翁海光 沈冬 茅衛(wèi)東 韓蘭秀

DC-CIK過繼免疫治療聯(lián)合化療治療晚期結直腸癌的臨床研究

翁海光 沈冬 茅衛(wèi)東 韓蘭秀

目的 探討樹突狀細胞聯(lián)合細胞因子誘導的殺傷細胞（DC-CIK）過繼免疫治療聯(lián)合化療治療晚期結直腸癌的療效及安全性。方法 2010年1月至2013年12月確診的235例晚期結直腸癌患者，按隨機數(shù)字表法分成兩組，DC-CIK組124例患者行DC-CIK過繼免疫治療聯(lián)合化療，單純化療組111例患者行單純化療，評價兩組患者治療后免疫功能、療效、生存期、不良反應以及生活質量等。結果 治療3個周期后，DC-CIK組患者的CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK、NKT、Treg，CD4+T細胞以及CD4+T細胞內IFN-γ、IL-2、TNF-α等指標與治療前比較均無統(tǒng)計學差異（均P＞0.05）；患者的中位無進展生存期（PFS）為7.0個月（95% CI=6.4～7.6），中位總生存期（OS）為14.5個月（95%CI=13.4～15.6），與單純化療組比較均有統(tǒng)計學差異（均P＜0.01）。DC-CIK組患者的Ⅲ～Ⅳ度不良反應中，血白細胞下降的發(fā)生率為22.0%（11/50），低于單純化療組（P＜0.05）。DC-CIK組治療前后生活質量評分分別為（51.1±6.2）和（62.3±5.2）分，比較有統(tǒng)計學差異（t=15.413，P＜0.01）。結論 DC-CIK過繼免疫治療聯(lián)合化療能夠明顯改善晚期結直腸癌患者的免疫功能，提高患者生存期及生存質量，而且不良反應少、安全性高。

DC-CIK 免疫療法 結直腸癌 療效 生存分析

結直腸癌是我國常見腫瘤，其主要治療方法有手術、化療、放療等，手術治療是早期結直腸癌患者的首選。但是，臨床上近30.0%的患者確診時已是晚期[1]，大多數(shù)晚期患者已失去手術治療機會，因而尋求合理的內科治療方案顯得尤為重要。雖然規(guī)范化療的有效率能夠達到50.0%，但是在殺滅腫瘤細胞的同時也損傷了正常細胞，不良反應較大。樹突狀細胞聯(lián)合細胞因子誘導的殺傷細胞（DC-CIK）過繼免疫治療是一種新興免疫治療方法，能夠有效抑制和殺滅腫瘤細胞，提高患者的機體

免疫力和生活質量，降低了腫瘤復發(fā)、轉移的風險，同時避免對正常細胞的損傷，減少了不良反應，具有較高的安全性[2－3]。國內外目前已有部分對結直腸癌患者進行DCCIK過繼免疫治療聯(lián)合化療的研究[2－6]，但DC－CIK過繼免疫治療聯(lián)合化療對于晚期結直腸癌患者的各項免疫學指標、疾病控制率、生存期和生活質量等的影響仍缺少系統(tǒng)報道。本研究從2010年開始連續(xù)4年對確診的晚期結直腸癌患者分別應用DC－CIK過繼免疫治療聯(lián)合化療，并與單純化療進行對比，觀察其臨床療效和安全性，現(xiàn)將結果報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 2010年1月至2013年12月東南大學醫(yī)學院附屬江陰醫(yī)院確診的晚期結直腸癌患者共235例，其中男130例，女105例。按隨機數(shù)字表法將患者分成兩組，DC－CIK組124例，年齡48～79歲，平均（63.2±4.3）歲，中位年齡59歲；單純化療組111例，年齡44～76歲，平均（61.7±5.2）歲，中位年齡55歲。患者納入標準：（1）經(jīng)病理確診的晚期結直腸癌（Ⅲ～Ⅳ期）；（2）PS評分1～2分；（3）心、肝、腎等臟器功能基本正常；（4）至少能夠完成2個周期治療；（5）接受治療前后完善輔助檢查并詳細記錄結果。排除標準：（1）存在心、肝、腎等內科疾??；（2）存在免疫性疾病或其他腫瘤；（3）存在感染性疾??；（4）合并肺部或其他部位嚴重感染；（5）使用激素或免疫抑制劑。兩組患者的性別、年齡構成、臨床分期、組織學類型等臨床資料比較均無統(tǒng)計學差異（均P＞0.05），顯示資料均衡可比，見表1。本研究方案已獲得東南大學醫(yī)學院附屬江陰醫(yī)院倫理委員會批準，且所有患者及家屬均在入組前簽署了知情同意書。

1.2 治療方案

1.2.1 單純化療組 所有患者化療方案均采用FOLFOX4方案，具體為：奧沙利鉑85mg/m2靜脈滴注，第1天；甲酰四氫葉酸鈣200mg/m2靜脈滴注，第1天；5－氟尿嘧啶400mg/m2靜脈推注，第1～2天；600mg/m2靜脈微泵注射持續(xù)22h，第1～2天。14d為1個周期，1個療程12個周期。

1.2.2 DC－CIK組 患者化療前采集外周血50ml，分離單個核細胞（PBMCs），置于37℃、5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，收集懸浮細胞，以GT－T551培養(yǎng)液調整細胞密度，常規(guī)培養(yǎng)24h后加入重組人IL－2（rhIL－2），定期觀察并適時分瓶培養(yǎng)。結合細胞狀態(tài)、擴增數(shù)量和成熟度，培養(yǎng)9～21d后收集細胞。細胞培養(yǎng)物須經(jīng)免疫功能檢測合格，且無菌生長。以0.9%氯化鈉注射液洗滌細胞后，將其混懸于含2%白蛋白的0.9%氯化鈉注射液100ml中，分兩次回輸給患者，每個月回輸1次?；颊卟裳蟮?天開始化療，方案同單純化療組。

表1 兩組患者臨床資料比較

1.3 療效評價

1.3.1 免疫功能評價 患者均于每周期治療前以及完成3個周期治療后，抽取外周血。以流式細胞儀（美國BD公司）檢測患者免疫學指標的變化情況。免疫學指標包括T細胞亞群，包括：總CD3+T細胞、CD3+CD8+T細胞、CD3+CD4+T細胞、CD3－CD56+NK細胞、CD3+CD56+NKT細胞以及CD4+CD25+調節(jié)性T細胞（Treg）。同時檢測CD4+T細胞內IFN－γ、IL－2、TNF－α含量。

1.3.2 近期療效評價 根據(jù)WHO實體瘤療效評價（RECIST）標準，療效分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩(wěn)定（SD）和疾病進展（PD），臨床有效率（RR）＝（CR患者數(shù)+PR患者數(shù)）/患者總數(shù)×100%，疾病控制率（DCR）＝（CR患者數(shù)+PR患者數(shù)+SD患者數(shù)）/患者總數(shù)×100%。

1.3.3 遠期療效評價 本研究隨訪至2013年12月31日，主要隨訪方式為電話隨訪。主要研究終點為疾病進展，其次為死亡，并評價兩組患者的無進展生存期（PFS）和總生存期（OS）。

1.3.4 不良反應評價 根據(jù)美國國立癌癥研究所NCI《急性和亞急性毒性反應表現(xiàn)和分度標準》，分為0～Ⅳ度。入組患者于DC－CIK過繼免疫治療及化療第3個周期末評價近期療效。

1.3.5 生活質量評價 采用歐洲癌癥研究機構與治療組織的癌癥患者生命質量測定量表（EORTC QLQ－C30），包含軀體、角色、情緒、認知、社會等5個功能量表，所有項目總分0～100分，得分越高，提示生活質量越高。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件。計量資料以表示，滿足正態(tài)分布或方差齊性的計量資料組間比較采用t檢驗，否則采用秩和檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗。PFS和OS分析采用Kaplan－Meier法，生存分析運用log－Rank檢驗。

2 結果

2.1 兩組患者治療前后外周血T細胞亞群的變化 比較兩組患者治療前、治療3個周期后外周血T細胞亞群顯示，DC－CIK組治療前、治療3個周期后CD3+T細胞、CD3+CD8+T細胞、CD3+CD4+T細胞、CD3－CD56+NK細胞、CD3+CD56+NKT細胞以及CD4+CD25+Treg細胞等指標均無統(tǒng)計學差異（均P＞0.05），而單純化療組治療后除CD3+CD56+NKT細胞外，其他指標與治療前比較均有統(tǒng)計學差異（均P＜0.05），見表2。

表2 兩組患者治療前后外周血T細胞亞群的變化（%）

2.2 兩組患者治療前后CD4+T細胞中主要細胞因子含量的變化 進一步比較兩組患者治療3個周期后CD4+T細胞中主要細胞因子含量的變化，DC－CIK組治療前后IFN－γ、IL－2、TNF－α含量均無明顯變化（均P＞0.05）；而單純化療組治療前后IFN－γ、IL－2、TNF－α含量均有統(tǒng)計學差異（均P＜0.05），見表3。

2.3 兩組患者的療效評價 兩組患者的RR比較無統(tǒng)計學差異（χ2＝2.774，P＞0.05）；但DC－CIK組患者的DCR高于單純化療組（χ2＝17.455，P＜0.01），見表4。截止到2013年12月，兩組患者隨訪率均為100.0%。DCCIK組患者的中位PFS為7.0個月（95%CI＝6.4～7.6），中位OS為14.5個月（95%CI＝13.4～15.6）；單純化療組患者中位PFS為5.2個月（95%CI＝5.0～5.4），中位OS為10.9個月（95%CI＝9.5～12.3），兩組比較均有統(tǒng)計學差異（χ2＝30.438、11.342，均P＜0.01），見圖1－2。

表3 兩組患者治療前后CD4+T細胞中主要細胞因子含量變化（%）

表4 兩組患者的療效評價

2.4 兩組患者的不良反應比較 DC－CIK組和單純化療組的Ⅲ～Ⅳ度不良反應中，血白細胞減少發(fā)生率分別為22.0%（11/50）和44.2%（23/52），兩組比較有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。其他不良反應如貧血、血小板減少、惡心、嘔吐、肝功能障礙等，兩組比較均無統(tǒng)計學差異（均P＞0.05），見表5。

2.5 兩組患者治療前后生活質量評價 DC－CIK組患者治療前后生活質量評分分別為（51.1±6.2）和（62.3± 5.2）分，比較有統(tǒng)計學差異（t＝15.413，P＜0.01）。而單純化療組患者生活質量下降較為明顯，治療前后生活質量評分分別為（50.5±5.2）和（47.3±6.4）分，比較也有統(tǒng)計學差異（t＝4.321，P＜0.01）。

3 討論

DC在機體抗腫瘤免疫中發(fā)揮著非常重要的作用，能夠特異性激活CD8+和CD4+T細胞，是針對腫瘤抗原免疫反應的理想靶點[7]。美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）于2010年5月批準了命名為Provenge的DC腫瘤疫苗，將其應用于前列腺癌治療，意義十分重大[8]。近年興起的CIK細胞免疫治療具有獨特優(yōu)勢，該療法能夠激活并強化機體免疫系統(tǒng)，通過抗原特異性T細胞靶向殺傷腫瘤細胞。而機體免疫系統(tǒng)具有免疫記憶，對復發(fā)腫瘤也能起到抑制或殺傷作用。DC與CIK細胞免疫治療聯(lián)合應用不但能夠激活DC介導的MHC限制性細胞毒反應，同時可發(fā)揮CIK的非MHC限制性細胞毒反應，增加對腫瘤細胞的殺傷，而且在有效抑制腫瘤的同時，也能提高腫瘤患者的生活質量，因此DC－CIK過繼免疫治療成為目前行之有效的國際化免疫治療方案[7－9]。

圖1 兩組患者的無進展生存曲線

表5 兩組患者不良反應比較（例）

本研究的一大特色是納入患者樣本量較大（235例），研究時間較長（4年），并對患者DC－CIK過繼免疫治療后的免疫功能變化、近、遠期療效和安全性進行了評價，同既往研究相比更為全面、客觀。CIK細胞具有很強的細胞毒性，可以誘導腫瘤細胞凋亡，從而殺死耐藥的腫瘤細胞，并能產(chǎn)生IFN－γ、IL－2和其他抗腫瘤細胞因子[10]，因此DC－CIK過繼免疫治療能夠明顯改善患者由于化療導致的免疫功能低下，為患者帶來臨床獲益。本研究中DC－CIK組患者治療3個周期后T細胞亞群，特別是CD4+T細胞中IFN－γ、IL－2、TNF－α等指標與治療前無統(tǒng)計學差異，與尹良偉等[4]、張京雨等[11]的研究一致。DC－CIK組患者的DCR達到76.6%，略高于國內外其他研究的60.0%～70.0%[3－4,12－13]，說明DC－CIK細胞免疫治療在緩解腫瘤進展，延長患者PFS方面具有顯著的積極作用。

本研究中DC－CIK組患者中位PFS為7.0個月，高于單純化療組患者的5.2個月，與國內外報道的中位PFS在6.0個月左右接近[4,10－12]。Zhang等[10]回顧性研究了CIK治療60例結直腸癌患者的臨床效果，其中位PFS和中位OS分別為25.8個月和41.3個月，顯著高于本研究結果。這主要是由于上述研究包含了部分Ⅰ～Ⅱ期患者，而本研究中僅納入了Ⅲ～Ⅳ期患者，預后均較差，但所有研究均提示DC－CIK過繼免疫治療能夠有效延長患者的PFS。本研究DC－CIK組患者的中位OS為14.5個月，其他研究顯示DC－CIK過繼免疫治療聯(lián)合化療患者的中位OS為12.0個月，最長可達到18.0個月[14－15]，說明DC－CIK細胞免疫治療與化療可能起到協(xié)同作用，顯著提高了患者OS。本研究與既往研究的不同之處在于，本研究發(fā)現(xiàn)DC－CIK組患者的PFS、OS均高于單純化療組，且均有統(tǒng)計學差異，這可能與DC－CIK的回輸顯著改善了患者的免疫功能有關。而國內大部分研究結果顯示，DC－CIK過繼免疫治療與化療聯(lián)合對改善患者PFS更有效。同時本研究對治療的不良反應和患者生活質量的分析也提示，DC－CIK過繼免疫治療聯(lián)合化療在為患者帶來臨床獲益的同時，具有良好的安全性，并能顯著提高患者生活質量，值得在臨床推廣[7,13,16－17]。

圖2 兩組患者的總生存曲線

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Clinical efficacy of DC-CIK immunotherapy combined with chemotherapy in treatmentof advanced colorectal cancer

WENG Haiguang,SHEN Dong,MAO Weidong,et al.
Department of Oncology,the Affiliated Jiangyin Hospital of Southeast University Medical College,Jiangyin 214400,China

【 Abstract】 Objective To investigate the efficacy and safety of DC-CIK (dendritic cell-cytokine induced killer cell) immunotherapy combined with chemotherapy for advanced colorectal cancer. Methods Two hundred and thirty five patients with advanced colorectal cancer admitted in Affiliated Jiangyin Hospital of Southeast University Medical College from January 2010 to December 2013 were enrolled in the study.Patients were randomly assigned in two groups,124 cases received DC-CIK combined with chemotherapy(DC-CIK group),and 111 cases received routine chemotherapy(chemotherapy group).The immune function,efficacy,survival,toxicity and quality of life were evaluated and compared between two groups. Results After 3 cycles of treatment,no significant difference was observed between 2 groups regarding CD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+,NK,NKT,Treg, CD4+T cells,IFN-γ,IL-2,TNF-αindex and other indicators(all P＞0.05).Log-Rank test showed that the median progress-free survival(PFS)(7 months,95%CI=6.4～7.6)and median overall survival(OS)(14.5 months,95%CI=13.4～15.6)in DC-CIK group were significantly longer than those in chemotherapy group(both P＜0.01).The incidence of leukopenia(22.0%,11/50)in DC-CIK group was lower than that in chemotherapy group(P＜0.05).The quality of life scores in DC-CIK group were increased from 51.1±6.2 before treatment to 62.3±5.2 after treatment(t=15.413,P＜0.01). Conclusion DC-CIK immunotherapy combined with chemotherapy can significantly improve immune function,progression-free survival and overall survival and the quality of life for patients with advanced colorectal cancer.

DC-CIK Immunotherapy Colorectal cancerEfficacy Survival analysis

2014-12-18）

（本文編輯：胥昀）

無錫市衛(wèi)生局面上項目（ML201318）

214400 江陰，東南大學醫(yī)學院附屬江陰醫(yī)院腫瘤科（翁海光系進修醫(yī)師，現(xiàn)在浙江普陀醫(yī)院消化內科工作）

沈冬，E-mail：wdmao_jy@163.com