王 琴，侯曉強，崔向軍，何克劍，常彩云

(三峽大學第一臨床醫(yī)學院宜昌市中心人民醫(yī)院，湖北宜昌443003)

中藥黃芪味甘，性微溫，歸脾、肺經(jīng)，有補氣健脾，升陽舉陷，益衛(wèi)固表，利尿消腫，托毒生肌之功效，并且具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用［1-3］。黃芪及其制劑已被廣泛應(yīng)用于腎臟病的治療中。白花蛇舌草具有較強的免疫調(diào)節(jié)和抗感染作用［4-5］，臨床多用于防治腫瘤，用于治療腎病綜合征(NS)鮮見報道。目前多數(shù)認為NS的發(fā)病機制與免疫紊亂有關(guān)［6］，因此，本研究將黃芪、白花蛇舌草組方，觀察其對NS大鼠的治療作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量160～180 g，由華中科技大學同濟醫(yī)學院實驗動物學部提供，許可證號:SCXK(鄂)2004-0007。分籠飼養(yǎng)，控制室溫在15～20℃，自由攝食、飲水。

1.2 實驗藥物 黃芪、白花蛇舌草藥材購于宜昌市中心人民醫(yī)院中藥房，湯劑由三峽大學醫(yī)學院中藥藥理實驗室制備:黃芪、白花蛇舌草藥材1∶1經(jīng)水煎煮2次，每次2 h，水煎液合并后過濾，減壓濃縮，40℃真空干燥，得黃芪白花蛇舌草提取物，臨用前折合成生藥給藥量，用蒸餾水配成混懸液。注射用多柔比星(ADR，俗名阿霉素，浙江海正藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，國藥準字:H33021980，批號:100201，每支 10 mg)，臨用前用生理鹽水配制。

1.3 方法

1.3.1 ADR腎病模型建立 40只健康雄性SD大鼠飼養(yǎng)7 d后，隨機抽取10只作為正常對照組，余下30只大鼠一次性尾靜脈注射阿霉素［7］6.0 mg/kg，對照組同法注射等量生理鹽水。2周后測24 h尿蛋白定量＞100 mg為造模成功。

1.3.2 分組給藥 造模成功后將成活的27只大鼠隨機分為3組:模型組9只，黃芪白花蛇舌草湯低劑量組(以下簡稱中藥低劑量組)9只，黃芪白花蛇舌草湯高劑量組(以下簡稱中藥高劑量組)9只。各組均從造模成功后(即造模2周后)進入給藥階段，每天灌胃1次，連續(xù)4周，中藥低劑量組給予黃芪白花蛇舌草湯3.6 g/(kg·d)，中藥高劑量組給予黃芪白花蛇舌草湯7.2 g/(kg·d)，模型組與正常組每天給予相應(yīng)劑量生理鹽水。

1.3.3 觀察指標 觀察各組大鼠活動、飲食情況，毛色，體質(zhì)量等。分別于造模前、造模后第7，14天、給藥后第14，28天，將每只大鼠置于清潔代謝籠中，收集24 h尿液(甲苯防腐)，檢測24 h尿蛋白定量(24 h Upro)。給藥第28天，腹主動脈取血，用全自動生化分析儀測定血清總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、尿素氮(BUN)等各項血液生化指標。另摘取腎臟，部分腎組織用2.5%戊二醛固定，以備切片電鏡觀察;其余腎組織用10%福爾馬林液固定，石蠟包埋切片，蘇木素-伊紅(HE)染色，進行病理組織學檢查。血尿生化指標由宜昌市中心人民醫(yī)院檢驗科測定，病理切片由三峽大學醫(yī)學院病理教研室制備。

1.3.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。各組實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(±s)表示，組間均數(shù)比較采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 黃芪白花蛇舌草湯對ADR大鼠一般狀態(tài)的影響 整個實驗過程中，正常對照組大鼠活動自如，飲食、飲水正常，毛色有光澤，體質(zhì)量逐漸增加;從造模第3天起，各造模組大鼠進食、飲水量明顯減少，開始出現(xiàn)不同程度腹瀉，毛發(fā)凌亂、失去光澤，體質(zhì)量下降;至造模第2周末，造模組大鼠體質(zhì)量下降明顯，進食飲水量減少，其中3只大鼠后足爪明顯水腫;3只大鼠因嚴重腹瀉、腹水、阿霉素心臟毒性而死亡。用藥后除模型組外，其余各組大鼠較前進食飲水量增加，活動較為靈活，皮毛稍有凌亂。

2.2 黃芪白花蛇舌草湯對ADR大鼠24 h尿蛋白定量的影響 造模后第7天，除正常組外，各組大鼠24 h尿蛋白定量開始升高，至第14天出現(xiàn)大量尿蛋白，24 h尿蛋白定量＞100 mg表明造模成功。與模型組比較，治療組在藥物干預2周后，24 h尿蛋白定量下降(P＜0.05)，治療4周后，24 h尿蛋白定量顯著下降(P＜0.05)，見表1。

2.3 黃芪白花蛇舌草湯對ADR大鼠血液生化指標的影響 與正常組比較，模型組TP、ALB水平顯著下降，TC與TG水平升高，提示造模后，ADR大鼠體內(nèi)蛋白流失嚴重，脂質(zhì)代謝紊亂。與模型組相比，治療組的血清TP、ALB顯著升高，TC與TG水平顯著降低，尿素氮、肌酐水平無統(tǒng)計學意義。表明黃芪白花蛇舌草湯有助于ADR大鼠各項生理指標的恢復，治療效果明顯。中藥低劑量組與高劑量組無明顯差異，表明治療效果無劑量依賴性，見表2。

2.4 黃芪白花蛇舌草湯對ADR大鼠腎組織的影響各組大鼠腎臟肉眼觀察均無明顯異常。光鏡下:正常對照組腎小球結(jié)構(gòu)正常(圖1);模型組腎小球系膜細胞、系膜基質(zhì)彌漫性增生(圖2);中藥低劑量組與中藥高劑量組腎小球結(jié)構(gòu)均無明顯異常(圖3，圖4)。電鏡下:正常對照組腎小球基底膜結(jié)構(gòu)清晰，未見增厚，系膜未見增生，足突清晰完整，未見融合(圖5);模型組腎小球基底膜結(jié)構(gòu)清晰，未見增厚，系膜未見增生，但足突廣泛融合(圖6);中藥低劑量組與中藥高劑量組腎小球基底膜結(jié)構(gòu)尚清晰，無明顯增厚，系膜未見增生，足突部分融合(圖7，圖8)。

表1 ADR對大鼠24 h尿蛋白定量的影響(±s)mg/24 h

表1 ADR對大鼠24 h尿蛋白定量的影響(±s)mg/24 h

注:與正常組比較，#P ＜0.05;與模型組比較，△P ＜0.05

組 別 n 造模前 造模后第7天 造模后第14天 給藥后第14天 給藥后第28天正常組 10 3.47 ±0.77 3.28 ±1.03 3.35 ±0.87 3.23 ±0.92 3.51 ±0.97模型組 9 4.12 ±1.38 63.56 ±6.04# 117.03 ±8.62# 135.85 ±6.27 161.11 ±6.77中藥低劑量組 9 3.83 ±2.17 63.06 ±5.21# 122.08 ±8.33# 82.67 ±1.90 57.58 ±6.72△中藥高劑量組 9 3.99 ±1.15 62.76 ±4.84# 116.74 ±9.65# 92.17 ±2.48△ 62.74 ±4.09△

表2 給藥4周后對各組實驗大鼠血液生化指標的影響(±s)

表2 給藥4周后對各組實驗大鼠血液生化指標的影響(±s)

注:與正常組比較，#P＜0.05;與模型組比較，△P＜0.05

組 別 n TP/(g/L)ALB/(g/L)TC/(mmol/L)TG/(mmol/L)Scr/(mmol/L)BUN/(mmol/L)正常組 10 69.14 ±4.23 25.97 ±4.37 0.92 ±0.29 1.03 ±0.11 47.76 ±9.92 7.56 ±0.73模型組 9 55.60 ±5.27# 15.92 ±5.27# 1.57 ±0.42# 1.64 ±0.22# 44.56 ±7.65 7.09 ±2.22中藥低劑量組 9 64.55±8.24△ 18.17±2.70△ 1.19 ±0.20△ 1.35 ±0.37△ 47.57±5.85 7.14±1.04中藥高劑量組 9 58.74±6.74△ 17.67±6.71△ 1.30 ±1.01△ 1.24 ±0.85△ 46.13±6.71 6.94±1.89

圖1 正常組光鏡(HE，×400)

圖2 模型組光鏡(HE，×400)

圖3 中藥低劑量組光鏡(HE，×400)

圖4 中藥高劑量組光鏡(HE，×400))

圖5 正常組電鏡(×40 000)

圖6 模型組電鏡(×40 000)

圖7 中藥低劑量組電鏡(×40 000)

圖8 中藥高劑量組電鏡(×40 000)

3 討論

一次性尾靜脈注射阿霉素造成腎病綜合征動物模型［7］，現(xiàn)已成為研究腎病綜合征公認模型之一，亦被廣泛應(yīng)用于中藥及其成分對腎臟保護作用的藥物篩選。本研究采用此方法造模后，模型動物的尿蛋白排出顯著上升，生化指標及病理變化明顯，表明本次實驗成功建立了大鼠ADR腎病模型。阿霉素誘導腎病綜合征的機制，一般認為是由活性氧族介導的細胞損傷;同時活性氧還能趨化中性粒細胞，刺激腎小球合成前列腺素及血栓素，最終破壞腎小球濾過膜的結(jié)構(gòu)和功能，使上皮細胞足突融合導致足突裂隙及其隔膜消失，引起孔徑屏障及電荷屏障損傷，而引起蛋白尿;另外，細胞免疫可能也參與了發(fā)病，因為活性氧可以間接趨化中性粒細胞，黏附及吞噬免疫反應(yīng)物，引起細胞活化，釋放一系列炎性介質(zhì)，引起腎臟損傷［8］。該模型類似于人類微小病變型腎病，因此，對此模型進行藥物干預，可以有效進行藥物對腎病綜合征的療效評價。

黃芪具有補氣升陽、消腫生肌等功效，是補氣的要藥。黃芪含有黃芪多糖、黃芪皂苷類、多種微量元素如硒、鐵、鋅等、黃酮及黃酮類似物等成分，具有多種生物學活性，不但有清除自由基、促進蛋白質(zhì)合成、誘生干擾素等作用，還可以提高機體免疫力，增強機體抗病能力［9］。通過上調(diào)肝臟白蛋白mRNA轉(zhuǎn)錄，在基因轉(zhuǎn)錄水平促進肝臟白蛋白合成，從而提高血漿白蛋白水平。本實驗顯示黃芪白花蛇舌草湯治療后，阿霉素腎病大鼠血清白蛋白含量升高，說明此藥具有促進肝臟合成白蛋白的作用，與文獻［10］結(jié)論一致。黃芪中富含多種微量元素，尤其是元素硒可以保護基底膜的電荷屏障和機械屏障［11］，修復受損腎小球濾過膜，從而減輕通透性尿蛋白，降低腎病大鼠尿蛋白。腎病大鼠血脂明顯降低，可能與尿蛋白減少，血漿白蛋白升高使肝臟合成脂蛋白減少有關(guān)。

白花蛇舌草有清熱除濕、活血止痛等功效，其含有的總黃酮具有增強機體特異性免疫功能和非特異性免疫功能的作用，亦可以刺激網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)增生，增強吞噬細胞活力而達到抗菌消炎作用［4］;白花蛇舌草還具有抗氧化活性［5］，黃芪能清除自由基，二者組方治療阿霉素腎病大鼠，可減輕活性氧介導的細胞損傷，修復腎小球濾過膜，改善病理組織學變化，從而減輕腎臟損害。

腎病綜合征屬于中醫(yī)學的“水腫”“精氣下泄”等范疇，其發(fā)生與水液代謝及肺、脾、腎三臟功能失調(diào)有關(guān)。NS病機復雜，虛實相間，清濁不分，中醫(yī)證型為氣陰兩虛證，濕熱、熱毒等實邪亦常夾雜其間。將黃芪與白花蛇舌草組方，一補一瀉，一升一降，切合NS病機，能達到補氣升陽、清熱利濕、利尿消腫之功效。黃芪白花蛇舌草湯能顯著降低ADR腎病大鼠尿蛋白，提高血清蛋白含量，降低異常血脂、膽固醇水平，減輕對腎臟的損害，對腎病大鼠病理組織學變化有明顯改善作用，從而表現(xiàn)出對ADR腎病具有良好的治療作用。為其臨床治療腎病綜合征提供了理論依據(jù)，其作用機制有待于進一步研究。

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