王 蕊(通信作者)，溫賢濤，王 輝，湯菊莉，管 博，曾亞力

(1北京市醫(yī)療器械檢驗(yàn)所，北京101111;2醫(yī)療器械檢驗(yàn)與安全性評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京101111)

SD大鼠血常規(guī)參考值區(qū)間建立

王 蕊1，2(通信作者)，溫賢濤1，2，王 輝1，2，湯菊莉1，2，管 博1，2，曾亞力1，2

(1北京市醫(yī)療器械檢驗(yàn)所，北京101111;2醫(yī)療器械檢驗(yàn)與安全性評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京101111)

血常規(guī)是醫(yī)療器械亞慢(亞急)試驗(yàn)中必須測(cè)定的項(xiàng)目，但由于血常規(guī)易受動(dòng)物品種、來源、年齡、飼養(yǎng)環(huán)境、人員操作、檢測(cè)試劑等因素的影響，各實(shí)驗(yàn)室有必要建立自己的血常規(guī)參考值區(qū)間。本文以建立我室大鼠血液學(xué)檢測(cè)指標(biāo)參考區(qū)間為目的，以我室常用的SD大鼠為研究動(dòng)物，結(jié)合醫(yī)療器械亞慢(亞急)試驗(yàn)周期，90d、28d、14d，對(duì)不同周齡(8～10周齡、10～12周齡、19～21周齡)的大鼠進(jìn)行常規(guī)血液學(xué)檢測(cè)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以95%可信范圍得出參考值區(qū)間。分析發(fā)現(xiàn)，各周齡雌雄大鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、紅細(xì)胞比容(HCT)及網(wǎng)織紅細(xì)胞(RET)均有顯著性差異，且隨著周齡增加，各周齡雌雄大鼠紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、血紅蛋白測(cè)定(HGB)及血小板計(jì)數(shù)(PLT)等指標(biāo)也開始出現(xiàn)顯著性差異。由此可見大鼠各項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)受年齡及性別等因素影響很大，本研究所建立的血常規(guī)參考值區(qū)間非常有必要，為我室亞慢(亞急)試驗(yàn)提供血液學(xué)判定依據(jù)。

血液學(xué)檢測(cè);SD大鼠;參考區(qū)間

0 背景介紹

血液學(xué)分析是醫(yī)療器械亞慢(亞急)試驗(yàn)中臨床病理學(xué)觀察項(xiàng)目之一，是用以研究、組織、器官和其他系統(tǒng)毒性反應(yīng)的重要依據(jù)［1－2］。目前醫(yī)療器械亞慢(亞急)試驗(yàn)主要使用大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，大鼠的血常規(guī)參考區(qū)間也能在一些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相關(guān)文獻(xiàn)中查到，但考慮到這些指標(biāo)本身受實(shí)驗(yàn)室條件、人員操作、儀器試劑、動(dòng)物種屬年齡等因素的影響［3－6］，其他實(shí)驗(yàn)室建立的參考區(qū)間不宜直接作為我室的參考，各實(shí)驗(yàn)室建立自己的血常規(guī)參考區(qū)間很有必要，在對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行毒性判定時(shí)，使用本實(shí)驗(yàn)室自己建立的參考區(qū)間更科學(xué)，更可信，本文以我室常用的SD大鼠作為研究動(dòng)物，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)充分考慮到大鼠年齡、人員操作、飼養(yǎng)條件、儀器試劑等因素的影響，結(jié)合醫(yī)療器械亞慢(亞急)試驗(yàn)周期90d(13周)、28d(4周)、14d(2周)對(duì)不同周齡的大鼠血常規(guī)進(jìn)行檢測(cè)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，初步建立常規(guī)參考區(qū)間。

1 材料與方法

(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:SD大鼠 ，6～8周，雌雄各半(雌雄無孕)，由中國食品藥品檢定研究院提供，SCXK(京) 2009－0017，雌雄動(dòng)物分籠于無毒塑料盒內(nèi)，每籠5只，每周鼠籠清洗2次，食物為提供的標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，由科澳協(xié)力實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，自由飲水。室溫為20～24℃，相對(duì)濕度為40%～70%，飼養(yǎng)2～3周，大鼠活動(dòng)情況和體征無異常后進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)。

(2)儀器及耗材:血常規(guī)使用的全自動(dòng)血液分析儀XT－2000i和配套試劑，采用執(zhí)信醫(yī)療提供的配套質(zhì)控。EDTA抗凝采血管、5mL注射器。

(3)試驗(yàn)方法:SD大鼠起始周齡6－8周，按飼養(yǎng)時(shí)間分三組:13周組、4周組、2周組。飼養(yǎng)結(jié)束時(shí)這三組大鼠分別為19～21周齡、10～12周齡、8～10周齡。用注射器進(jìn)行下腔靜脈采血并儲(chǔ)存于EDTA抗凝采血管中，充分混勻后，在血液分析儀上讀數(shù)。

(4)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:應(yīng)用SPSS 11.0 for windows軟件，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比較不同性別及不同周齡大鼠血常規(guī)指標(biāo)的差異。進(jìn)行數(shù)據(jù)正態(tài)性分布檢驗(yàn)，參考范圍采用95%可信區(qū)間。

2 結(jié)果

表1為8～10周齡雌雄大鼠血常規(guī)指標(biāo)均值及參考區(qū)間，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，該周齡大鼠的 HCT、MCV、MCHC、WBC、LY、MONO、NEU、BASO及RET等指標(biāo)雌雄存在顯著性差異。表2為10～12周齡大鼠血常規(guī)結(jié)果，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，該周齡大鼠的 HGB、RBC、HCT、WBC、LY、MONO、NEU、EO及RET等指標(biāo)雌雄存在顯著性差異。表3為19～21周齡大鼠血常規(guī)結(jié)果，該周齡大鼠的HGB、RBC、HCT、MCV、MCH、WBC、LY、MONO、NEU、EO、BASO、PLT及RET等指標(biāo)雌雄存在顯著性差異。從變異系數(shù)CV%值看，所有周齡的大鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類CV%值都較高。

表4為8～10周齡與10～12周齡大鼠血常規(guī)指標(biāo)比較，結(jié)果顯示雄性大鼠的HGB、RBC、MCV、MCH、WBC、PLT及RET等指標(biāo)存在顯著性差異。雌性大鼠的MCV、MCH、BASO、PLT及RET等指標(biāo)存在顯著差異。表5為8～10周齡與19～21周齡大鼠血常規(guī)指標(biāo)比較，雄性大鼠在HGB、RBC、MCV、MCH、MCHC、NEU、BASO、PLT及RET等指標(biāo)存在顯著性差異。雌性大鼠的 RBC、MCV、MCH、MCHC、WBC、LY、BASO、PLT及RET等指標(biāo)存在顯著差異。表6為10～12周齡與19～21周齡大鼠血常規(guī)指標(biāo)比較，雄性大鼠在RBC、MCV、MCH、MCHC、WBC、LY、NEU及BASO等指標(biāo)存在顯著性差異。雌性大鼠的HGB、RBC、MCV、MCH、MCHC、WBC、LY、BASO及RET等指標(biāo)存在顯著差異。

表1 8～10周齡SD大鼠的血常規(guī)指標(biāo)增均值及參考區(qū)間(雌雄各140只)

表2 10～12周齡SD大鼠的血常規(guī)指標(biāo)均值及參考區(qū)間(雌雄各40只)

表3 19～21周齡SD大鼠的血常規(guī)指標(biāo)均值及參考區(qū)間(雌雄各30只)

(續(xù)表)

表4 8～10周齡與10～12周齡SD大鼠的血常規(guī)指標(biāo)比較

(續(xù)表)

表5 8～10周齡與19～21周齡SD大鼠的血常規(guī)指標(biāo)比較

(續(xù)表)

表6 10～12周齡與19～21周齡SD大鼠的血常規(guī)指標(biāo)比較

(續(xù)表)

3 討論

統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，各周齡雌雄大鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、紅細(xì)胞比容(HCT)及網(wǎng)織紅細(xì)胞(RET)均有顯著性差異，且各周齡雄性大鼠WBC、HCT及RET均顯著高于雌性大鼠的 WBC。隨著周齡增加各雌雄大鼠紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、血紅蛋白測(cè)定(HGB)及血小板計(jì)數(shù)(PLT)等指標(biāo)也開始出現(xiàn)顯著性差異。不同周齡大鼠的大部分血常規(guī)指標(biāo)也存在顯著性差異，可見大鼠血常規(guī)指標(biāo)受性別及周齡等因素影響。與目前能查到的文獻(xiàn)參考值相比，我室所得的WBC值相比林?。?］、王學(xué)文［7］、王德軍等［8］研究結(jié)果偏低，但與劉科亮等［9］的研究結(jié)果相近。其他指標(biāo)如HGB、RBC、PLT等也與其它實(shí)驗(yàn)室的參考值存在差異。這充分證明了血常規(guī)指標(biāo)受動(dòng)物品種、來源、年齡、飼養(yǎng)環(huán)境、人員操作、檢測(cè)試劑等因素的影響。因此各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該建立本實(shí)驗(yàn)室的血常規(guī)參考區(qū)間，為結(jié)果評(píng)判提供參考。從各指標(biāo)的變異系數(shù)(CV%)來看，WBC及分類的變異系數(shù)均較大，說明這些指標(biāo)的離散度大，可能是由于這些指標(biāo)絕對(duì)值較小，比較容易受到偶然因素的影響［3］。

醫(yī)療器械亞慢(亞急)毒性試驗(yàn)中，血常規(guī)是必須檢測(cè)的項(xiàng)目之一，是亞慢(亞急)毒性判定的重要指標(biāo)之一［10－11］。在判斷實(shí)驗(yàn)組大鼠血常規(guī)指標(biāo)是否正常時(shí)，不僅需要與同批對(duì)照組大鼠比較，判斷是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，還應(yīng)與各實(shí)驗(yàn)室建立的健康大鼠血常規(guī)正常參考區(qū)間進(jìn)行比較。一些血常規(guī)指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析時(shí)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行比較時(shí)可能具有顯著性差異，但其值仍落在正常參考區(qū)間中，可以認(rèn)為這種統(tǒng)計(jì)學(xué)差異沒有臨床意義。當(dāng)然，血常規(guī)指標(biāo)只是判斷亞慢(亞急)性毒性的依據(jù)之一，還應(yīng)該結(jié)合血生化及病理結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。血常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)相對(duì)病理分析等時(shí)間短，出結(jié)果快，在亞慢(亞急)試驗(yàn)過程中，可將血常規(guī)結(jié)果作為初步毒性判定依據(jù)，如果血常規(guī)結(jié)果顯示被測(cè)樣品可能具有毒性，可以考慮暫緩后期的病理試驗(yàn)，待充分討論后，有必要時(shí)再進(jìn)行病理試驗(yàn)，即為委托方節(jié)約時(shí)間和費(fèi)用，也為檢測(cè)中心節(jié)約大量的人力和時(shí)間。

4 結(jié)論

大鼠血常規(guī)指標(biāo)受動(dòng)物品種、來源、年齡、飼養(yǎng)環(huán)境、人員操作、檢測(cè)試劑等因素的影響，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該建立本實(shí)驗(yàn)室的大鼠血常規(guī)指標(biāo)參考區(qū)間。且在條件許可的情況下，盡可能建立不同年齡、不同性別、不同品種的血常規(guī)參考區(qū)間。由于血常規(guī)指標(biāo)受采血方式、樣本放置時(shí)間、檢測(cè)試劑、人員操作等的影響明顯，應(yīng)該制定統(tǒng)一的操作規(guī)程及嚴(yán)格遵守，盡可能避免不必要的誤差。作為醫(yī)療器械檢測(cè)機(jī)構(gòu)，各醫(yī)療器械檢測(cè)中心應(yīng)該建立自己的參考區(qū)間，不可隨意采用其它實(shí)驗(yàn)室或文獻(xiàn)提供的參考區(qū)間。

［1］苗明.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)［M］.北京:中國醫(yī)藥出版社，1997，336，337，353－354.

［2］劉成玉.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ) ［M］.北京:科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2005.

［3］林健，鄭麗宏.大鼠血常規(guī)正常參考值范圍及評(píng)價(jià)方法的探討［J］.海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2007，13(4):57－58.

［4］劉帥，李軍延.不同采血方法對(duì)Wistar大鼠血常規(guī)的影響［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2014，31(2):32－34.

［5］陳華，李春海，賀蘇蘭.性別因素對(duì)大鼠部分血液學(xué)，血液生化指標(biāo)和臟器系數(shù)的影響［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理，1996:13(1);21.

［6］高明，朱華，黃瀾.清潔級(jí)Wistar大鼠標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)［J］.醫(yī)學(xué)動(dòng)物防治，2003，19(6):346.

［7］王學(xué)文，高俊峰，胡建國.SD大鼠靜血標(biāo)本放置時(shí)間對(duì)血常規(guī)測(cè)定數(shù)據(jù)的影響［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2012，29(1):63－65.

［8］王德軍，周衛(wèi)民，王輝.光照不均勻性對(duì)正常SD大鼠血液生理生化指標(biāo)的影響［C］.第五屆中國中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技交流會(huì).

［9］劉科亮，王林，王睿.SD大鼠血常規(guī)指標(biāo)正常參考范圍的探討［C］.中國西部第八屆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與學(xué)術(shù)研討會(huì).

［10］GB/T 16886.11－2011醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第11部分:全身毒性試驗(yàn)［S］.2011.

［11］YY/T 0127.15－2009口腔醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第2單元:試驗(yàn)方法亞急性和亞慢性全身毒性試驗(yàn):經(jīng)口途徑［S］.2009.

R446.1

A

1002－2376(2015)07－0011－05

2014－12－16