陳漁 胡珊 張輝 王彥青 王林 王建光

（1.貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng)550004；2.復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合系，上海200032；3.上海市第六人民醫(yī)院奉賢分院麻醉科，上海201400）

近幾十年來(lái)酒精導(dǎo)致的負(fù)面影響，例如中毒、成癮、戒斷反應(yīng)等作為常見(jiàn)病、多發(fā)病，已構(gòu)成社會(huì)問(wèn)題［1］。目前大部分研究者僅觀察急性酒精中毒的癥狀、機(jī)理和防治等，很少對(duì)代謝后導(dǎo)致的抑郁、焦慮等行為改變，進(jìn)一步觀察研究和防治［2］。針刺治療是一種極具潛力的安全無(wú)毒的非成癮性療法，近些年臨床用電針治療抑郁癥取得很好的療效和進(jìn)展［3－4］。本研究通過(guò)單次酒精生理鹽水溶液灌胃，待酒精代謝后用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)觀察大鼠的行為；觀察電針足三里、百會(huì)穴對(duì)大鼠行為的作用，為臨床使用電針治療抑郁提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性成年SD大鼠32只，體質(zhì)量180～200g，購(gòu)自復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。將大鼠置于12h光照和12h黑暗交替照明條件下，自由進(jìn)食進(jìn)水，保持恒溫（21±1）℃，相對(duì)濕度約55%，室內(nèi)噪音低于60dB，飼養(yǎng)1周以適應(yīng)環(huán)境。

1.2 方法 方法如下。

1.2.1 分組 將32只大鼠隨機(jī)分為4組，每組8只：對(duì)照組（生理鹽水對(duì)照組）；酒精模型組（模型組，單次酒精生理鹽水溶液灌胃）；酒精模型加捆綁組（捆綁組，酒精刺激后，在0min，24、48、72h給予捆綁）和酒精模型加電針組（電針組，酒精刺激后，在0min，24、48、72h給予電針治療），該實(shí)驗(yàn)方案得到復(fù)旦大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2.2 動(dòng)物造模 參照 A Kuzmin［5］和史清海等［6］方法，實(shí)驗(yàn)前12h禁食，2h禁水。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后模型組、捆綁組、電針組給予5g／kg劑量的50%（v／v）的酒精生理鹽水灌胃，30min后可見(jiàn)SD大鼠步態(tài)不穩(wěn)，感覺(jué)減弱，翻正反射消失，1h后逐漸恢復(fù)正常。對(duì)照組給予同等劑量的生理鹽水灌胃。

1.2.3 捆綁和電針治療 安靜環(huán)境下，將大鼠軀干固定于木架上，頭部和四肢可自由活動(dòng)，待大鼠平靜10min后，將針灸針刺大鼠百會(huì)穴和右側(cè)足三里穴，定位參照文獻(xiàn)。電針組造模后通過(guò)電針治療儀，給予疏密波（疏波頻率約2Hz，串長(zhǎng)2.5s，密波頻率約15Hz，串長(zhǎng)2.5s），強(qiáng)度以引起大鼠耳朵輕微抖動(dòng)而不嘶叫為宜（1～2mA），持續(xù)30min，1次／d；捆綁對(duì)照組大鼠固定30min，1次／d。

1.2.4 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 在酒精造模前預(yù)游泳，使其適應(yīng)環(huán)境。將大鼠放入高40cm、直徑18cm的玻璃圓筒內(nèi)，筒內(nèi)水位15cm，水溫22～23℃，15min后取出，用45w白熾燈烘干。第2天相同時(shí)間段將大鼠再次放入該圓筒內(nèi)，記錄5min內(nèi)大鼠不動(dòng)和掙扎時(shí)間。造模后24、72h分別記錄5min內(nèi)對(duì)照組、模型組、捆綁組、電針組的時(shí)間。

1.2.5 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 該裝置由不透明材料制成，底面黑色為100cm×100cm的正方形，側(cè)壁高45cm。在造模后24、72h對(duì)4組分別進(jìn)行測(cè)試。測(cè)試前用5%的醋酸水溶液徹底清潔敞箱，擦干后大鼠立即放入敞箱進(jìn)行測(cè)試，同時(shí)開(kāi)啟攝像監(jiān)控器，記錄5min內(nèi)大鼠水平和垂直運(yùn)動(dòng)情況（兩前爪騰空或攀爬墻壁為垂直運(yùn)動(dòng)1次），再用醋酸清洗后進(jìn)行下一只大鼠測(cè)試。實(shí)驗(yàn)采集用曠場(chǎng)視頻分析系統(tǒng)分析大鼠水平運(yùn)動(dòng)總路程和直立總次數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料用（±s）表示。組間用單因素方差比較；若方差不齊，采用非參數(shù)檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 電針和酒精對(duì)大鼠強(qiáng)迫游泳行為的影響 未造模前大鼠各組間靜止不動(dòng)時(shí)間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；造模后24、72h與對(duì)照組比較，模型組、捆綁組大鼠的靜止不動(dòng)時(shí)間明顯增多（P＜0.05）；與模型組比較，捆綁組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與捆綁組比較，電針組大鼠的靜止不動(dòng)時(shí)間顯著減少（P＜0.05）。見(jiàn)表1，2。

表1 電針和酒精在24h對(duì)大鼠強(qiáng)迫游泳行為的影響（±s）

表1 電針和酒精在24h對(duì)大鼠強(qiáng)迫游泳行為的影響（±s）

注：與對(duì)照組比較，＊P＜0.01；與捆綁組比較，＃P＜0.01。

組別 n 造模前／（s／5min） 造模后24h／（s／5min）8 98.21±32.45 102.69±51.86模型組 8 108.78±27.19 181.95±57.52＊捆綁組 8 109.32±23.78 181.81±29.64電針組 8 94.08±14.70 107.75±40.16對(duì)照組＃

表2 電針和酒精在72h對(duì)大鼠強(qiáng)迫游泳行為的影響（±s）

表2 電針和酒精在72h對(duì)大鼠強(qiáng)迫游泳行為的影響（±s）

注：與對(duì)照組比較，＊P＜0.01；與捆綁組比較，＃P＜0.01。

組別 n 造模前／（s／5min） 造模后72h／（s／5min）8 145.20±36.53 149.07±29.18模型組 8 138.36±40.56 200.46±17.35＊捆綁組 8 139.72±32.74 197.53±41.19電針組 8 138.06±43.86 141.71±39.26對(duì)照組＃

2.2 電針和酒精對(duì)大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)行為的影響 造模后24、72h，與對(duì)照組比較，模型組、捆綁組、電針組的水平運(yùn)動(dòng)總路程和直立總次數(shù)均顯著減少（P＜0.05）；與模型組比較，捆綁組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與捆綁組比較，電針組大鼠的水平運(yùn)動(dòng)總路程和直立總次數(shù)顯著增多（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 電針和酒精對(duì)大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)行為的影響（±s）

表3 電針和酒精對(duì)大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)行為的影響（±s）

注：與對(duì)照組比較，＊P＜0.01，＊＊P＜0.001；與捆綁組比較，＃P＜0.01，＃＃P＜0.001。

直立總次數(shù)組別 n 水平運(yùn)動(dòng)總路程24h 72h對(duì)照組 8 1577.76±345.67 1398.29±244.34 24.63±6.95 24h 72h 19.13±7.85模型組 8 523.25±144.48＊＊ 429.89±157.44＊＊ 5.00±2.27＊ 5.88±2.64＊捆綁組 8 582.57±169.97 557.00±149.19 6.75±1.98 6.50±2.07電針組 8 1082.93±278.08＃＃ 956.26±335.23＃ 15.13±6.40＃ 16.00±6.50＃

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)制作的酒精模型，其理論依據(jù)與人類急性飲酒后導(dǎo)致的抑郁樣行為的發(fā)生和機(jī)理接近，能較為真實(shí)地模擬癥狀，可用于其病理生理機(jī)制研究［5］。根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)，單次使用不同劑量酒精生理鹽水溶液給予大鼠灌胃，觀察不同時(shí)間段大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、高架實(shí)驗(yàn)行為的變化，發(fā)現(xiàn)酒精（5g／kg）灌胃后24～72h曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示大鼠出現(xiàn)抑郁樣行為，隨后逐漸恢復(fù)，1周完全正常；而高架實(shí)驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但有下降趨勢(shì)，提示大鼠可能無(wú)焦慮樣行為，這可能跟大鼠樣本量、個(gè)體差異等因素有關(guān)。灌酒后30min至1.5h用drager監(jiān)護(hù)儀夾住鼠尾監(jiān)測(cè)生命體征，必要時(shí)吸氧治療，防止缺血缺氧癥狀，排除其他干擾因素。

酒精導(dǎo)致的行為改變，可能因乙醇透過(guò)血腦屏障進(jìn)入大腦，引起相應(yīng)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)改變，其機(jī)制復(fù)雜［7］；酒精的作用靶點(diǎn)是神經(jīng)細(xì)胞膜上介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的特異性膜蛋白如離子通道、神經(jīng)遞質(zhì)受體、G蛋白及促使第二信使產(chǎn)生的酶等。乙醇與這些靶蛋白相互作用，最終導(dǎo)致酶活性和基因表達(dá)調(diào)控因子的改變［8］。

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)是評(píng)定大鼠在新異環(huán)境中自主行為、探究行為、緊張恐懼狀態(tài)和對(duì)新環(huán)境的警覺(jué)性。水平運(yùn)動(dòng)總路程減少反映了動(dòng)物的活動(dòng)度降低，直立總次數(shù)減少反映了動(dòng)物的垂直運(yùn)動(dòng)減少，提示動(dòng)物對(duì)新鮮事物的探究能力降低。本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠在酒精刺激后24、72h曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的行為較對(duì)照組明顯降低，動(dòng)物表現(xiàn)出活動(dòng)能力下降、探究興趣喪失與臨床上抑郁癥患者的精神運(yùn)動(dòng)性障礙癥狀極為相似，模擬了患者的抑郁狀態(tài)，提示急性飲酒后24、72h會(huì)導(dǎo)致探究行為、自主行為降低。

本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠24、72h強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)靜止不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)反映了動(dòng)物的絕望行為。24、72h的行為測(cè)試數(shù)據(jù)分為兩批，是為防止相近時(shí)間內(nèi)多次監(jiān)測(cè)，影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。有研究［9］報(bào)道慢性強(qiáng)迫游泳可作為大鼠慢性應(yīng)激模型，使得腦內(nèi)NMDA受體介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)功能亢進(jìn)。對(duì)于兩批實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模前數(shù)據(jù)結(jié)果不相近，考慮與大鼠批次、個(gè)體差異等因素相關(guān)。

捆綁組和模型組比較無(wú)明顯差異，說(shuō)明捆綁因素不干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。研究［10］認(rèn)為捆綁作為一種應(yīng)激能抑制大鼠的自主活動(dòng)，能易化行為敏化的形成?？紤]由于實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ筒灰恢?，且與捆綁的松緊、時(shí)間等因素有關(guān)。電針組較捆綁組在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中抑郁樣行為有顯著改善，說(shuō)明電針組不單純是捆綁因素參與其中，電針因素起主導(dǎo)作用，提示針刺能明顯緩解大鼠抑郁樣行為。電針對(duì)抑郁癥的治療作用在臨床患者和抑郁模型動(dòng)物上相繼得到驗(yàn)證，并與抗抑郁藥取得了相同的療效效果。研究［11］表明電針刺激足三里對(duì)酸化乙醇致大鼠胃黏膜損傷組織有修復(fù)作用，且可抑制長(zhǎng)期酒精應(yīng)激大鼠的行為敏化。百會(huì)穴的電針刺激可下調(diào)大腦皮層5-HT的釋放，調(diào)節(jié)下丘腦－垂體－腎上腺軸的功能活動(dòng)從而發(fā)揮抗抑郁的作用［12－13］。

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