張士君

CLIA、ELISA與TPPA三種方法對(duì)梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)的意義

張士君

目的對(duì)化學(xué)發(fā)光法(CLIA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)以及梅毒螺旋體明膠顆粒凝聚試驗(yàn)(TPPA)在梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)中的應(yīng)用效果進(jìn)行對(duì)比分析。方法998份血清標(biāo)本, 對(duì)其分別實(shí)施CLIA、ELISA和TPPA3種方法檢測(cè), 對(duì)比分析其檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果CLIA的檢測(cè)陽(yáng)性率為3.71%、敏感性為97.37%、診斷符合率為99.90%；ELISA的檢測(cè)陽(yáng)性率為3.62%、敏感性為94.74%、診斷符合率為99.70%；TPPA的檢測(cè)陽(yáng)性率為3.41%、敏感性為89.47%、診斷符合率為99.70%。和TPPA檢測(cè)方法敏感性對(duì)比, 其余兩種檢測(cè)方法均明顯偏高, 比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；CLIA、ELISA兩種檢測(cè)方法敏感性對(duì)比, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；檢測(cè)陽(yáng)性率和診斷符合率3種檢測(cè)方法比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論在梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)中, CLIA、ELISA的檢測(cè)敏感性要明顯優(yōu)于TPPA檢測(cè)法, 可在臨床中推廣應(yīng)用。

化學(xué)發(fā)光法；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；梅毒螺旋體明膠顆粒凝聚試驗(yàn)；梅毒螺旋體特異性抗體；檢測(cè)

梅毒是性傳播疾病之一, 其中梅毒螺旋體(TP)則是密螺旋體, 歸屬于白螺旋體蒼白亞種, 同時(shí)也是導(dǎo)致人類梅毒的病原體[1]。在對(duì)梅毒檢測(cè)過(guò)程中, 其檢測(cè)方法比較多, 但是基于其檢測(cè)原理不同, 常見的主要有3種, 分別是CLIA、ELISA以及TPPA[2]。關(guān)于這3種檢測(cè)方法在梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)中的應(yīng)用意義, 本文則以本院2013年7月～2014年7月收集的998份血清標(biāo)本為例, 對(duì)其檢測(cè)陽(yáng)性率、敏感性以及診斷符合率進(jìn)行對(duì)比分析, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本次選取本院2013年7月～2014年7月收集的998份血清標(biāo)本, 所有標(biāo)本來(lái)源為醫(yī)院性病門診和皮膚病門診,267份為Ⅰ期,731份為Ⅱ期。將標(biāo)本在抽血4 h之內(nèi)將其血清分離, 保存在4℃環(huán)境內(nèi), 第2天對(duì)998份血清標(biāo)本分別實(shí)施CLIA、ELISA以及TPPA檢驗(yàn), 將其檢測(cè)陽(yáng)性和可疑標(biāo)本全部實(shí)施分裝, 并將其保存在-20℃環(huán)境內(nèi),針對(duì)可疑標(biāo)本進(jìn)一步采用Western Blotting(WB)法進(jìn)行檢驗(yàn)確定。

1.2 試劑與儀器 CLIA檢驗(yàn)法試劑盒來(lái)自北京科美東雅生物技術(shù)有限公司；ELISA檢驗(yàn)法試劑生產(chǎn)廠家為廈門新創(chuàng)科技有限公司, 所采用的儀器分別是STAT FAX-2006洗板機(jī)以及STAT FAX-2100酶標(biāo)儀, 均由美國(guó)生產(chǎn)；TPPA檢驗(yàn)法試劑盒提供者為日本富士株式會(huì)社；WB確定試劑抗梅毒螺旋體抗體IgG檢測(cè)試劑盒提供者為歐蒙醫(yī)學(xué)試驗(yàn)診斷股份有限公司。

1.3 檢測(cè)方法 CLIA檢驗(yàn)法模式為雙抗原夾心一步法免疫分析模式, 借助于TP抗原制作出固相抗原, 并將TP抗原采用辣根過(guò)氧化物酶進(jìn)行標(biāo)記, 由此和樣品中的梅毒螺旋體抗體兩者就可以形成雙抗原夾心。在對(duì)其實(shí)施洗滌之后, 將化學(xué)發(fā)光底物液加入其中, 即可以成功測(cè)定發(fā)光值, 依照臨界值對(duì)梅毒螺旋體特異性抗體進(jìn)行判斷, 如果S/CO≥1.0, 則可以判定為陽(yáng)性, 反之為陰性；ELISA檢驗(yàn)法關(guān)于血清或者血漿中梅毒螺旋體抗體的檢驗(yàn), 采用的是雙抗原夾心ELISA法檢驗(yàn), 梅毒抗原表達(dá)則為微孔條預(yù)包被基因, 其能夠和血清中的TP抗體產(chǎn)生一定反應(yīng), 之后將HRP標(biāo)記基因工程重組梅毒抗原加入其中, 將兩者結(jié)合在一起, 顯色采用的是TMB系統(tǒng), 依照酶免疫結(jié)果對(duì)其梅毒螺旋體抗體進(jìn)行判定。其判定方法如上；TPPA檢驗(yàn)法抗原為超聲裂解純化梅毒螺旋體Nichols株, 將其在人工載體明膠粒子上進(jìn)行包被, 其在和血清中特異性抗體兩者結(jié)合的時(shí)候, 也就可以用肉眼看出其凝集反應(yīng)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

本次選取的998份血清標(biāo)本, 通過(guò)3種方法檢測(cè), 共檢測(cè)出陽(yáng)性標(biāo)本和可疑標(biāo)本共38例, 其檢測(cè)陽(yáng)性率為3.81%。其中CLIA的檢測(cè)陽(yáng)性率為3.71%、敏感性為97.37%、診斷符合率為99.90%；ELISA的檢測(cè)陽(yáng)性率為3.62%、敏感性為94.74%、診斷符合率為99.70%；TPPA的檢測(cè)陽(yáng)性率為3.41%、敏感性為89.47%、診斷符合率為99.70%。和TPPA檢測(cè)方法敏感性對(duì)比, 其余兩種檢測(cè)方法均明顯偏高, 比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；CLIA、ELISA兩種檢測(cè)方法敏感性對(duì)比, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；檢測(cè)陽(yáng)性率和診斷符合率3種檢測(cè)方法比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

在本次梅毒螺旋體特異性抗體檢驗(yàn)中, 其血清標(biāo)本均是在收集的第2天進(jìn)行檢驗(yàn), 因此其可以將血球沉降對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響作用最大化的排除, 有助于提高臨床檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性[3]。另外, 在3種方法檢驗(yàn)中, CLIA檢驗(yàn)法發(fā)光底物是苯并蔥, 同時(shí)其洗滌液也是經(jīng)過(guò)特制而成的, 因此能夠最大化的將外界影響因素排除, 在其應(yīng)用中具有自動(dòng)化高、時(shí)間短、試驗(yàn)重復(fù)度好以及敏感性高的特點(diǎn), 但是這種檢驗(yàn)方法也有缺點(diǎn), 其檢驗(yàn)成本偏高；ELISA檢驗(yàn)法對(duì)于血清中的梅毒螺旋體抗體檢驗(yàn)采用的是雙抗原夾心法, 可以進(jìn)一步對(duì)酶的放大系統(tǒng)進(jìn)行應(yīng)用, 再加上其所具有的雙重識(shí)別機(jī)制, 可以清楚的對(duì)陰陽(yáng)性進(jìn)行判定, 并且這一檢驗(yàn)方法具有良好的標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化, 成本較低, 因此其被學(xué)生認(rèn)為是血清檢驗(yàn)的首選方法。但是這一檢驗(yàn)方法在應(yīng)用過(guò)程中容易受到外界干擾因素的影響, 假陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)頻率較高；TPPA檢驗(yàn)法從一開始處理標(biāo)本直到最后檢驗(yàn)結(jié)束, 所采用的時(shí)間僅為2 h,同時(shí)還不需要一些特殊設(shè)備, 但是這一方法在應(yīng)用中如果標(biāo)本較多, 依靠肉眼觀察難免會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響, 因此敏感性和檢驗(yàn)準(zhǔn)確度較低。

綜上所述, 從本次檢驗(yàn)結(jié)果可以看出, 在梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)中, CLIA、ELISA的檢測(cè)敏感性要明顯優(yōu)于TPPA檢測(cè)法, 可在臨床中推廣應(yīng)用。

[1]侯曉菁, 梁艷, 陳潔, 等.化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體的實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià).檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2010,25(5):365-367.

[2]姚家奎, 丁德坤, 吳婷婷, 等. CLIA法檢測(cè)高齡患者梅毒特異性抗體的臨床應(yīng)用.放射免疫學(xué)雜志,2013,26(6):822-823.

[3]杜靜, 張澤蕓, 周薇, 等.化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體的應(yīng)用與評(píng)價(jià).廣東醫(yī)學(xué),2012,33(8):1100-1102.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.16.023

2015-03-13]

山東省淄博市桓臺(tái)縣果里醫(yī)院檢驗(yàn)科