哈及尼沙， 美麗萬(wàn)·阿不都熱依木， 程煜鳳， 阿吉艾克拜爾·艾薩

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆烏魯木齊830011；2.中國(guó)科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所，新疆烏魯木齊830011）

榅桲總多酚提取工藝的研究

哈及尼沙1， 美麗萬(wàn)·阿不都熱依木1， 程煜鳳1， 阿吉艾克拜爾·艾薩2*

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆烏魯木齊830011；2.中國(guó)科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所，新疆烏魯木齊830011）

目的研究榅桲總多酚的提取工藝。方法用Folin-Ciocalteu法，以總多酚量為考察指標(biāo)，采用單因素及L9（34）正交試驗(yàn)確定最佳提取條件。結(jié)果最佳提取工藝為乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、料液比1∶40、提取溫度60℃、回流提取2次、每次1.0 h，以此工藝測(cè)得榅桲中總多酚含有量為9.55 mg/g。結(jié)論驗(yàn)證試驗(yàn)表明優(yōu)選出的提取工藝穩(wěn)定、合理、可行。

榅桲；總多酚；提取工藝；正交試驗(yàn)

榅桲為薔薇科榅桲屬落葉灌木或小喬木榅桲Cydonia oblonga Mill.的果實(shí)［1］。榅桲果實(shí)芳香味濃，口味好，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，含有酚酸類、黃酮類、萜類、糖類、蛋白質(zhì)、揮發(fā)油、有機(jī)酸、維生素、礦物質(zhì)等多種成分［2］。具有補(bǔ)腦益心、健脾胃、健胃消食、降壓、降脂、止咳、止瀉等功效［3-5］，是一種天然的藥食兩用植物［6-7］。據(jù)文獻(xiàn)［8-10］報(bào)道，榅桲具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗?jié)兒涂鼓[瘤等活性，這些生理、藥理活性都與其所含的酚類成分有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)以榅桲果實(shí)為原料，采用Folin-Ciocalteu法優(yōu)選從榅桲果實(shí)中提取總多酚的工藝條件，為有效利用榅桲資源提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 藥材 榅桲2011年10月采自新疆阿圖什市上阿圖什鄉(xiāng)，經(jīng)中科院新疆生態(tài)與地理研究所植物分類研究室沈觀冕研究員鑒定為薔薇科榅桲屬榅桲Cydonia oblonga Mill.的果實(shí)；藥材在室溫下干燥，將干燥果實(shí)粉碎，得榅桲粉。

1.2 試藥 沒(méi)食子酸對(duì)照品 （中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110831-20120）；鎢酸鈉（Na2WO4·2H2O）、鉬酸鈉（Na2MoO4·2H2O）、硫酸鋰（Li2SO4）、磷酸（H3PO4）、磷鉬酸（24MoO3·P2O5·xH2O）、無(wú)水碳酸鈉（Na2CO3）、丙酮 （西安化學(xué)試劑廠）；甲醇、無(wú)水乙醇 （天津市百世化工有限公司）；鹽酸和溴水 （天津市河?xùn)|區(qū)紅巖試劑廠）；以上試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 儀器 KQ-100B型超聲波清洗儀（江蘇省昆山市超聲儀器有限公司）；EYELA-N-1100D-WD旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本）；電子天平 （YP5120型，上海光正醫(yī)療儀器有限公司）；UV-2550型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) （日本島津公司）；HH-4型智能數(shù)顯恒溫水浴鍋 （鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；DZF-6020型真空干燥箱 （上海一恒科技有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制［11］精密稱取沒(méi)食子酸對(duì)照品6.1 mg定容于100mL水中，得質(zhì)量濃度為61μg/mL的對(duì)照品溶液。精密吸取沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 mL，分別置于25 mL棕色量瓶中，加磷鉬鎢酸溶液1.0 mL，用水稀釋到14 mL，再用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30 min后，在500～900 nm波長(zhǎng)范圍光譜掃描，選擇757 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。在757 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，以吸光度 （A）為縱坐標(biāo)，沒(méi)食子酸質(zhì)量濃度 （C，μg/m L）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明，沒(méi)食子酸的質(zhì)量濃度在1.22～9.76μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其線性回歸方程為A=0.119 6 C+ 0.040 8，相關(guān)系數(shù)r2=0.999 3。

2.2 樣品中總多酚的提取及測(cè)定［12］精確稱取2.0 g榅桲樣品，按料液比加入有機(jī)溶劑，恒溫水浴回流提取后，將提取液過(guò)濾，減壓濃縮，定容置50 mL量瓶中，搖勻即得榅桲總多酚提取液即供試液。精密量取供試液1.0 mL，置于25mL棕色量瓶中，按 “2.1”項(xiàng)上方法操作，測(cè)定吸光度，代入回歸方程求C，按以下公式［13］計(jì)算提取液中總多酚的含有量。

W=C×稀釋倍數(shù)×V/m

式中：W為多酚含有量（mg/g）；C為多酚質(zhì)量濃度（mg/mL）；V為提取液體積（mL）；m為榅桲粉質(zhì)量（g）。

2.3 提取方法的選擇

2.3.1 提取方式的選擇 取2份2.0 g榅桲粉，每份按固液比1∶20加入無(wú)水乙醇，分別于室溫下超聲提取和40℃水浴鍋中回流提取1 h。分別過(guò)濾，定容至50 mL，精密量取1.0 mL于25 mL量瓶中，按“2.1”項(xiàng)上方法操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算總多酚的含有量。結(jié)果超聲提取和回流提取總多酚含有量分別為1.89和2.18 mg/g。選擇回流提取方法。

2.3.2 提取溶劑的選擇 取4份2.0 g榅桲粉，每份按固液比1∶20分別加入甲醇、乙醇、丙酮、水，于室溫下超聲波提取1 h，過(guò)濾，減壓濃縮及定容至50 mL，從中量取1.0 mL置于25 mL量瓶中，按 “2.1”項(xiàng)上方法操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算總多酚的含有量。結(jié)果總多酚含有量分別為6.05、3.89、1.47和1.10 mg/g?？紤]到乙醇無(wú)毒、安全性高，選擇乙醇為提取溶劑。

2.4 單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)［12，14］以總多酚含有量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，分別考察提取溶劑、提取方法、含乙醇量、料液比、提取溫度、提取次數(shù)、提取時(shí)間對(duì)提取榅桲總多酚的影響。根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果、選擇對(duì)影響總多酚提取效果的4個(gè)主要因素3個(gè)水平、用L9（34）進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選擇最佳提取工藝條件，并通過(guò)方差分析考察各因素的顯著性。

3 結(jié)果

3.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)的影響 設(shè)定提取次數(shù)為1次，料液比20倍，提取時(shí)間1 h，提取溫度為40℃，分別以 20%、40%、50%、60%、70%、80%、100%的乙醇溶液為提取溶媒，考察乙醇對(duì)榅桲中總多酚提取率的影響。結(jié)果總多酚含有量分別為3.53、5.27、5.37、5.68、5.53、5.31和2.19mg/g。

3.2 料液比的影響 設(shè)定提取次數(shù)為1次，乙醇為60%，提取時(shí)間為1 h，提取溫度為40℃，分別以固液比1∶10、1∶20、1∶30、1∶40為料液比，考察不同料液比對(duì)榅桲中總多酚提取率的影響。結(jié)果總多酚含有量分別為3.75、5.82、6.44、6.50 mg/g。

3.3 提取溫度的影響 設(shè)定提取次數(shù)為1次，料液比為40倍，提取時(shí)間為1 h，乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%，分別以30、40、50、60、70、80℃為提取溫度，考察提取溫度對(duì)榅桲中總多酚提取率的影響。結(jié)果總多酚含有量分別為3.77、3.81、4.58、4.67、5.11、4.01mg/g。

3.4 提取次數(shù)的選擇 設(shè)定料液比為1∶40，提取時(shí)間為1 h，乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%，提取溫度為70℃，分別提取1次、2次、3次、4次，考察提取次數(shù)對(duì)榅桲中總多酚提取率的影響。結(jié)果總多酚含有量分別為5.68、5.72、5.81、5.45 mg/g。

3.5 提取時(shí)間的影響 設(shè)定提取次數(shù)為1次，料液比為40倍，乙醇為60%，提取溫度為70℃，分別以0.5、1.0、1.5、2.0 h為提取時(shí)間，考察提取時(shí)間對(duì)榅桲中總多酚提取率的影響。結(jié)果總多酚含有量分別為5.92、6.24、6.51、5.27 mg/g，實(shí)驗(yàn)因素水平見(jiàn)表1，并采用正交試驗(yàn)篩選最佳提取工藝。

表1 因素水平

3.6 正交試驗(yàn)結(jié)果［14］由正交試驗(yàn)結(jié)果 （見(jiàn)表2）可知，各考察因素對(duì)提取效果的影響大小順序?yàn)椋篊＞A＞D＞B。榅桲總多酚最佳提取工藝條件為A1B1C3D2，即提取溫度為60℃，提取時(shí)間1 h，料液比為1∶40，提取溶劑60%乙醇水溶液。

由方差分析結(jié)果 （表3）表明，因素A、C有顯著性差異，而因素B、D無(wú)顯著性差異。

表2 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析

3.7 最佳工藝條件的驗(yàn)證 取榅桲粉3份，每份2 g，根據(jù)最佳提取工藝A1B1C3D2進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，測(cè)得榅桲總多酚的平均含有量為9.55 mg/g，即1 g樣品中含9.55 mg榅桲總多酚。表明本實(shí)驗(yàn)所確定的工藝條件合理，穩(wěn)定，可行。

4 討論

關(guān)于提取方法的選擇，比較了回流法、超聲法的提取效率，結(jié)果表明用回流法的提取效率最佳。通過(guò)對(duì)不同提取溶劑甲醇、乙醇、丙酮、水的考察，結(jié)果表明用甲醇的提取效率最佳，其次是乙醇的提取率高，考慮到乙醇安全、無(wú)毒，選擇了乙醇作為提取有機(jī)溶劑。故本研究在此基礎(chǔ)上，利用正交試驗(yàn)法對(duì)榅桲總多酚的提取工藝進(jìn)一步優(yōu)化。結(jié)果顯示最佳提取工藝為：提取溫度60℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%、料液比為1∶40、提取時(shí)間為1.0 h。在此工藝條件下從1 g榅桲中可提取得到9.55mg多酚類物質(zhì)。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)榅桲總多酚的提取方法進(jìn)行了初步探討，為進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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R284.2

：B

：1001-1528（2015）07-1610-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.07.051

2014-04-12

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目 （31360078）；國(guó)家杰出青年基金項(xiàng)目 （30925045）；新疆天山英才培養(yǎng)基金項(xiàng)目 （Y0382026）

哈及尼沙 （1973—），女 （維吾爾族），博士，副教授，從事藥用植物研究。Tel： （0991）4362471，E-mail：ajinsa@ sina.com

*通信作者：阿吉艾克拜爾·艾薩（1965—），男 （維吾爾族），博士，研究員，博士生導(dǎo)師，從事植物資源開(kāi)發(fā)利用研究。Tel：（0991）3835679，E-mail：haji@ms.xjb.ac.cn