卞永娟

呼吸道感染細(xì)菌培養(yǎng)及藥物敏感性試驗(yàn)

卞永娟

作者結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)從培養(yǎng)基的選擇﹑接種方式及培養(yǎng)條件﹑初次培養(yǎng)24 h致病菌的選取與分純﹑結(jié)果報(bào)告與解釋等方面對(duì)呼吸道感染細(xì)菌培養(yǎng)及藥物敏感性試驗(yàn)加以闡述, 進(jìn)而明確病原體是進(jìn)行感染性疾病治療的金標(biāo)準(zhǔn)。因此, 在技術(shù)上應(yīng)盡量完善試驗(yàn)條件, 爭(zhēng)取快速準(zhǔn)確找到病原微生物。

呼吸道感染；細(xì)菌培養(yǎng)；藥物敏感性；試驗(yàn)

引起呼吸道感染的常見(jiàn)細(xì)菌為革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌(肺炎鏈球菌﹑金黃色葡萄球菌﹑化膿性鏈球菌﹑流感嗜血桿菌﹑腦膜炎奈瑟菌﹑肺炎克雷伯桿等), 此外還有結(jié)核分枝桿菌等［1］。當(dāng)懷疑呼吸道有細(xì)菌感染時(shí), 建議先采樣進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)及藥物敏感性試驗(yàn), 同時(shí)根據(jù)病情決定是否經(jīng)驗(yàn)用藥, 等到培養(yǎng)及藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果完成后及時(shí)調(diào)整用藥。隨著國(guó)家關(guān)于加強(qiáng)抗菌藥物規(guī)范使用文件的出臺(tái), 臨床越來(lái)越重視細(xì)菌培養(yǎng)的必要性和重要性, 明確病原體是進(jìn)行感染性疾病治療的金標(biāo)準(zhǔn)。因此, 在技術(shù)上應(yīng)盡量完善試驗(yàn)條件,爭(zhēng)取快速準(zhǔn)確找到病原微生物。本文結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)就呼吸道感染細(xì)菌培養(yǎng)及藥物敏感性試驗(yàn)加以闡述。

1 培養(yǎng)基的選擇

對(duì)于呼吸道病原體培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應(yīng)盡量滿足各類細(xì)菌的生長(zhǎng)條件。通常選用包括哥倫比亞血培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基, 該培養(yǎng)基能夠使絕大多數(shù)的細(xì)菌生長(zhǎng), 用于細(xì)菌種類及比例的判斷及革蘭陽(yáng)性菌的觀察與分離。巧克力培養(yǎng)基作為流感嗜血桿菌﹑卡他莫拉菌及其他革蘭陰性球菌, 如腦膜炎奈瑟菌及不動(dòng)桿菌某些種的觀察和分離, 特別是流感嗜血桿菌只在巧克力培養(yǎng)基上才能夠生長(zhǎng)良好［2,3］。

2 接種方式及培養(yǎng)條件

實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后應(yīng)盡快接種。標(biāo)本應(yīng)先進(jìn)行培養(yǎng)接種,再進(jìn)行涂片, 以免在涂片過(guò)程中污染, 影響培養(yǎng)結(jié)果。根據(jù)涂片結(jié)果將拒收的不合格標(biāo)本盡快通知臨床。涂片不合格,但已經(jīng)接種的標(biāo)本, 可報(bào)告培養(yǎng)的細(xì)菌種類及比例, 注明“疑似非下呼吸道標(biāo)本”字樣［4］。

呼吸道標(biāo)本的接種方法根據(jù)具體的標(biāo)本類型略有不同。①上呼吸道來(lái)源的各類拭子在培養(yǎng)基一區(qū)進(jìn)行反復(fù)涂抹。②痰液標(biāo)本的接種應(yīng)選取黃粘部位進(jìn)行接種, 有條件的實(shí)驗(yàn)室可以洗痰去掉唾液部分, 甚至將黏痰部位進(jìn)行均質(zhì)化后進(jìn)行接種, 但整個(gè)過(guò)程應(yīng)避免污染。③支氣管肺泡灌洗液標(biāo)本應(yīng)定量接種10 μl或20 μl。④組織標(biāo)本應(yīng)在無(wú)菌條件下研磨后接種, 若是針吸組織樣本可以直接接種到血培養(yǎng)基上, 用接種環(huán)將組織盡量鋪開(kāi)與培養(yǎng)基充分接觸。

3 初次培養(yǎng)24 h致病菌的選取與分純

3.1 首次觀察時(shí)間為孵育后24 h, 對(duì)于生長(zhǎng)不良的培養(yǎng)基應(yīng)孵育48 h觀察第二次, 對(duì)于無(wú)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基應(yīng)孵育72 h甚至更長(zhǎng)時(shí)間才能做出無(wú)菌生長(zhǎng)的報(bào)告。特殊細(xì)菌如結(jié)核分枝桿菌等應(yīng)根據(jù)目的菌的生長(zhǎng)情況延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。即使是24 h已經(jīng)生長(zhǎng)良好的培養(yǎng)基也應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)48 h, 著重觀察有無(wú)類似博德特菌等慢生長(zhǎng)菌的出現(xiàn)。

3.2 標(biāo)本直接涂片鏡檢的結(jié)果可以用以指導(dǎo)解釋初次培養(yǎng)菌株情況的判斷, 培養(yǎng)基上的初培養(yǎng)菌種情況應(yīng)當(dāng)與標(biāo)本涂片結(jié)果保持一致, 若一種甚至多種生長(zhǎng)菌在標(biāo)本涂片中沒(méi)有觀察到, 建議對(duì)標(biāo)本進(jìn)行雙人二次檢測(cè)。

3.3 可根據(jù)以下內(nèi)容識(shí)別在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的大量細(xì)菌為潛在的主要病原體, 而不屬于呼吸道正常菌群。①若一種菌株在培養(yǎng)基第二區(qū)甚至是更高區(qū)域生長(zhǎng)的數(shù)量為中量或大量；②在標(biāo)本涂片中為主要可疑致病菌但在培養(yǎng)物中數(shù)量較少；③雖然只在培養(yǎng)基第一象限生長(zhǎng), 但為純培養(yǎng)物沒(méi)有其他呼吸道正常菌群生長(zhǎng), 同時(shí)標(biāo)本格蘭染色顯示是膿性標(biāo)本。

3.4 痰涂片結(jié)果和培養(yǎng)結(jié)果不一致的原因分析 ①由于痰標(biāo)本在進(jìn)行培養(yǎng)和涂片時(shí)選取的部位不一致。②某些快生長(zhǎng)菌所占比例并不多, 但由于其生長(zhǎng)速度快﹑營(yíng)養(yǎng)要求低, 能夠在培養(yǎng)過(guò)程中迅速變?yōu)閮?yōu)勢(shì)菌, 掩蓋了其他菌的生長(zhǎng), 造成結(jié)果不一致。③標(biāo)本從采集到接種的時(shí)間過(guò)長(zhǎng), 造成一部分苛養(yǎng)菌死亡, 特別是流感嗜血桿菌, 在涂片中看到的只是菌體殘骸, 而非活菌［5］。

4 結(jié)果報(bào)告與解釋

呼吸道標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果通常由涂片報(bào)告﹑培養(yǎng)及藥物敏感性報(bào)告組成。培養(yǎng)及藥物敏感性報(bào)告是對(duì)臨床更具有指導(dǎo)性意義的報(bào)告。

培養(yǎng)結(jié)果的參考價(jià)值一方面取決于患者的癥狀﹑特征,另一方面要結(jié)合痰涂片的結(jié)果判斷痰標(biāo)本是否合格才能進(jìn)一步參考。一份呼吸道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查報(bào)告包括正常菌群部分﹑條件致病菌以及該菌的藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果及解釋結(jié)果。正常菌群通常以半定量的形式報(bào)告, 在此處若不合格痰標(biāo)本還會(huì)標(biāo)注“疑似非下呼吸道標(biāo)本字樣”, 以提示臨床醫(yī)生對(duì)此報(bào)告的參考程度。

痰標(biāo)本細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)報(bào)告通常有陰性報(bào)告和陽(yáng)性報(bào)告。臨床可以參考此報(bào)告進(jìn)行抗菌藥物治療, 具有重要的臨床參考價(jià)值［6］。

5 小結(jié)

在使用抗生素前, 應(yīng)先收集標(biāo)本, 對(duì)感染病原菌先進(jìn)行培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn), 然后根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果來(lái)選擇合適的抗生素,才能在臨床上正確使用抗菌藥物, 減少耐藥菌株和菌群失調(diào)的出現(xiàn), 有的放矢及時(shí)治愈疾病。

［1］陳再玲. 654例下呼吸道感染患者痰培養(yǎng)病原菌及其藥物敏感試驗(yàn)分析.中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新, 2012, 9(23):138-140.

［2］傅石明. 改進(jìn)痰培養(yǎng)標(biāo)本篩選方法的探討.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2012, 22(9):1991-1992.

［3］王惠萱, 李雪梅, 滕毅, 等. 臨床痰標(biāo)本檢驗(yàn)前期處理新方法研究. 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2010, 31(8):898-899.

［4］賴群清. 住院老人痰標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果分析. 海南醫(yī)學(xué), 2010, 21(3):59-60.

［5］陳麗華, 杜娟.痰標(biāo)本直接涂片與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果分析. 基層醫(yī)學(xué)論壇, 2012, 16(35):4729-4730.

［6］張旻, 盧少華. 500份痰標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析.中國(guó)醫(yī)藥科學(xué), 2013, 3(24):121-122.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.22.196

2015-06-19］

136000 吉林省四平市結(jié)核病醫(yī)院