黃冬維，趙輝玲，陳 勝，趙小偉，楊永新，程廣龍，王小飛

（安徽省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，合肥 230031）

長毛兔分子遺傳育種研究進展

黃冬維，趙輝玲，陳 勝，趙小偉，楊永新，程廣龍，王小飛

（安徽省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，合肥 230031）

文章從長毛兔遺傳多樣性的分子評估和生產性能分子遺傳基礎研究兩個方面對近年來國內外長毛兔分子遺傳育種的研究進展進行了綜述，以期為國內長毛兔育種提供參考。

長毛兔；分子遺傳育種；研究進展

長毛兔（Angora rabbit），又稱安哥拉兔，是以產毛為主要用途的家兔。目前，我國長毛兔養(yǎng)殖量和兔毛產量均占世界90%以上，居全球第一位，兔毛及兔毛產品相當一部分出口到歐盟、日韓等國家和地區(qū)，常年創(chuàng)匯在0.4億美元以上［1］。世界長毛兔品種主要有德系長毛兔、法系長毛兔、英系長毛兔等，我國長毛兔品種（系）主要有浙系、皖系、蘇系、滎經長毛兔等。我國長毛兔品種培育基本采用傳統(tǒng)雜交育種方式，現(xiàn)代分子遺傳育種研究相對肉兔和獺兔嚴重滯后。近些年，隨著微衛(wèi)星等分子標記技術的發(fā)展和應用，長毛兔分子遺傳育種研究取得了一定進展。本文通過查閱大量的文獻資料，對當前國內外長毛兔分子遺傳育種研究進展進行了綜述，以便為長毛兔分子育種提供參考。

1　長毛兔遺傳多樣性的分子評估

1.1核外遺傳評估

線粒體DNA是動物體目前所發(fā)現(xiàn)的唯一核外遺傳物質，為共價環(huán)狀DNA分子，分子量小，但具有較高突變頻率和母系單性遺傳的特點，常用來分析群體遺傳分化情況和遺傳多樣性。龍繼蓉［2］研究了德系長毛兔、鎮(zhèn)海長毛兔等20個家兔品種線粒體D-環(huán)高變區(qū)700 bp區(qū)段單倍型和遺傳多樣性，發(fā)現(xiàn)德系長毛兔和鎮(zhèn)海長毛兔均主要含A1單倍型，均歸于世系II的聚類族I，但鎮(zhèn)海長毛兔具有獨特的O1單倍型，可能來源于歐洲穴兔。Terrance等［3］對德系安哥拉兔、大白兔、蘇聯(lián)青紫藍兔線粒體DNA細胞色素B基因300 bp長度序列進行測序，以確定種內和種間變異，并分析了3個兔品種的遺傳距離，研究結果有助于種間雜交所產生品種的母系起源分析和對家養(yǎng)兔繁殖群遺傳種質資源利用。

1.2微衛(wèi)星標記評估

微衛(wèi)星標記作為第二代分子標記，具有數(shù)量多、基因組中分布廣和共顯性等特點，是動物遺傳多樣性評估的較優(yōu)選擇方法，研究較多。李庚航［4］選用9對微衛(wèi)星標記引物分析了滎經長毛兔的微衛(wèi)星多態(tài)性，結果發(fā)現(xiàn)有7對擴增出產物并呈現(xiàn)出多態(tài)性，平均檢測到4.14個等位基因，平均多態(tài)信息含量0.609，平均雜合度0.691，表明滎經長毛兔遺傳變異豐富。謝光美［5］研究滎經長毛兔8個微衛(wèi)星標記的多態(tài)性，結果發(fā)現(xiàn)其平均雜合度和多態(tài)信息含量均超過0.5，可為較理想的連鎖分析工具。趙進等［6-7］研究了嵊州長毛兔8個微衛(wèi)星位點的遺傳變異，發(fā)現(xiàn)該群體平均多態(tài)信息含量和遺傳雜合度分別為0.798和0.826，平均每個座位等位基因數(shù)7.63個，表明該兔品系8個微衛(wèi)星座位上基因純合度較低，遺傳變異較大，群體遺傳多樣性豐富。趙家平［8］檢測了6個家兔品種的10個微衛(wèi)星標記，結果發(fā)現(xiàn)，山東諸城長毛兔群體種內雜合度和多態(tài)信息含量分別為0.863 34和0.626 274，具有豐富的多態(tài)性和較高的遺傳多樣性，而品種間分化不大，其中長毛兔與獺兔遺傳關系稍遠。孫紅梅等［9］研究發(fā)現(xiàn)，山東諸城長毛兔多態(tài)信息含量0.6263，雜合度0.8633，有效等位基因數(shù)3.5，與其他家兔品種一樣均具有豐富的遺傳多樣性，但與其他生產類型的家兔品種遺傳距離較遠。朱滿興等［10］檢測了皖系長毛兔Sat4、Sat13、Sol33和Sol44等4個微衛(wèi)星位點，發(fā)現(xiàn)皖系長毛兔群體平均基因雜合度（0.680）和多態(tài)信息含量均較高（0.642）。翟頻等［11］研究了蘇系長毛兔12個微衛(wèi)星位點多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)蘇系長毛兔群體平均有效等位基因數(shù)3.689 7個，平均基因雜合度0.719 9，平均多態(tài)信息含量0.666 3，具有豐富的遺傳多樣性。張蕾［12］利用18對微衛(wèi)星引物分析了蘇系長毛兔和皖系長毛兔等8個家兔品種的遺傳多樣性，結果發(fā)現(xiàn)皖系長毛兔比蘇系長毛兔平均雜合度稍高（0.512 1，0.475 8），多態(tài)信息含量更為豐富（0.469 5，0.418 5），但它們之間的遺傳距離較近，可能與共同的德系長毛兔血緣和相似的選育方向有關。

1.3利用基因標記評估

近年來，研究者對長毛兔少數(shù)單基因多態(tài)性進行檢測并分析了其遺傳多樣性。龍繼蓉［2］研究了德系長毛兔、鎮(zhèn)海長毛兔等19個家兔品種的組織相容性復合體II類基因DQAα1區(qū)第2外顯子多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)其DNA和氨基酸多態(tài)性均十分豐富，核苷酸多樣度達0.031 27，氨基酸編碼存在明顯密碼子偏向性，異突變率高于同突變率，因而受到正選擇影響，其突變率高于線粒體D-環(huán)區(qū)，更適合于家兔遺傳多樣性評估。吳添文等［13-14］對皖系長毛兔、蘇系長毛兔等6個家兔品種角蛋白基因KAP3.1和KAP6.1遺傳多態(tài)性進行了檢測分析，結果發(fā)現(xiàn)兩長毛兔品種遺傳雜合度和多態(tài)信息含量均很低，說明評價兩長毛兔品種群體純合度較高，但KAP3.1和KAP6.1基因變異位點所受選擇壓力可能存在差異。夏圣榮等［15］和馮凱等［16］分別研究了5個家兔品種成纖維細胞生長因子5（FGF5）基因多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)家兔FGF5基因外顯子1和外顯子3分別存在TCT的插入缺失（Indel）和T19054C（Leu→Ser）突變；對于TCT-Indel，僅皖系長毛兔只有TCT插入1種基因型，其群體雜合度和多態(tài)信息含量為0，且與獺兔肉兔基因型分布均差異明顯。冒留留等［17］研究了5個家兔品種IL-10基因，發(fā)現(xiàn)皖系長毛兔的雜合度和多態(tài)信息含量均較低，外顯子4的B1等位基因遠高于其他品種，說明皖系長毛兔經系統(tǒng)選育后純合度較高，遺傳性能穩(wěn)定。對不同品種（品系）長毛兔群體進行遺傳多樣性分析可為長毛兔遺傳資源評價和雜種優(yōu)勢預測與利用提供科學依據(jù)。但應用不同標記的遺傳評定結果存在一定差異，因而在資源分子評定和育種實踐中應該注意應用足夠數(shù)量的適合標記并進行選優(yōu)，以提高評估準確性。

2　長毛兔毛用性狀分子遺傳基礎

長毛兔是以產毛用途為主的家兔，目前，研究主要集中在毛用性狀相關功能基因和遺傳標記等分子遺傳基礎方面?？共　⑸L及繁殖性狀分子遺傳基礎方面的研究較少。

2.1毛用性狀與微衛(wèi)星標記相關性

李庚航［4］研究滎經長毛兔7個微衛(wèi)星標記與體重、產毛量的相關性，結果表明微衛(wèi)星D1Mit30可作為長毛兔體重、產毛量標記，選擇DD、AA基因型個體可分別提高滎經長毛兔129日齡和202日齡的產毛量，AB基因型個體129日齡和202日齡體重均最大；標記SAT12與129日齡體重顯著相關，BC基因型個體體重較大。吳信生等［18］研究了4個微衛(wèi)星位點與皖系長毛兔1歲產毛量相關性，篩選獲得皖系長毛兔1歲時產毛量標記Sol33微衛(wèi)星座位，AD基因型和BD基因型個體產毛量最高，分別為354.77 g和330.63 g，選擇以上基因型個體可提高群體產毛量，而Sat4、Sat13和Sol44位點不影響1歲長毛兔產毛量。謝光美［5］研究了8個微衛(wèi)星位點與滎經長毛兔79日齡體重和產毛量的相關性，結果發(fā)現(xiàn)Sat2、Sat4、Sat7均與該日齡體重和產毛量顯著相關（P＜0.05），基因型AB（Sat3）、EE（Sat7）與高產毛量、大體重呈顯著正相關，基因型AE（Sat4）與高產毛量關聯(lián)，基因型AD、AE（Sat4）均與體重相關。翟頻等［11］研究發(fā)現(xiàn)，D3Utr2座位和D7Utr5微衛(wèi)星座位與蘇系長毛兔1歲時產毛量呈顯著相關，D3Utr2座位388/424和404/434基因型個體、D7Utr5座位163/163基因型個體具有較高的產毛量（P>0.05）。趙進等［7，19］研究了兔產毛量和兔毛品質的關系，發(fā)現(xiàn)8個微衛(wèi)星均與50、110、180、250和315日齡產毛量和體重，以及兔毛品質等部分性狀指標相關聯(lián)，可作為潛在分子標記，該研究為長毛兔毛用性狀的分子育種奠定了基礎。而林玉梅等［20］研究發(fā)現(xiàn)，微衛(wèi)星Sat7只顯著影響嵊州長毛兔粗型、細型兔毛的直徑，而Sat2、Sat4、Sat5對粗毛率，粗、細毛長度和直徑均無顯著影響。

2.2毛用性狀與FGF5基因和KAP家族標記的相關性

李春笑等［21］研究檢測了滎經長毛兔和肉兔FGF5基因外顯子1和3的多態(tài)性，并分析了多態(tài)性位點對11—12月、1—2月兔產毛量的影響，發(fā)現(xiàn)外顯子3位點B和位點C均顯著影響兩個養(yǎng)毛期的剪毛量，選擇兩位點為B2B2和C1C2基因型個體可提高群體產毛量。吳添文等［22］克隆皖系長毛兔角蛋白關聯(lián)蛋白基因KAP3.1和KAP3.3，檢測分析了KAP3.1、KAP3.3、KAP6.1和FGF5（兔成纖維細胞生長因子5）基因突變，發(fā)現(xiàn)它們在德系長毛兔、福建黃兔和美系獺兔等家兔的基因型分布差異沒有明顯規(guī)律性，可能這些突變對毛型無明顯影響［13-14］；而定量PCR技術研究了4個基因在0、2、4、6、8、10、12、16和20周齡4個部位皮膚的表達規(guī)律，推測4個基因與兔毛生長發(fā)育及年齡性換毛有關［22-23］。

2.3毛用性狀功能基因定位和高通量篩選

Mulsant等［24］研究發(fā)現(xiàn)，家兔FGF5基因外顯子1和3分別存在1個TCT插入缺失和T58C單核苷酸突變（Leu→Ser），其中T58C突變位點可能控制兔毛長度，C等位基因與angora長毛性狀緊密連鎖。Chantry-Darmon等［25］利用158個微衛(wèi)星首次構建了家兔第一代分子/細胞遺傳組合圖譜，把長毛和白化基因分別定位于長毛兔15q和1q，該圖譜有助于家兔基因鑒定和QTL定位。孫露露等［26］采用Agilent兔全基因組表達譜芯片篩選皖系長毛兔與新西蘭白兔差異表達基因共714個，其中上調基因284個，下調基因430個。通過熒光定量方法檢測分析了皖系長毛兔青幼年0～22周齡Wnt10b、Shh和SFRP2［27-28］的表達規(guī)律，研究提示前二者和SFRP2基因可能分別與毛發(fā)生長的旺盛期和結束期相關。

從上述相關研究可以看出，研究所涉及的長毛兔毛用性狀主要是產毛量，另外少量研究集中在兔毛品質和毛囊發(fā)育兩方面。所研究的微衛(wèi)星標記也比較集中，數(shù)量不多，功能基因主要有角蛋白關聯(lián)蛋白基因（KAPs）和成纖維細胞生長因子5（FGF5）。毛用性狀相關基因的高通篩選和精確定位等研究相對更少。

3　其他性狀與功能基因標記相關性

3.1抗病性狀

廖艷［29］首次克隆長毛兔IL-4基因，進行真核表達并檢測了重組蛋白對兔外周淋巴細胞增殖的影響，發(fā)現(xiàn)IL-4能促進淋巴細胞增殖。古小彬等［30］克隆德系長毛兔和白色獺兔IFN-γ基因并表達其重組蛋白，同時檢測其轉染細胞上清液對長毛兔外周血淋巴細胞活性的影響，結果表明IFN-γ能促進淋巴細胞顯著增殖。鄭晶等［31］克隆德系長毛兔和白色獺兔等IL-2基因，并利用不同長短時間培養(yǎng)的表達蛋白上清液處理兔外周血淋巴細胞，發(fā)現(xiàn)相對空載體和空白處理，處理組淋巴細胞明顯增多，而各處理組間無差異。冒留留等［17］克隆比對皖系長毛兔、海貍色獺兔、白色獺兔、閩西南黑兔、九疑山兔5個家兔群體IL-10基因的5個外顯子序列，發(fā)現(xiàn)外顯子3和4存在多態(tài)性，其中皖系長毛兔外顯子4突變位點B1等位基因為優(yōu)勢等位基因，與獺兔和肉兔完全相反，值得進一步研究。郭紅瑞等［32］通過免疫組化方法檢測了滎經長毛兔各腸段表皮生長因子（EGF）的表達情況，結果發(fā)現(xiàn)盲腸和結腸表達較高，表明EGF可能與消化特性或腸段抗病修復能力有關。

3.2生長及繁殖性狀

趙進等［19］研究嵊州長毛兔Kappa-casein基因多態(tài)性與兔生長、繁殖等性狀進行關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，BB基因型個體315日齡體重、21日齡窩重均顯著大于AA型個體，該基因座位還顯著影響長毛兔產仔數(shù)。

4　總結

綜上可見，長毛兔分子遺傳育種研究內容主要集中在兩個方面：①長毛兔種質資源的遺傳多樣性評估；②長毛兔毛用性狀等生產性能的分子遺傳標記篩選，其他方面的研究基本缺乏。目前，國內長毛兔雖然已經有一定研究，但是研究不夠系統(tǒng)深入，主要表現(xiàn)如下：①研究的品種（系）少，僅有德系一個引進品種和浙系、皖系、蘇系、滎經以及山東諸城等少數(shù)幾個國內品種（系）；②研究的性狀少，主要集中在產毛量、兔毛品質等毛用性狀，生長發(fā)育、繁殖和抗病等性狀涉及較少；③涉及的基因和標記少，不管是分子遺傳評估還是性狀關聯(lián)研究都集中在少數(shù)微衛(wèi)星座位和功能基因上，篩選獲得的潛在標記較少；④驗證功能的基因和分子標記數(shù)量十分有限?？傊还芘c豬、牛等大家畜相比，還是與肉兔和獺兔相比，長毛兔分子遺傳育種相關基礎研究都嚴重滯后，文獻資料甚少，國外因長毛兔產業(yè)已經很小，相關研究更少。不過，目前存在幾方面的重要機遇：首先，家兔作為實驗動物模型有生理生化等眾多方面的研究基礎；其次，歐洲穴兔基因組測序完成，2009年發(fā)布OryCun2.0，達7倍深度覆蓋，這樣為長毛兔分子水平研究提供了極大便利；第三，家兔全基因組表達譜芯片、第二代高通量測序等先進技術的普及與應用也為長毛兔等家兔分子遺傳育種研究提供了良好工具。

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Research Progress in Molecular Genetics and Breeding in Angora Rabbit

HuangDongwei，ZhaoHuiling，Chen Sheng，et al
（Institute ofAnimal and Veterinary，Anhui AcademyofAgricultural Science，Hefei 230031，China）

The research progress in molecular genetics and breeding in Angora rabbit were reviewed in this paper in molecular evaluation ofgenetic diversityand molecular genetics basis ofproductive performance，soas toprovide references for Angora rabbit breeding.

Angora rabbit；molecular genetics and breeding；research progress

S829.2

A

2095-3887（2015）03-0048-04

10.3969/j.issn.2095-3887.2015.03.016

2015-03-09

國家兔產業(yè)技術體系（CARS-44-A-3）；安徽省農業(yè)科學院院長青年基金面上項目（14B0426）

黃冬維（1981-），男，助理研究員，博士。

趙輝玲（1965-），女，研究員，碩士，主要從事草食動物育種與生產研究。