呂昕 王悅紅 周建英

TTF-1、SPA表達(dá)與Ⅱ期肺腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)及生存關(guān)系的研究

呂昕 王悅紅 周建英

目的 探討甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1（TTF-1）、肺表面活性物質(zhì)A（SPA）的表達(dá)與Ⅱ期肺腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)及生存的相關(guān)性。方法 收集經(jīng)根治手術(shù)治療的104例Ⅱ期原發(fā)性肺腺癌患者資料，采用免疫組化法綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞所占比例進(jìn)行半定量測(cè)定腫瘤組織的TTF-1、SPA表達(dá)，分析兩者與患者術(shù)后復(fù)發(fā)及生存的相關(guān)性。結(jié)果 TTF-1陽(yáng)性表達(dá)患者術(shù)后2年復(fù)發(fā)率較陰性表達(dá)患者低[61.2%（60/98）vs 83.3%（5/6）]，術(shù)后生存期較長(zhǎng)[（26.00±1.89）個(gè)月vs（22.00±8.76）個(gè)月]，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。SPA陽(yáng)性表達(dá)患者術(shù)后2年復(fù)發(fā)率較陰性表達(dá)患者明顯為低[54.8%（34/62）vs 79.2%（19/24）]，術(shù)后生存期明顯較長(zhǎng)[（30.00±1.41）個(gè)月vs（21.00±2.18）個(gè)月]，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。結(jié)論 SPA陽(yáng)性表達(dá)預(yù)示Ⅱ期原發(fā)性肺腺癌患者術(shù)后2年復(fù)發(fā)率低，生存期長(zhǎng)。TTF-1表達(dá)與Ⅱ期肺腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)及生存有一定的相關(guān)性。

肺腺癌 甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1 表面活性物質(zhì)蛋白A 復(fù)發(fā)

可經(jīng)手術(shù)治療的Ⅱ期非小細(xì)胞肺癌（NSCLC），尤其是肺腺癌，術(shù)后仍有較高的復(fù)發(fā)率。如何發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)一些為數(shù)不多的分子標(biāo)志物，以期來(lái)評(píng)估預(yù)后、預(yù)測(cè)治療療效一直是研究的熱點(diǎn)。作為肺腺癌的特異性標(biāo)志蛋白的甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1（thyroid transcription factor-1，TTF-1）已受到廣泛關(guān)注，其參與調(diào)控表面活性物質(zhì)A（surfactant protein-A，SPA）表達(dá)。目前TTF-1、SPA與肺腺癌患者手術(shù)治療預(yù)后相關(guān)性的研究報(bào)道不多。為了評(píng)價(jià)兩者與Ⅱ期肺腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)與生存的關(guān)系，我們對(duì)本院近年來(lái)收治的104例患者進(jìn)行隨訪和研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 2007年9月至2011年8月在本院接受根治手術(shù)治療并符合下述納入標(biāo)準(zhǔn)的原發(fā)性肺腺癌患者共104例：（1）手術(shù)組織病理診斷明確為原發(fā)性肺腺癌；（2）參照UICC/IASLC第7版非小細(xì)胞肺癌指南進(jìn)行術(shù)后TNM分期為Ⅱ期；（3）手術(shù)治療前未進(jìn)行化療或放療等抗腫瘤治療；（4）有TTF-1和/或SPA的免疫組化檢測(cè)結(jié)果記錄。104例患者中，男56例，女48例，年齡35～78(61.23±9.72)歲；末次隨訪時(shí)間為2013年8月或術(shù)后60個(gè)月或出現(xiàn)死亡終點(diǎn)事件。術(shù)后復(fù)發(fā)判斷均經(jīng)影像學(xué)檢查證實(shí)。

1.2 TTF-1、SPA表達(dá)檢測(cè) 采用免疫組化SP法測(cè)定肺腺癌組織標(biāo)本中TTF-1、SPA的表達(dá)。由兩位高年資的病理科醫(yī)師對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行核實(shí)。TTF-1以細(xì)胞核染為棕黃色或棕褐色為陽(yáng)性細(xì)胞（圖1），SPA以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞（圖2）。每個(gè)切片隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野，按陽(yáng)性細(xì)胞百分比以及染色的強(qiáng)弱兩部分來(lái)判讀結(jié)果，陽(yáng)性細(xì)胞≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，＞50%為3分；染色程度無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；兩項(xiàng)指標(biāo)的評(píng)分相乘，0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽(yáng)性（+），4～6分為中度陽(yáng)性(++)，7～9分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。0～1分判為陰性組，2～9分判為陽(yáng)性組。104例手術(shù)標(biāo)本均進(jìn)行了TTF-1檢測(cè)，86例同時(shí)有SPA檢測(cè)結(jié)果。

圖1 肺腺癌TTF-1陽(yáng)性（免疫組化SP法，×100）

圖2 肺腺癌SPA陽(yáng)性（免疫組化SP法，×100）

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；率的比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，單因素分析采用log-rank檢驗(yàn)，多因素分析采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 不同TTF-1、SPA表達(dá)患者術(shù)后復(fù)發(fā)率的比較 104例患者中TTF-1表達(dá)陽(yáng)性98例（94.2%），86例有SPA檢測(cè)結(jié)果的患者中，SPA表達(dá)陽(yáng)性62例（72.1%）。72例（69.2%）完成術(shù)后輔助化療2～6個(gè)周期，方案均為聯(lián)合鉑類兩藥化療（Pemetrexed、Gemcitabine、Docetaxel等）。104例患者中，65例（62.5%）術(shù)后2年內(nèi)復(fù)發(fā)，其中TTF-1陽(yáng)性組復(fù)發(fā)率為61.2%（60/98），TTF-1陰性組復(fù)發(fā)率為83.3%（5/6），兩組復(fù)發(fā)率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（連續(xù)校正χ2=0.424，P＞0.05）。86例有SPA檢測(cè)結(jié)果的患者中53例（61.6%）術(shù)后2年內(nèi)復(fù)發(fā)，其中SPA陽(yáng)性組復(fù)發(fā)率為54.8%（34/62），SPA陰性組復(fù)發(fā)率為79.2%（19/24），兩組復(fù)發(fā)率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 4.330，P＜0.05）。

2.2 不同TTF-1、SPA表達(dá)的術(shù)后復(fù)發(fā)患者術(shù)后生存期比較 65例術(shù)后復(fù)發(fā)患者中男36例，女29例，年齡35～76（62.80±8.80）歲；術(shù)后生存時(shí)間為4～54個(gè)月。其中55例患者隨訪至死亡終點(diǎn)，有完整生存資料。TTF-1陽(yáng)性組生存時(shí)間為（26.00±1.89）個(gè)月，TTF-1陰性組為（22.00±8.76）個(gè)月，兩組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 1.516，P＞0.05）。SPA陽(yáng)性組生存時(shí)間為（30.00±1.41）個(gè)月，SPA陰性組為（21.00±2.18）個(gè)月，兩組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=12.087，P＜0.05）。

2.3 不同TTF-1、SPA表達(dá)的術(shù)后復(fù)發(fā)患者生存分析 不同TTF-1表達(dá)的術(shù)后復(fù)發(fā)患者的生存曲線見圖3，不同SPA表達(dá)的術(shù)后復(fù)發(fā)患者的生存曲線見圖4。

圖3 不同TTF-1表達(dá)的術(shù)后復(fù)發(fā)患者的生存曲線

圖4 不同SPA表達(dá)的術(shù)后復(fù)發(fā)患者的生存曲線

由圖3可見，TTF-1陰性組生存曲線較TTF-1陽(yáng)性組下移，但兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.516，P＞0.05）；由圖4可見，SPA陰性組生存曲線明顯降低，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=12.087，P＜0.05）。在調(diào)整了年齡、性別、腫瘤大小和N分期等病理特征后，Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析顯示，SPA陰性表達(dá)是預(yù)后不良的預(yù)測(cè)因素。

3 討論

TTF-1也稱為NKX2.1，主要存在于肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞以及Clara細(xì)胞中，參與調(diào)控SPA、SPB的表達(dá)，在甲狀腺、肺、前腦的發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要作用。目前，在臨床上已將其作為肺腺癌組織特異性標(biāo)志蛋白，用于鑒別肺腺癌與鱗癌，以及原發(fā)性與轉(zhuǎn)移性肺癌[1-2]，大部分（70%～100%）原發(fā)性肺腺癌中TTF-1表達(dá)陽(yáng)性，本組患者TTF-1陽(yáng)性表達(dá)率為94.2%。

已有研究發(fā)現(xiàn)TTF-1與NSCLC預(yù)后相關(guān)，但無(wú)明確定性[3-4]，但大部分研究?jī)A向于TTF-1陽(yáng)性表達(dá)是NSCLC患者有利的預(yù)后因素[4-5]。有4項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，早期NSCLC患者TTF-1染色與肺腺癌較長(zhǎng)生存期相關(guān)[6-9]。Barlési等[10]分析了106例Ⅰ～Ⅳ期肺腺癌患者的資料后發(fā)現(xiàn)，TTF-1強(qiáng)陽(yáng)性與總生存期密切相關(guān)。本研究中，TTF-1陽(yáng)性表達(dá)患者復(fù)發(fā)率低于TTF-1陰性表達(dá)患者（61.2%vs83.3%），生存期長(zhǎng)也長(zhǎng)于后者[（26.00±1.89）個(gè)月vs（22.00±8.76）個(gè)月]，雖然差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（可能本研究樣本數(shù)較少之故），但似有一定的趨勢(shì)。關(guān)于TTF-1表達(dá)與肺癌生存期關(guān)系的機(jī)制尚不清楚，基礎(chǔ)研究顯示，TTF-1的轉(zhuǎn)錄靶向因子肌球蛋白結(jié)合蛋白能抑制Rock1基因并且負(fù)向調(diào)節(jié)肌動(dòng)球蛋白的結(jié)構(gòu)，減少單個(gè)細(xì)胞的游動(dòng)，增加集體細(xì)胞的遷移，最終減少細(xì)胞的侵襲力和轉(zhuǎn)移[11]。也有研究顯示，TTF-1能抑制Ki-67的表達(dá)，并且誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡[12]。

SPA是肺呼吸上皮細(xì)胞分泌的一種糖蛋白，屬于膠凝素家族的重要成員，參與維持肺表面活性物質(zhì)功能及調(diào)節(jié)免疫功能等，也是臨床診斷腺癌的特異性標(biāo)志物，與腫瘤分化程度相關(guān)[2]。Jiang等[13]的研究表明，Ⅰ期NSCLC患者SPA低表達(dá)提示術(shù)后復(fù)發(fā)時(shí)間短，預(yù)后差。Tsutsumida等[14]的研究顯示，SPA低表達(dá)的微乳頭腺癌預(yù)后差。本研究結(jié)果顯示，SPA陽(yáng)性表達(dá)患者復(fù)發(fā)率明顯低于SPA陰性表達(dá)患者（54.8%vs79.2%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后復(fù)發(fā)患者的生存分析同樣顯示SPA陽(yáng)性表達(dá)患者較SPA陰性表達(dá)患者生存期長(zhǎng)[（30.00± 1.41）個(gè)月vs（21.00±2.18）個(gè)月]。因此，SPA可作為Ⅱ期術(shù)后肺腺癌患者預(yù)后良好的指標(biāo)。但關(guān)于SPA表達(dá)與生存期相關(guān)的具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

有文獻(xiàn)報(bào)道肺癌患者的局部復(fù)發(fā)多發(fā)生在術(shù)后2年內(nèi)，本研究結(jié)果顯示：Ⅱ期肺腺癌術(shù)后2年內(nèi)復(fù)發(fā)率在60%左右。這可能與納入本研究的患者中30.8%未行術(shù)后輔助化療有關(guān)。Ⅱ期肺腺癌患者較高的術(shù)后復(fù)發(fā)率應(yīng)引起臨床醫(yī)師的高度關(guān)注。TTF-1、SPA表達(dá)陰性患者傾向于更高的術(shù)后2年復(fù)發(fā)率和較短的術(shù)后復(fù)發(fā)生存時(shí)間，應(yīng)密切隨訪處理，以便為患者爭(zhēng)取到更多的生存時(shí)間。由于本研究樣本量較小，上述結(jié)論還需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本數(shù)進(jìn)行前瞻性研究來(lái)驗(yàn)證。

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Correlation between expression of TTF-1 and SPA and the recurrence and prognosis in postoperative stageⅡlung adenocarcinomas

LV Xin,WANG Yuehong,ZHOU Jianying.
Department of Respiratory,the First Affiliated Hospital,Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310003,China

Objective To investigate the correlation between exp ression of thyroid transcrip tion factor-1 and surfactant p rotein-A in tumor tissues and the recurrence and p rognosis in postoperative stageⅡlung adenocarcinomas.Methods A totalof 104 stageⅡlung adenocarcinoma patients after rad ical operation were analyzed.Exp ression TTF-1 and SPA in Tumor tissues were analyzed by immunohistochem istry,inc luding staining intensity and percentage of positive cells.Afterwards we evaluateed the correlation between both of them and the recurrence rate of postoperation and the survival time.Results Patients w ith positive TTF-1 exp ression had lower 2-year recurrence rate than the negative ones[61.2%（60/98)vs 83.3%(5/6）]and had longer survivalbenefits(26.00±1.89mo vs 22.00±8.76mo),butboth of the difference were notstatistically significant(P＞0.05). Patients w ith positive SPA exp ression significantly had lower 2-year recurrence rate than the negative ones[54.8%(34/62)vs 79.2%(19/24)]and had much longer survivalbenefits(30.00±1.41mo vs 21.00±2.18mo).Both of the difference were statistically significant(P＜0.05).Conclusion For the postoperative stageⅡlung adenocarcinomas,the patients w ith positive SPA exp ression had the lower 2-year recurrence rate and longer suvival time.Also there was a certain correlation between exp ression of TTF-1 and the recurrence and survivalin postoperative stageⅡlung adenocarcinomas.

Lung adenocarcinoma Thyroid transc rip tion factor-1 Surfactantp rotein-A Recurrence

2013-08-15）

（本文編輯：沈叔洪）

浙江省衛(wèi)生廳科研基金（2013KYB187）；浙江省中醫(yī)藥管理局科研基金（2013ZQ 014）

310003杭州，浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科（呂昕系在職碩士研究生，現(xiàn)在浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院工作）

周建英E-mail：zjyhz@zju.edu.cn