮重要作用。

Liu等［27］發(fā)現(xiàn)，自腺花香茶菜（Rabdosiaadenantha）中提取的腺花素能誘導(dǎo)APL細(xì)胞株（NB4）分化，誘導(dǎo)APL小鼠腫瘤衰退，延長(zhǎng)其生存期。這種分化誘導(dǎo)效應(yīng)不僅發(fā)生在對(duì)維甲酸敏感的白血病細(xì)胞，對(duì)維甲酸耐藥的白血病細(xì)胞也有明顯效果。研究者采用CCCP技術(shù)，用腺花素化學(xué)修飾生物素標(biāo)記探針與相作用的蛋白復(fù)合物結(jié)合，發(fā)現(xiàn)腺花素特異性結(jié)合抗氧化蛋白超家族Ⅰ（peroxiredoxinⅠ，PrxⅠ）和抗氧化蛋白超家族Ⅱ（peroxiredoxinⅡ，PrxⅡ），尋找到腺花素的體內(nèi)靶蛋白是過(guò)氧化還原酶PrxⅠ和PrxⅡ，并揭示腺花素通過(guò)PrxⅠ/Ⅱ-H2O2-ERK1/2-C/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白（enhancerbindingproteins，EBP）信號(hào)途徑誘導(dǎo)APL細(xì)胞分化，達(dá)到治療白血病的目的。Prx成員的表達(dá)水平與許多人體重要疾病如腫瘤、心血管病、糖尿病和神經(jīng)退行性疾病等密切相關(guān)［28］。H2O2作為第二信使，也廣泛參與多種細(xì)胞信號(hào)通路的調(diào)控。該研究成果有助于后續(xù)研究者通過(guò)比較其他藥物靶蛋白與腺花素調(diào)控通路的生物學(xué)相關(guān)性，借助網(wǎng)絡(luò)生物學(xué)預(yù)測(cè)來(lái)闡明藥物聯(lián)合使用時(shí)各種藥物在分子水平上的協(xié)同作用和拮抗作用機(jī)制?；瘜W(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)及其相關(guān)的分子對(duì)接技術(shù)、網(wǎng)絡(luò)生物學(xué)預(yù)測(cè)技術(shù)都將為基于藥靶的中藥配伍研究提供新的思路和方法。

4 結(jié)語(yǔ)

中藥配伍機(jī)制研究是中藥現(xiàn)代化、國(guó)際化的必由之路，需要以中醫(yī)藥的傳統(tǒng)理論體系為指導(dǎo)，借助多種現(xiàn)代生物學(xué)的研究方法，多學(xué)科滲透，多技術(shù)輔助，才能全面深入地揭示中藥配伍過(guò)程中多成分、多靶點(diǎn)和多層次的調(diào)控過(guò)程?；诘鞍踪|(zhì)組技術(shù)研究中藥配伍機(jī)制已初步體現(xiàn)出可行性和合理性。但先進(jìn)蛋白質(zhì)組技術(shù)在中藥配伍領(lǐng)域的應(yīng)用仍明顯滯后。如高靈敏性、重復(fù)性好的DIGE和iTRAQ技術(shù)應(yīng)用較少。已成功建立的多種藥物代謝酶豐度規(guī)?；瘷z測(cè)平臺(tái)，也由于人源藥物處理組織樣本較難獲得，細(xì)胞系樣本中肝藥酶豐度大幅衰減，尚未得到推廣應(yīng)用。完善藥物處理的肝原代細(xì)胞培養(yǎng)模型和具有肝干細(xì)胞特性的HepRG細(xì)胞的誘導(dǎo)分化模型［29］是該法應(yīng)用的可能渠道。另外，應(yīng)用化學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)進(jìn)行單小分子化合物藥靶尋找的研究較多，進(jìn)行復(fù)方配伍機(jī)制探索的研究較少，有待深入。蛋白質(zhì)組技術(shù)的發(fā)展，聯(lián)合致力于蛋白質(zhì)間相互作用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)和網(wǎng)絡(luò)預(yù)測(cè)技術(shù)，有助于系統(tǒng)地分析中藥各有效成分在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮作用的靶點(diǎn)和通路，構(gòu)建多有效成分的立體作用模型，更清晰地闡述中藥配伍作用機(jī)制。

［1］ Qiu J.Traditionalmedicine：aculturein the balance［J］.Nature，2007，448（7150）：126-128.

［2］ Tang YP，Wu QC，Ding AW，Duan JA.Modern understanding for″e(cuò)ighteen incompatible medicaments″and″nineteen medicaments of mutual restraint″in TCM［J］.Chin J Exp Tradit Med Formulae（中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志），2009，15（6）：79-81.

［3］ Su SL，Duan JA，Li WL，Tang YP，F(xiàn)an XS. Exploration the toxicity/increase virulence mechanisms of″Eighteen Incompatible Medicaments″ based on chemical substances［J］.Chin J Exp Tradit Med Formulae（中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志），2010，1：123-129.

［4］ Duan JA，Zhang BL，F(xiàn)an XS，Zhang YJ，Gao Y，LinNA.Researchthoughtsandtechnology system framework of traditional chinese medicine incompatibility［J］.World Sci Technol/Mod Tradit Chin Med Mat Med（世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化），2012，14（3）：1537-1546

［5］Chen G，Pramanik BN.Application of LC/MS to proteomics studies：current status and future prospects［J］.Drug Discov Today，2009，14（9-10）：465-471.

［6］Timms JF，Cutillas PR.Overview of quantitative LC-MS techniques for proteomics and activitomics ［J］.Methods Mol Biol，2010，658：19-45.

［7］Hong CT，Wang Y，Lou JZ，Liu Q，Qu HB，Cheng YY.Analysis of myocardial proteomic alteration after Qishenyiqi formula treatment in acute infarcted rat hearts［J］.China J Chin Mat Med（中國(guó)中藥雜志），2009，34（8）：1018-1021.

［8］ Wang X，Zhang A，Wang P，Sun H，Wu G，Sun W，et al.Metabolomics coupled with proteomics advancing drug discovery toward more agile development of targeted combination therapies［J］. Mol Cell Proteomics，2013，12（5）：1226-1238.

［9］ Pan SN，Wang YH，F(xiàn)eng LX，F(xiàn)an CY，Guo DA，Liu X，et al.Study on proteomics of HeLa cell apoptosis in bufalin-induced human cervical carcinoma［J］.China J Chin Mat Med（中國(guó)中藥雜志），2012，37（13）：1998-2004.

［10］ Miao Q，Zhao YY，Miao PP，Chen N，Yan XH，Guo CE.Proteomics approach to analyze protein profiling related with ADME/Tox in rat treated with Scutellariae Radix and Coptidis Rhizoma as well astheircompatibility［J］.JEthnopharmacol，2015，173（15）：241-250.

［11］ Tang YP，Chen F，Shang EX，Duan JA，Tao J，Su SL，et al.Evolution and medicine-using analysis of eighteen Incompatible medicaments in TCM ［J］.World Sci Technol/Mod Tradit Chin Med Mat Med（世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化），2010，12（4）：593-599.

［12］ Sun AH，Wang YG，Meng H，Lyu YZ，Gao Y，JiangY，etal.EffectofVeratrumnigrumandginseng combinationonliverfunctionanddifferential proteomics in rats［J］.Chin J Pharmacol Toxicol（中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志），2013，27（6）：982-987.

［13］ Picotti P，Aebersold R.Selected reaction monitoring-based proteomics：workflows，potential，pitfalls and future directions［J］.Nat Methods，2012，9 （6）：555-566.

［14］ Dupuis A，Hennekinne JA，Garin J，Brun V. Protein standard absolute quantification（PSAQ）for improved investigation of staphylococcal food poisoning outbreaks［J］.Proteomics，2008，8 （22）：4633-4636.

［15］HebelerR， OeljeklausS， ReidegeldKA，Eisenacher M，Stephan C，Sitek B，et al.Study of early leaf senescence in Arabidopsis thaliana by quantitative proteomics using reciprocal 14N/15N labeling and difference gel electrophoresis［J］. Mol Cell Proteomics，2008，7（1）：108-120

［16］Zeiler M，Straube WL，Lundberg E，Uhlen M，MannM.Aproteinepitopesignaturetag （PrEST）library allows SILAC-based absolute quantification and multiplexed determination of protein copy numbers in cell lines［J］.Mol Cell Proteomics，2012，11（3）：392-409.

［17］ Lu YL，Sun AH，Gao Y，Jiang Y.In vitro assessment of increasing cytotoxicity of Veratrum nigrum induced by Panax ginseng［J］.Mil Med Sci（軍事醫(yī)學(xué)），2014，38（4）：285-289.

［18］ Ye X，Wang Y，Yang M，Wang Q，Liang Q，Ma Z. Investigating the in vitro metabolism of veratridine：characterization of metabolites and involved cytochrome P450 isoforms［J］.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2009，877（3）：141-148.

［19］Yao X，Qian YS.Effects of fluoroquinolones on drug-metabolizing enzymes of extrahepatic tissue in rats［J］.Chin J New Drugs Clin Rem（中國(guó)新藥與臨床雜志），2006，25（2）：87-90.

［20］ Lü XW，Chen WD，Jin Y，Li CY，Ma CG，Li J. Effectsofinteractionsbetweencaptopriland lowdosage aspirin on experimental myocardial ischemia and the activity of liver microsomal enzymes in rats［J］.Chin Pharmacol Bull（中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)），2004，20（1）：104-109.

［21］Kawakami H，Ohtsuki S，Kamiie J，Suzuki T，Abe T，Terasaki T.Simultaneous absolute quantification of 11 cytochrome P450 isoforms in human livermicrosomesbyliquidchromatography tandem mass spectrometry with in silico target peptide selection［J］.J Pharm Sci，2011，100 （1）：341-352.

［22］ Liu X，Hu L，Ge G，Yang B，Ning J，Sun S，et al.Quantitative analysis of cytochrome P450 isoformsinhumanlivermicrosomesbythe combinationofproteomicsandchemical probe-based assay［J］.Proteomics，2014，14（16）：1943-1951.

［23］ Russell MR，Achour B，Mckenzie EA，Lopez R，Harwood MD，Rostami-Hodjegan A，et al.Alternative fusion protein strategies to express recalcitrant QconCAT proteins for quantitative proteomics of human drug metabolizing enzymes and transporters ［J］.J Proteome Res，2013，12（12）：5934-5942.

［24］ Yang HQ，Li XJ.Chemical proteomics and discovery of drug targets［J］.Acta Pharmaceut Sin（藥學(xué)學(xué)報(bào)），2011，46（8）：877-882.

［25］Wang L，Zhou GB，Liu P，Song JH，Liang Y，Yan XJ，et al.Dissection of mechanisms of Chinese medicinal formula Realgar-Indigo naturalis as an effective treatment for promyelocytic leukemia ［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2008，105（12）：4826-4831.

［26］ Zhang XW，Yan XJ，Zhou ZR，Yang FF，Wu ZY，Sun HB，et al.Arsenic trioxide controls the fate of the PML-RARalpha oncoprotein by directly binding PML［J］.Science，2010，328（5975）：240-243.

［27］ Liu CX，Yin QQ，Zhou HC，Wu YL，Pu JX，Xia L，et al.Adenanthin targets peroxiredoxinⅠ andⅡto induce differentiation of leukemic cells［J］.Nat Chem Biol，2012，8（5）：486-493.

［28］ KangSW，RheeSG，ChangTS，JeongW，ChoiMH. 2-Cys peroxiredoxin function in intracellular signal transduction:therapeutic implications［J］.Trends Mol Med，2005，11（12）：571-578.

［29］ Andersson TB.The application of HepRG cells in evaluation of cytochrome P450 induction properties of drug compounds［J］.Methods Mol Biol，2010，（640）：375-387.

（本文編輯：賀云霞）

Application of proteomics technologies pharmacology and toxicology mechanismsof in traditional Chinese medicine compatibility study

CHENG Han-xing1，2，SUN Ai-hua1，JIANG Ying1
（1.State Key Laboratory of Proteomics，Beijing Proteome Research Center，Institute of Radiation Medicine，Academy of Military Medical Sciences，Beijing 102206，China；2.Anhui Medical University，Hefei 230032，China）

Traditional Chinese medicine（TCM）compatibility is related to the safety of clinical use of drugs and embodies the essence of interactions between drugs and organisms.This is a scientific problemthatrhasattractedmoreattention.Currently， mostoftheknowledgeonTCM compatibility is from predecessors′experience.The corresponding molecular biology mechanism is poorly understood.As a powerful tool to identify a large number of proteins simultaneously，proteomics technology has the potential to reveal the protein alterations under certain conditions，and to provide more direct insights into biological processes during TCM compatibility.In this paper，we introduced the main technology of proteomics，including two dimensional gel electrophoresis，2D-DIGE，iTRAQ，QconCAT/MRM and chemical proteomics.Also，the applications of these technologies in the field of TCMM compatibility study were reviewed.

compatibility（TCD）；proteome；pharmacology；toxicology

The project supported by National Basic Research Program of China（973 Program）（2011CB505300）；and National Basic Research Program of China（973 Program）（2011CB505304）

JIANG Ying，Tel：（010）80727777-1213，E-mail：jiangying304@hotmail.com

R965.2；R285.5

A

1000-3002-（2015）06-0973-06

10.3867/j.issn.1000-3002.2015.06.015

國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973計(jì)劃）（2011CB505300）；國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973計(jì)劃）（2011CB505304）

程漢興，男，碩士研究生，主要從事中藥與肝蛋白質(zhì)組學(xué)研究，Tel：（010）80727777-1122，E-mail：chenghanxing09@126.com；姜 穎，研究員，從事肝生理、病理過(guò)程相關(guān)的蛋白質(zhì)組研究。

姜 穎，Tel：（010）80727777-1213，E-mail：jiangying304@hotmail.com

（2015-09-02接受日期：2015-11-09）